Патент ссср 826244

 

ОПИСАНИЕ 1

ИЗОБРЕТЕНИЯ

СОЮЭ Севетских

Сециавистических

Реснублик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТНЗЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. саид-ву (22) Заявлено 040679 (21) 2790689/28-13 (51) N с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет

Государственный комитет

СССР но девам изобретений и открытий

G 01 И 33/62

Опубликовано 3G0481. Бюллетень № 16 (53) УДК615. 397 (088.8) Дата опубликования описания 3004.81 (72) Автор изобретения

С.П. Сяткин

1 !

Уйиверситет Дружбы народов им. Патриса Лумумбы (71) Заявитель (54) СПОСОБ КОЛИЧЕС1ВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

БЕЛКА В ПРОБАХ

Изобретение относимся к биохимии и касается биохимических исследований.

Известен способ количественного определения белка в пробах путем выделения его из пробы с последующей последовательной обработкой растворами Ыа2СО, CuSO<, цитратом натрия и реактивом Фолина (1 ).

Однако известный способ не обеспечивает высокой точности.

Цель изобретения — повышение точности способа.

Эта цель достигается путем выделения белка из пробы с последующей 15 последовательной обработкой растворами Na>CO+/ CuS04, цитратом натрия и фвактивом Фолина, при определении концентрации белка в тканях с повышенным содержанием липидов и пали- 20 сахаридов, белок выделяют путем одновременной обработки пробы 13-ным раствором дезоксихолата и 1 н. раствором NaOH, взятых в соотношении

1:8 ° 25

Способ осуществляют следующим образом.

К 0,1 мл анализируемой пробы прибавляют 0,8мл 1н. йаСн, 0,1мл 13- ного дезоксихолата натрия и 4 мл реакти. З0 ва С. Смесь встряхивают и после просветления добавляют 0,5 мл реактива

Фолина-Чиокальте и немедленно перемешивают. Полученную смесь инкубируют при комнатной температуре 30.мин в темноте. Затем оптическую плотность окрашенного раствора измеряют на

СФ-16 при 750 .нм. Для построения калибровочнОй кривой используют кристаллический бычий альбумин.

Способ используют для исследования концентраций белка в тканях с повышенной жировой инфильтрацией: злокачественные гепатомы, малигнизирующая и регенерирующая печень.

Пример . Частичную гепатоэктомию проводят по методу Нщд1пв и Anderson. Малигнизацию печени крыс вызывают диэтилнитрозоамином (ДЭНА), который вводят внутрибрюшинно один раз в неделю в течение двух меcapes из расчета 100 мг/кг веса животного. Всего каждому животному вводят 154 мг канцерогена.

Штамм гепатомы Г-. 27 пассируют на самцах беспородных крыс. Штаммы гепатом Г-22а {солидный вариант), Г-60, Г-61, Г-48, Г-46 пассируют на самцах мышей линии СЗНА. Животных забивают путем декапитации. Печень не.826244

Статистические показатели

Количест во живот

HhlX

Критерий Стъюдента

Ткань

+%

M+m Ж 3ИИИ

<0,001 <0,001

10 123,60+4,26

Гепатома Г-27

Печень ж.он. (Г-27) 10 76,90+5,01 )0,05 о

4 160,0014,07 <0,001 <0,01

Гепатома Г-22

Печень ж.он. (Г-22) 4 141,60+1,74 < 0,001

4 144, 00+5, 23 < 0,001 )О, 05

Гепатома Г-60

Печень ж.он. (Г-б О)

Гепатома Г-61

4 146, 00+5,81 < 0,001

4 122,60+8-,25 . < О, 05 < О, 05

Печень ж.он. (Г-б 1) 4 105,20+1,63 ) О, 05

Гепатома Г-48

4 145,80 6,08 <0,001

Печень ж.он. (r-48) 129,15+2,23 < 0,001

Гепатома Г-46

104,00+4,07 )0,05 ) 0,05

Печень .ж.он. (Г-46).

105,90+5,10 )0,05

Печень интактного животного (крысы) 88,50+2,34

Печень интактного животного (мыши) 100 40+5 08

Малигнизирующая печень

117,41т5,43 <0,001

Печень контрольных животных

92, 57+ 3, 65 медленно извлекают, перфузируют на льду дистиллированной водой, промокают бумажными фильтрами, тщательно очищают от соединительной ткани и взвешивают. Опухолевую тканЬ берут . в логарифмической фазе роста, преимущественно с периферийных участков, исключая возможность попадания в пробу некротической ткани. В опытах используют ЗЗЪ-ный свежеприготовленный гомогенат (из расчета 1:2 веса на объем) . Концентрацию белка в ткани вы о ражают в мг/г сырого веса.

Результаты опытов подвергают статической обработке методом Монцевичюте-Эрингене с использованием фактора Монденгауэра. Различия между средними арифметическими (М) расценивают как достоверные при значении р (О, 05.

Данные опытов представлены в таблице (концентрация белка в ткани печени регенерирующей, малигнизирующей, интактных животных и в ткани злокачественных гепатом).

826244

Продолжение табло), ы

Статистические показателц

M -1 w«+ Критический Стьюдента

z«»" и" ""

$w .1

Количество животных

Ткань

Регенерирующая печень 118

101.27+3,65 (0,001

Печень ложноопери" рованных животных 4

67,33+2,52 животное-опухоленоситель; генеральное среднее; среднее квадратичное отклонение; вероятность различий генераль-. ных средних для опытной (гепатома и печень ж.он.) и контрольной печени интактного животного групп биообъектов; вероятность различий генерального среднего для опытной (гепатома) и контрольной печени ж.он. групп биообъектов.

Ж.он.

««М

m. %%«

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор Е. Дичинская Техред Н.Граб Корректор М. Коста

Заказ 2368/33 Тираж 907 Подписное

ВИИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП Патент, r.Óærîðoä, ул.Проектная, 4

В таблице установлено высокодос- товерное увеличение содержания белка в ткани малигнизирующей и регенерирующей печени, а также в ткани всех исследованных злокачественным гепатом, кроме штамма .гепатомы Г-46, в сравнении с соответствующими контрольными тканями. Увеличенным также оказалось содержание белка в ткани печени животных-опухоленосителей со штаммами гепатом Г-22, Г-60 и Г-48.

Эти результаты показывают, что по- 35 вышенное содержание белка характерно для тканей с усиленной клеточной пролиферацией как в норме (регенерирующая печень), так и при патологий (малигнизирующая печень, злокаче- 40 ственные гепатомы) .

Предлагаемый способ позволяет существенно сократить время анализа (на 2-3 ч), делает его менее трудоемким и более точным, а также обусловливает его эффективное применение в исследовании проб с повышенным содержанием липидов и полисахаридов.

Способ количественного определения белка в пробах путем выделения его из пробы с последующей последовательной обработкой растворами Na, CuS цитратом натрия и реактивом Фолина, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, при определении концентрации белка в тканях с повышенным содержанием липидов и полисахаридов, белок выделяют путем одновременной.обработки пробы 1%-ным раствором деэоксихолата и 1 н. раствором NaOH взятых в соотношении 1:8.

Источники информации, принятые во внимайие при экспеРтизе

1. (.ouri О.H Roseraegh N.I., Farr А.L. and Вапда)) R.L. Protein

Меаьцгевеп through the Foiin Phenol

Reagent. Journal 8iologicai Chekfstiy

1951, V. 193, р 256-270.