Диметиловый эфир 2, 4, 6-триамино-3-оксофеноксазин-1,9- дикарбоновой кислоты в качестве ингибитора днк-зависимого синтеза рнк

 

Диметиловый эфир 2,,6-триамино-3 оксофеноксазии-1 ,9-ликарбоновой кислоты формулы СООСНз (JOOCRi, .м Шг в качестве ингибитора ДНК-зависимого синтеза РНК. (Л

COOS СОВЕТСНИХ

COll

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К A ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

t()()(" С О К

N ЯН2

00ОСБА СООСБ5

NH) Нг г

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 2798484/04 (22) 19.07.78 (46) 23 ° 04.92, Бюл. N 15 (71) Ленинградский технологический институт им. Ленсовета и Онкологический научный центр АМН СССР (72) О.ф, Гинзбург, F Н. Глибин, Н.И. Колодкин, Л.П. Коробицын, М.А. Кривцова, Н.П. Лотова, 3.П. Софьина и Н.П. Яворская (BG) (53) 547.867.6.07 (088.8) (56) Машковский М,Л. Лекарственные средства. М., Медицина, 1972, — т. Тт, с. 508, (54) ДИМЕТИЛОВЫЙ ЗФИР ?,4,6-ТРИАМИНО"3-ОКСОфЕНОКСАЗИН-1,9-ЛИКАРБОНОИзобретение относится к новому биологически активному соединению, а именно к диметиловому эФиру 2,4,6триамино-3-оксофеноксазин-1,9-дикарбоновой кислоты формулы в качестве ингибитора ARK-зависи- " мого синтеза РНК.

Указанное свойство позволяет предполагать возможность применения этого соединения в медицине.

„.SU„„790658 (51)5 С 07 D 265 38 А 61K 31 535

ВОЙ КИСЛОТН В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРА

ДНК-ЗАВИСИМОГО СИНТЕЗА РНК (57) Диметиловый эфир 2,4,6-триамино-3-оксофеноксазин-1,9-дикарбоновой кислоты формулы в качестве ингибитора дНК-зависимого синтеза РНК.

Известен противоопухолевый антибиотик (актиномицин П), являющ)ийся веществом, продуцируемым грибом ,Actinomyces chrysomaj.1us, который наиболее часто применяют для подавле ния РНК-полимеразной реакции.

Целью изобретения является расши" рение ассортимента соединений, которые могут найти применение в качестве противоопухолевого веществ.

Предлагаемое соединение используют в качестве вещества, являющегося ингибитором ДНК-зависимого синтеза

PI IIK, Его получают путем взаимодействия

2-нитро-3-окси-4-аминобензойной кислоты с карбобензоксихлоридом в среде безводного бензола в присутствии

790650 триэтиламина с последующим восстановлением образующегося метилового эфира ?-нитро"3-окси"4.-карбобензокси— аминобензойной кислоты гидросульфитом натрия в среде метанола до метилового эфира 2-амино-3-окси-4-карбобензоксиаминобензойной кислоты, взаимодействием с феррицианидом калия в фосфатном буфере (рН 7,2), 1О в среде метанола, гидрированием образующегося диметилового эфира

4,6-дикарбобензоксиаминоцианнабориновой кислоты в присутствии палладиевой черни и окислением образующе- 15 гося при этом лейкосоединения кисло" родом воздуха, Пример. Раствор 2 г метилово го эфира 2-нитро-3-окси-4-аминобензойной кислоты и 5 мл триэтиламина в

35 мл безводного бензола нагревают до кипения и добавляют ? г карбобен" зоксихлорида в 3 мл безводного бензола, смесь кипятят 3 ч. Отфильтровывают осадок гидрохлорида триэтил- 25 амина, фильтрат упаривают досуха, остаток обрабатывают абсолютным спир

ToH -) выделяют ?-нитро-3-карбометокси-6-карбобензоксиаминофенолят триэтиламмония. Т,пл, 120 r (с разл.) . щ

Оранжевые кристаллы из смеси бензол" петролейный эфир.

Найдено,t: С 59,32; Н 6,84;

N 9,38, С22 }17 } } }307

Вычислено,."„ ; r. 59,05; Н 6,53;

N 9,39.

Метиловый эфир ?-нитро-3-окси-4" карбобензоксиаминобензойной кислоты получают обработкой водного раствора полученного фенолята разбавлен46 ной соляной кисло<-ой. Т.пл. <<< С (из смеси бензол — петролейный эфир) .

Найдено,r,: С 55,88; Н 4,16;

N 8,14, 1б 1Ф 2. 7

Вычислено,", : С 55, 9 Н 4,08;

N 8, 9.

K раствору 1 г метилового эфира

2-нитро-3-окси "4-карбобезоксиаминобензойной кислоты в 100 мл метанола добавляют 30 мл насыщенного раствора гидросульфита натрия при комнатной температуре и перемещивании. Через

1 ч реакционную массу разбавляют водой до 100 мл и отфильтровывают метиловый эфир 2-амино-3-окси-4-кар. бобензоксиаминобензойной кислоты.

