Способ разделения смеси биологических частиц

 

Союз Советскии

Социапистическик

Респубпим

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН Ия

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ >879469 (6l ) Дополнительное к авт. свма-ву (22) Заявлено i 1.11.79 (21) 2836884/28" 13 с присоединением заявим РЙ (28) Приоритет

Опубликовано 07.1181 Бюллетень М 41

Дата опубликования описания 07.1 1.81 (5l)М. Кл.

G 01 и 33/48

5Ьеударстеениый комитет

СССР ав делам изобретений и еткрытиЯ

{ЬЗ) УДК537.363 (088. 8) Б.Б.Егоров, Б.А.Адамович, В.А.Неведков, 10;М.удотов и И.И.Иахонин (72) Авторы изобретения

Институт медико-биологических проблем (7l) Заявитель (54) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ СМЕСИ БИОЛОГИЧЕСКИХ

ЧАСТИЦ

Изобретение относится к физикохимической технологии, а именно к способам выделения и очистки биологических препаратов.

Известен способ выделения и очистки биопрепаратов путем электрофореза в свободном потоке 11 1, при котором в поток несущего буферного раствора инжектируют разделяемую смесь и по всей длине плоской электрофоретической камеры воздействуют электрическим полем в течение всего времени разделения. Под действием поля исходную смесь разделяют на ряд фракций, которые отбирают из потока коллектором.

Однако при известном способе невозможно испольэовать напряженность электрического поля выше 120 В/см в камерах с зазором более 7. 10 4м, при которых происходит лучшее разделение и высокопроизводительная очистка биологических препаратов.

Использование больших напряженнос тей электрического поля приводит к повышению температуры и возникновению значительных конвективных потоков, что снижает эффективность способа.

Целью изобретения является повышение точности способа и сохранение жизнеспособности клеток.

Поставленная цель достигается следующим образом.

Смесь биологических частиц разде" ляют путем внесения ее в буфертптй поток и воздействия на него электрическим полем, при этом на буферный поток электрическим полем воздействуют периодически.

Пример осуществления предлагаемого способа.

Проводят электрофоретическое разделение первичной суспензии клеток почки кролика. Состав компонентов буферного раствора (в расчете на

1000 мп):

Формула изобретения

Составитель Е.Сусликова

Техред А.Бабинец Корректор М.Помо

Редактор Т.Горькова

Заказ 9710/14 Тирам 910 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4,11 ммоль триэтайоламина

1 1 ммоль СН СООН

2,5 мкмоль MgCI 6Н 0

5 мкмоль СаС1

5 мкмоль глюкозы

285 мкмоль сахаРоэы

5 мг альбумина бычьей сыворотки, Продолжительность периода воздействия выбирают из условия установления в буферном потоке градиента температуры, при котором еще не происходит,конвективное перемешивание, т.е. 3 С на 0,3 мм..

По достижении такого градиента температуры напряжение снимают.с электродов, а охлаждение буферного раствора продолжают до его первоначальной температуры.

Поперечные размеры электрофоретической камеры CI д 3 i 100 мм, где

OI - величина зазора щели камеры, мм, К- ширина охлаждаемой поверхности камеры, мм.

Термостатирование камеры осуществ ляют охлаждением обеих поверхностей камеры. Начальная температура буфер" ного раствора 4 С, расход буферного раствора 1,2 мл/с (максимальная скорость буферного потока в центре камеры 4 ° 10" м/с) . Напряжение на электродах камеры 1800 В (напряженность поля в камере соответственно

180 ° 10 В/м . Длительность импульса составляет 2,5 с, продолжительность паузы 10 с. Максимальный перепад температур между наиболее нагретой

879469 4 частью буферного потока и охлаждаемой поверхностью камеры составляет

4 С. Результат разделения - 10 фракций, а по известному способу6 фракций.

Предлагаемый способ обладает такими преимуществами как: повышает точность и эффективность способа электрофореза в свободном потоке, расширяет возможности способа электрофореза. в свободном потоке, увеличивая число биопрепаратов, которые можно подвергнуть разделению; позволяет испольэовать высокие величины напряженности электрического поля для электрофоретических камер с зазором больше 1 мм.

Способ разделения смеси биологических частиц путем внесения ее в буферный поток и воздействия на него постоянным электрическим полем, 25 отличающи.йсятем, что, с т целью повышения точности способа и сохранения жизнеспособности клеток, на буферный поток электрическим нолем воздействуют периодически.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

"1. К.Aannig, H.Mirth "Tree-flow е1ес горйогез1s. Theoretical and

experImental Investigation" 2. PhysioI. Chem., 1209, 1975.