Способ получения бактериальногоферментного препарата мацерирующегодействия

 

<в81 7052

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИ ИТИЛЬСТВУ

Союз Советскик

Социалистических

Республик

- О"

ЫГГ ., (61) Дополнительное к ввт. саид-ву— (22) Заявлено 15,1079 (21) 2846486/30-15 (51}М. Клз

С 12 М 9/06 с присоединением заявки Йо—

Государственный комитет

СССР по деаам изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано 300381. Бюллетень 149 12

Дата опубликования описания 050481 (53} УДК 577. 15. 07 (088.8) (72) Авторы изобретения

Г. Б. Бравова, В. И, Дуда, К. A. Калун

В. В. Сакович, М. В. Самойлова, A. М.,"Ж" Н. Козловау-" иро.Я(:;Я,,:1:. "ижевцов

l3 хни ЫЙЙ .ййститут ный ЩЩ @вз д

Всесоюзный научно-исследовательский би

Институт микробиологии AH СССР и Центр исследовательский институт лубяных (71) Заявители (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО ФЕРМЕНТНОГО

ПРЕПАРАТА МАЦЕРИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ

Изобретение относится к микробно- Ределяется прямым спектрометрированилогической промышленности, производя- ем при длине волны 235 нм. щей бактериальные и ферментные препа- к недостаткам способа относится раты, и может быть использовано в про- большая продолжительность культивимышленности гервичной обработки лубо- 5 рования продуцента, а также наличие волокнистых культур и сельском хозяй- целлюлозы в ферментативном комплексе стве для облагораживания грубых кор- препаРата, что значительно снижает мов. о крепость технологического льноволокИзвестен способ получения фермент- на при применении препарата в промт« ных препаратов с высоким содержанием О ленности первичной обработки льна. транс-элиминазы пектиновой кислоты, Известен также способ получения обладающих повьваенной способностью к пектолитичеекого,ферментного препадеструкции растительных материалов (1,. Рата (21. для получения этих препаратов про- Для получения ферментного препараводят культивирование Вас1 11нв ро1)- 15 та культивируют анаэробный микроорга-

myxa при 28оС в течение 7-50 ч в за- HH)v Clostridium felsineum 22 при висимости от емкости реакционного со- 37 С в течение 48 ч на среде, содерсуда РН питательной среды, перед за- . жащей в качестве источника углерода севом доводят до значения 6,5-7,0. декстуин.

Культуру выращивают в колбах Эрлен- 20 К недостаткам способа относятся мейера на качалках при 200 об/мин . высокая стоимость и дефицитность ис или в ферментерах с режимом аэрации точника углерода в питательной сре«.

0,5-0,85 (объем воздуха/объем среду де, а также значительная продолжив мин). Активность трансэлиминазы тельность процесса культивирования пектовой кислоты в культуральной жид- 25 продуцента. кости 1500-4500 ед/мл (эа единицу Наиболее близким к предлагаемому активности фермента принимается.та- способ получения бактериального феркое его количество, которое вызывает ментного препарата мацерирующего в условиях реакции увеличение экстинк- действия предусматривает. выращивание ции на О, 1 за 10 мин). Активность оп . анаэробной культуры Сlostridium pectl817052,nofermentans 15 при 30оС в течение чается мешалка при низких числах обо Зб-48 ч с дальнейшей фильтрацией рртов. Выращивается продуцент при культураггьной жидкости на барабанном температуре 37-42ОC в течение 20вакуум-фильтре с применением микрози- 24 ч. К этому времени заканчивается ла, упариванием в вакууме и концент- логарифмическая стадия равития кульрированием методом осаждения ацето- туры и в культуральной жидкости ианом или распылительным высушиванием

5 капливается максимальное количество на сушилке типа "Niro Atomizer". Пек- ферментов, отвечающих за мацерацию тин-транс-элиминазную активность оп- растительной ткани. По окончании проределяли по увеличению оптической цесса выращивания культуральную жидплотности при длине волны 235 нм. дикость фильтруют на барабанном вакуумПри этом за единицу активности фер- фильтре с применением перлита, конмента принималось такое его коли- центрируют на вакуум-выпарной устачество, которое вызывало увеличение новке при 30 С до содержания сухих о о оптической плотности на 0,555 за 1 ч веществ 1.2 Е, затем в концентрат дов условиях реакции. К концу культи- бавляют 0,1 СаС l и 12% ИаС1 и сушат вирования в культуральной жидкости 15 на распылйтельной сушилке при следуо накапливалось О, б ед/мл пектин-транс- ющем режиме: Т sÄ = 130-135 С, Те,„

-элиминаэы. Для удаления воздуха при = б0-65 С. выращивании строго анаэробного продуцента C los tr i di um pect i nof ermentans: . Tl р и м е р 1. Sac i 11цб ci rculans