Выход 0,5Я г (<3 ;). T.ïл, 1ОЯ-1ОЯ

Йайдено,й: N 8,69.

С} H & N20, Вычислено " N 8 86

Для получения диметилового эфира

4,6-дикарбобензоксиаминоцианнабариновой кислоты раствор 0,3 r метилово го эфира ?.-амино-3-окси-4-карбобензоксиаминобензойной кислоты в 100 мл метанола по каплям добавляют при перемешивании в 250 мл фосфатного бу фера (рН 7,2), нагретого до 50 С.

<Полученный .раствор по каплям при энергичном перемещивании добавляют к раствору 4,5 г Феррицианида калия в 50 мл Фосфатного буфера (рН 7,2) перемешивают 2 ч при 50 С и оставляют на ночь при комнатной температуре. Отфильтровывают осадок, промывают его последовательно водой, спиртом, эфиром, Выход близок к количественному. T.ïë. 236-?37ОС, красные кристаллы из водного диметилформамида). Я 1 „, нм (5 10 4) (метанол):

42Р (2,10) (плечо), 441 (2,26).

Найдено,",: С 61,08; И 4,46;

И 9 03.

С Ы}126Ц409

Вычислено,"",: С 61,34; }} 4,18;

И 8,94„

К суспензии 0,3 г диметилового эфира 4,6-дикарбобензоксиаминоциннабариновой кислоты в 30 мл диоксана добавляют равное количество cseжеприготовленной палладиевой черни и гидрируют при атмосферном давлении в течение нескольких дней, периодически продувая систему водородом для удаления образующегося углекислого газа. Окончание гидрирования контролируют методом TCX на пластинах Силуфол в системе изоамиловый спирт муравьиная кислота - вода, 3:2:1. Светло-желтый раствор отфильтровывают от катализатора, катализатор промывают

15 мл воды, объединяют фильтрат и промывные воды и оставляют на воздухе на 1, ч, Отфильтровывают темнокоричневые хлопья диметилового эфира

2,4,6-триамино"3-оксофеноксазин-1,gдикарбоновой кислоть<. Т,пл . 300 С. длцк, нм (g 10 ) (метанол)1: 260 (3,"), 44О (2,26), Найдено, : С 51,68; Н 4,50, С Н1 N+0< Н О <

Вычислено,/: С 51,07; H 4,29, При добавлении к раствору диметилового эфира 2,4,6-триамино-3-оксофеноксазин-1,9-дикарбонгвой кислоты

79065 " 6 тивным ингибитором РНК-полимеразной реакции (см.таблицу).

Испытуемое соединение (ингибитор) Доза ингибитора, мкг/мл

ВключеТорможение ние метки в РНК, имп/минх

110-+ синтеза

P1!К,", Контроль

Предлагаемое сое39,6

43,6

4Р,3

60,0

2,52 динение

2,35

2,16

1,67

Актиномицин

10 4,03

10 3,23

1n 3,09

10 2,43

4,4

22,6

25,9

41, с.

Корректор А. Обручар

Редактор Т. !!!арганова Техред М.Моргентал

Заказ 2310 тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-изд,.тельский комбинат "Патент, г.ужгород, ул. Гагарина,!01 в натрийфосФатном бункере (p0,1, рН 7,0) раствора ДНК из селезенки крупного рогатого скота марки А) наблюдаются характерные изменения в спектре поглощения указанного диметилового э9ира, свидетельствующие о. его комплексообразовании с ДНК. Полоса поглощения (% „ 455 нм) гипохромно смещается в длинноволновую часть спектра на 30 нм. По данным спектрофотометрического титрования константа комплексообразования К = 1,5 ° 10, величина В, характеризующая количество молекул комплексона, приходящееся на пару оснований ДНК, составляет 0,7-0,8.

Для полученного целевого диметилоВого э )ира ЕД, т° . е. доза, вызывающая 503-ное торможение синтеза суммы нуклеиновых кислот в системе краткосрочных 20 ч клеточных культур С-37, z, 517РУ, опухоли Эрлиха и NK/IV составляет 10, 10-50, 10-50 и 10-50 мкг/мл соответственно.

Приведенные данные свидетельствуют о том, что диметиловый эфир(?,4, 6-триамино-3-оксопеноксазин-1,9-дикарбоновой кислоты на четырех изученных культурах клеток показал способность подавлять синтез нуклеиновых кислот.

На основании изучения включения метки (Н уридина) в нуклеиновые кислоты культуры эмбриональных дипло— идных фибробластов человека в присут— ствии диметилового эпира 2,4,6-триамино-3-оксофеноксазин-1,9-дикарбоновой кислоты установлено, что названное вещество является высокоэ ек-.щ " р и м е ч а н и е. усредненные данные из трех параллельных опытов, Как следует из приведенных данных диметиловый э ир 2,4,6-триамино-3-оксофеноксазин-1,9-дикарбоновой кислоты является более эффективным ингибитором Д!!К-зависимого синтеза Р!!К, чем актиномицин В обладает значительной широтой действия (э фективен в низких и высоких концентрациях) .