Способ определения активности пищевого пепсина

 

¹ 946!4

Класс 421, 5or

421, 10

СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Г. С. Инихов, Г. Ф. Вайнберг и А. В. Слиозберг

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ПИЩЕВОГО ПЕПСИНА

Заявлено 15 января 1951 г. за M 441500 в Гостехнику СССР

При определении активности пищевого пепспна применяетс» с,идующий метод. В два химические стакана отмеривают по 100 мл сборного натурального молока, которое подогревают до 35 . В первый стакан с подогретым молоком вливают 1 мл 1% íîãî раствора испытуемого порошк образного пепсина, а во второй — 1г 1%-ного раствора эталона (сычугкного фермента). По секундомеру отмечают начало свертывания мало. ка в каждом стакане. Активность пепспна вычисляют rro известной формуле.

Недостатком этого метода является то, что применение в качеств среды для свертывания натурального молока, химический состав которого является очень изменчивым, дает неодинаковые показатели активности пепсина для одной и той же партии прп проверке в разных местах или даже в одном месте на разном молоке. Это приводит к невозможности унифицировать оценку качества выпускаемого разными rrpvNrrprr»тиямп пепсина.

Описываемый способ отличается тем, что натуральное молоко, как среду для.,свертывания пепсина, заменяют искусственным молоком. изготовленным путем растворения сухого казеина в растворе гидрата окиси кальция (известковой воде). Активность исследуемого rrrпсина определяется по специально разработанной шкале.

Способ определения активности пищевого пепсина состоит из: а) приготовления искусственного молока; б) проверки пскусствс нное > молока на створаживание сычужным ферментом; в) опреде:нння активности пищевого пепсина.

Способ осуществляется следующим образом.

Приготовление искусственного молока. Готовят 10% -ный раствор окиси кальция (известковой воды), который выдерживают H(менее

24 час. Раствор гидрата окиси кальция можно хранить в течение года в герметически закрытом сосуде. Перед употреблением раствор гидрага окиси кальция фильтруют через плотную фильтровальную бумагу.

046)1 "1

Казеин растирают и ступке, просеивают через марлю, после чего от(3((ин()а(от 15 г и растворяют в 400 мл профильтрованного 10оо-ного раствора гндрата окиси кальция. Растворение казеина проводят в течение 2 1 ч хс. и колбе, закрытой резиновой или корковой пробкой. В теч«ннс нервых писти часов растворение ведут при нагревании, для чего. колбу «та(3»т и тсрмостат, нредварительно нагретый до 30 .

llpi1 тл(н«ратуре 30 ьыд«рживают два часа. Затсм постепенно новьина(от т«м(и ратуру до )0 . Дс(я лучшего растворения через каждые

30 м н н. I l(p(((гн и (киот и расти рают казеин в колбе стеклянной пало кой с ()с зн новым наконечником. После шестичасового раствор(и(((I Ilð» т hill(ратуре 30 — -50" казсчш в известковой воде выдерживают рсч(((я нрн комнатной тсмнсратуре сще 18 час., а затем проводят фильтрация) ч(p(3 ч(т(11)(c;Iλ ма))ли.

11«луч(и)1(ы и ф ильт рат я вляс тся искусственным молоком, который иснользуют !(;Is(анализа (ицсвого и«псина в течение 24 часов с. момента

ИЗГОТОБ:(Лl ИЯ СГО. (.од(ржание окиси кальция и пем должно находиться в пределах

0..006 l),01 r.

Проверка искусственного молока на створаживание сычужным ферментом. Правнлыгость приготовления искусственного молока проверяют

1l0 «го «но o()íî "f((ст()opаи;нваться от сычужного фермента.

Длш»ponvpl;I(готовят раствор сычужного ф(рмента следующим обра Iol: 0.25 г сычужного форс((сита активностью 85 или 100 тыс. ед.

pa«(I)ops(in) в 100 мл дистиллированной воды и выдерживают 15 — 20мнн. в водяной бане нри т«м(гсратуре 35 . Приготовленный раствор сычужного (1)срм«нта )н рс носят 13 бюретку иа 25 миллиметров, капилляр которой

1(одбнрсиот с таким расчетом, чтобы три ка((ли составляли 0,1 деления б(ор(ткн и скорость над(пня капли равнялась одной капли 13 секунду.

Псрс 1 нровсркой иа створаживапие к искусственному молоку остоt г рожно канлямн (ири постоянном перемсшиваиии, во пзоежание вьша1 . 1 дсч((ья хлоньеil казснпа), прибавляют 0.1 N раствор солянон кислоты до

1(олучс Ill(» к)(с (Ot()OCT((MO((OI(, p(t(3((OI(6 — 9,5 T .. Ооычно 1(B -00 M.(, MOлока тр«буется 18 — 26,5 мл кислоты. )кислотность молока в отдельных пробах онрс деляют титрованпс м его 0,1 U раствором NaOH. Молоко е с требус мой кислотностью наливают в две проонркн по 10 мл и иом(щают в водяную баи(о с. T(миературой до 40, где пробирки должны находиться на протяжении 13(его анализа.

Из бюретки, заполненной доверху раствором сычужного фермента, наливают в одну пробирку с молоком 3 капли, через 15 сек. во втору(о пробирку 4 — капли раствора съ(чужпого фермента. После прибавления фермента содержимое прооирок тщательно перемешивают и )io секундомеру засекают врем» с момента вп coHlf((в первую пробирку последней капли сычужного раствора.