1Б питательнУю среду после стелили- о 31 выращивают в ферментере емкостью зации дополнительно выдерживают при 250 л., Объем питательной среды100 С в течение 30 мин . После этого 1 00 л, ее состав в процентах следуюсреду быстро охлаждают и засевают . щий: свекловичный жом — 2; СаС0 посевным материалом Ватем добавля 0 5, (НН ) Нр0 0 75 ° КЙ р0 ют стерильную смесь паРафина и вазе- gg кукурузный экстракт — 0,5. Питательлина (1:1) длЯ образованиЯ пленки, ную среду стерилизуют при 1 ати в тезашищающей кУльтуральнУю жидкость от, чение 1 ч. Затем среду охлаждают до воздуха незаполненной части Фермен- 50оС значение рН доводят до 8,0 стетера. Все операции по передавливанию рильным раствором конггентрированной компснентов питательной среды в феР" рр щелочи и засевают посевным материаментеР и охлаждению ее после стерн- лом в количестве 5% Культивируют лизации производятся стерильным инерт продуцент при температуре 37 С в теным газом, что позволяет избежать ко" чение 24 ч без подачи воздуха. В такта с кислородом воздуха Все меры культуральной жидкости по окончании по созданию стРого анаэробных Усло процесса культивирования определяютвий культивированиЯ продУЦента Услож- ся активности следующих AepMeHToB:

3S няют технологию и повьыают стоимость пектин-транс-элиминазы прямое спектконечноГо продукта. Кроме того, в фер- рофотометрирование по пине волны ментативном комплексЕ препаРата, полУ 235 нм; за единицу активности приниченного данным способом отсутствуют мается такое количество Фермента гидролитические и лиазные Ферменты 4О которое катализирует расщепление эндо-действия, активность пектин- субстрата до образования 1 ммоля

-транс-элиминазы недостаточно. высока® дигалактуроновой кислоты. Коэффициент молярной экстинкции принимается равЦель изобРетения - повышение ак- ным 4800 моль см ), эндо-полигалактивности пектин-транс-элимнназы и рас-g$ туроназы (вискозиметрическим методом), ширение ферментативного комплекса экзо-полигалактуроназы (по увеличепрепарата. нию количества восстанавливающих альдегидных групп титрометрическим

ПоставленнаЯ Цель достигаетсЯ тем, методом). Определение активностей что в качестВе продуцента используют о ферментов в культуральной,жидкости факультативно-анаэробный микроорга- дало следующее результаты, ед/млг низм Bacillus circulans 9 31, а выра- Пектин-транс-элиминазы 1,5 щивание проводят в течение 20-24 ч Эндо-полигалактуроназа 1,5 при температуре 37-42 С, причем РН о

Экзо-полигалактуроназа: 3,4 питательной среды перед посевом до- Культуральную жидкость подают на водится до 8,0-8,4. И фильтрацию для отделения биомассы

Предлагаемый способ осуществляет- и нерастворимых остатков питательной ся следующим обРазом. среды. Фильтрат культуральной жидкос о

Питательная среда стерилизуется ти концентрируют при 30 С на вакуумпри 1 ати в течение 1. ч, охлаждается выпарной установке до содержания судо 50 С, значение РН доводится до ео хих веществ 11,5 В. К концентрату до8,0-8,4 стерильным раствором концент- бавляют 0,1% СаС1 и 11,5% МаСl и . рированной щелочи и засевается посев- высушйвают на распылительной сушилке. ным материалом в количестве 5%. Для Выход ферментного препарата Мацеробаравномерного распределения культуры циллин ГЗх составляет 4 кг со 100 л четыре раза в сутки .на 3-5 мин вклю- 65 культуральной жидкости.

817052

Составитель Т. Тулякова

Редактор И. Лысогорова Техред Н.Келушак Корректор М. Демчик

Заказ 1232/32

Тираж 528 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", .г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Пример 2. Bacl) lus clrculans

31 выращивают в 3-х литровых колбах.

Состав питательной среды и режим стерилизации те же, что и в примере 1. рН после стерилизации доводят до значения 8,2 и засевают посевным материалом в количестве 5%. Выращивают продуцент при 40 С в течение 22 ч. В культуральной жидкости определяют активности ферментов, ед/мл: .Пектин-транс-элиминаза 2,0 . Эндо-пйтигалактуроназа 2,3

Экзо-полигалактуронаэа 3,8

Пример 3. Ьас1llus circulans

31 выращивают в 3-х литровых колбах..

Состав питательной среды и режим стерилизации те же, что и в примере 1. рН после стерилизации доводят до значения 8,4 и засевают посевным материалом в количестве 5%. Культивирование проводят при температуре 42 С в течение 20 ч. В культуральной жидкости определяют активности Ферментов, ед/мп:

Пектин-транс-элиминаза 1,7

Эндо-полигалактуроназа 1,8

Экзо-полигалактуроназа 3,2

Формула изобретения

Способ получения бактериального ферментного препарата мацерирующего.действия, заключающийся в выращивании продуцента глубинным методом, фильтрации .культуральной жидкости и распылительном высушивании сконцентрированного фильтрата культуральной жидкости, о т л и ч а ю щ и й5 с я тем, что, с целью повыаения активности пектин-транс-элиминазы и расажренкя ферментативного комплек- са препарата, в качестве продуцента используют факультативно-анаэроб® ный микроорганизм 8ас1llus с lrculans

В 31, а выращивание проводят в течение 20-24 ч при температуре 37-42 С, причем рН питательной среды перед посевом доводят до значения 8,0-8,4

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Заявка ФРГ 9 2054948, 1973.

2. Авторское свидетельство СССР

;щ 9 .622838, 1978.

3. Бравова Г. Б. и др. Технология культивирования анаэробных бактерий рода С1ова tdlum — продуцентов пектолитических ферментных препаратов.

25Сб. Ферменты. Получение и применение в народном хозяйстве", Труды

ВНИИсинтезбелок Вып.. 2, М., 1974.