По истечении (мин. молоко проверяют на створажнваемость. Если оно свернулось во второй пробпркс. от четырех капель в интервале между четвертой минутой и дс сятой секундой пятой минуты, а в первой пробирке, от трех капель — ио истечении пяти минут, то искусственное молоко считают приготовленным правильно и cl о используют для определения активности пищевого и«псина.

Если молоко в первой пробирке свернулось раньше пятой минуты, то такое молоко следует считать непригодным для определения активности пищевого поповна вследствие повышенной кислотности его.

В атом случае необходимо взять новую порцию- молока, подкислпв его меньшим количеством кислоты.

Л" 94614

М пробирки, в которой свернулось молоко

Лктивност< н«<ясного не«сина, ВЫРа)КЕННЛЯ В T«IC. Е;С.

100 (10 — 85

S0

75--70 б5

00 — 5.", 50 — 45

4 . 1

Ес IH italo )30 второй llpo()llph(. мо;1око II< c«(pH) 1och 13 уli»A»llllo(13p(. мя то к молоку следует прибавить I;ttcmTI,I. Доба«левис кислот«а не

;о должно превышать кислотностп молока, рашн)и 9,5 Т.

В том случае, когда сычужиьш фермент имсч T актпш<ость 100 ть(с. ед., то проверку створажп«аемости молока o(у)ц(стиля)от следуюпспм образом: в одну пробирку с нагретым молоком наливают " капли. в другую через 15 сек.— 3 капли раствора с1,1<ужпого фермента.

Если молоко свернулось в пробирке от трех капель в интервале м<жду четв(.ртой минутои ll д((11TQII (с h<< llдоп пятов м пнут ы. а В llpoOllpli< от двух капель — по истечении пяти минут, то молоко считают приготовленным правильно

Определение активности пищевого иепеииа. Пшцевой )сепспн. подле)кащий испытанию, растпрасот в ступке, llocil(чспo отвсшивают 0,25 г и переносят и колбу смкостью иа 100 мл. в которую наливают 70 мл дистиллированной воды и псремсшп«ают. 11осл(этого колоу погружают в водяную баню с температурой 40, г,l< 131,1;t(pit(è<3;Iloò "0 — 30 мпн. прп периодическом пс.ремешпванпп.

По окончании нагрева пи раствор и(пс ппа охлажд»ют и доводят дистиллированной водой до метки. т)цательпо «стрнхп«ают и фильтруют через плотньш бумажный фильтр.

В 9 пробирок наливают по 10 мл пс кусст«(нпс)го молока, подкисленного и проверенного па створажпванпе сычужным фермс птом.

Из бюретки в каждую пробирку пали«»<от раствор испытуемого щевого пепсипа в следуюи(ем порядокv: в )нрвую пробирку «алинак)т одну каплю, после:)того содержпмос пробирки 11(ремеи)ива)от и но с<кундомеру засекают время.

Через 15 сек. налива(от из бюрсткп «о вторую пробирку;1«е к»пли раствора пеисина, через слсдующие 15 с(к. наливают «Tp«T)ю пробирку три капли раствора и так вксиочптельно до девятой пробирки

На протяжении всего анализа, как и в случае проверки молока и» створаживаемость, все пробирки выдерживают «водяной оапс при температуре 40 .

По истечении 4 мип. после добавле)пся раствора Il(ll(нна «нерву<о пробирку производят просмотр всех пробирок для определснпя образования хлопьев створаживаемостп путем легкого встряхп«анин.

Просмотр пробирок начинают с первой пробирки, через 15 cct . Ilpoсматривают вторую пробирку. затем чсрсз 15 сек. третью пробирку и т.д.

Отмечают номер пробирки, в которой образовались хлопья молос1» в интервале между четвертой минутой и десятой секундой пятой минуты, и по следующей таблице устанавливают активность испытуемого пепснна.

Шкала для перевода номеров пробирок на активности пищевогo пепснна. л т

М 94614

Предмет изобретения

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Редактор Л. Н. Токмаков

Гр. 173

Подп. к геч. 5/1-1960 г.

Тираж 300. Цена 50 коп.

Информационно-издательский отдел.

Объем 0,34 и. л. Заказ 258.

Гор. Алатырь, типография № 2 Министерства культуры Чувашской АССР.

1. Способ определения активности пигцевого пепсина путем фиксации начала свертывания казеипа иод д< йствием испытуемого пепсина, отличающийся тем, что, в Jl(ëÿõ достижения большей точности определения, в качестве среды для спи ртьп;апия применяют вместо натурального молока подкисленный 11аствор сухого Казепна и гидрате окиси кальция.

2. Прием выцолис пня способа по )I. 1. о т л и ч à 10 ьц ий сsl тем, что приготовленный раствор сухого казенна в гидрате окиси ьальция разливают в 9 пробирок, в которые при температуре 40= добавляют испытуе— мый пецсин, постечипнио увеличивая его количество в каждой пробирк от одной до девяти капель и по порядковому номеру пробирки, где прсизошло свертывание искусственного молока, в зависимости от количества прибавленных капель по специально разработанной п1кале определяют активность пепсииа в принятых единицах.