Способ определения антикалликреиновой активности плазмы

 

Союз Советских

Социалмстмчесиих

Реслублнн (E 1,) К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 28.12.79 (21) 2882914/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23 ) П ри ори тет

Опубликовано 07.02.82. Бюллетень ¹ 5

Дата опубликования описания 07.02.82 (5!)М. Кл.

6 01 и 33/74

Гооударетпеиый комитет

СССР по делан изо4ретаиий и открытий (53) УДК 612.015.. 1 (088. 8 ) (72) Авторы изобретения

М. С. Суровикина и Е. Е. Фомина

Московский областной ордена Трудового Кра ного Диаменй1, научно-исследовательский клинический и1 с1итут им. М. ф. Владимирского (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИКАЛЛИКРЕИНОВОЙ АКТИВНОСТИ

ПЛАЗМЫ КРОВИ

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике воспапитепьных забопеваний, Известен способ опредепения антикаппикреиновой активности ппазмы крови путем биохимического исследования ее t.Q.

Однако известный способ не обеспечивает высокой точности определения.

Uem изобретения — повышение точности способа.

° Бель достигается тем, что способ опредепения антикаппикреиновой активности плазмы крови осушествпяют путем биохимического исспедования ее, ппазму крови донора инкубируют при 61-62 С и

15 рН 2,5-3,2 в течение 15-20 мин, затем устанавпивают рН 7,5-7,8 к 0,001l,0 мп полученной смеси добавняют плазму обспедуемого и ингибитор каппикреина, инкубируют 40-60 мин, затем попу. 20 ченным инкубатом обрабатывают изопированный рог матки, по сокращению которо о определяют антикалликреиновую акти ность плазмы крови.

Способ осушествпяется спедуюшим образом.

Непосредственно перед проведением анапиза ипи за 1 день до него готовят стандартную смесь каппикреина с кининогеном. Дпя этого используют пиофипизированную ппазму доноров, пибо объединяют свежую ппазму ипи сыворотку крови здоровых доноров ипи больных, разводят равным объемом физиоиогического раствора, добавляют 1 н. НС1 до рН 3, о прогревают при 61 в течение 18-20минохлаждают до 2-4 С и нейтрапизуют

1 н. М аОН той же температуры до рН

7,5-7,7, прибавпяют равный объем трисНС1 буфера той же температуры (попу чают пятикратное разведение исходной и пазмы) .

Стандартную смесь хранят топько в хоподипьнике при 2-4 С. В течение про0 ведения всех этапов исследования эту смесь содержат в хоподной педяной бане (для предотвращения "спонтанного" образования KHHHHQB). 1 ининогенаэную акИсточники информации, принятые во внимание при экспертизе о 1. Гамазков О. А. и Комиссарова Н. B.

Метод одновременного определения канликреина, плаэмина и их ингибиторов в плазме крови человека. - Бюллетень экспериментальной биологии и медицины .

1976, No 5, с. 632-634, 1111ИИ1111 Заказ 103/26 Тираж 882 Подписное

Фини 1н 111 1 "11агенг", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 90377 тивность Стандарта опредепяют на изолированном органе после его инкубации (1 мл встряхивают в течение 1 мин с

200 мг стеклянного порошка) при 37 С в течение 30-60 мин.

Затем проводят анализ. Дпя этого в пробирку напивают 0,1 мп раствора унитиола (0,5-1,0 мг/мп смеси), исследуемую плазму (0,001-0,1 мп) ипи такое же количество физиологического раство-. 1а ра (контрольная проба), насыпают 200 мг стеклянного порошка и добавляют.1 мп холодного стандарта калликреина с кининогеном (2-4 С), встряхивают в течение

1 мин инкубируют при 35 -37 С 60 мин .

Реакцию останавливают добавлением

0,5 мп 10% ТХУ (трихлоруксусной киспоты), белковый осадок отделяют центрифугированием, центрифугат нейтрализуют

0,5 н. NaOH до рН 7,0-7,2. Дпя предотвращения адсорбции кининов добавляют

0,1 мп 0,04 м щавелевой кислоты и в

ТХУ-фипьтрате по сокращению изолированного органа определяют копичество кининов. В качестве эталона используют синтетический брадикинин.

Дпя учета или исключения "фона" (небопьшого количества кининов, которые могут образоваться спонтанно" в стандарте через 1-2 суток его хранения при

4-5 С), одновременно ставят коитропьную пробу 2, характеризующую активность ТХУ-фипьтрата, полученного из

1 мп неинкубированного при 37, холодного (2-4 ) стандарта.

Антика ппикреиновую активность плазмы (ИКЛ) выражают в микрограммах брадикинина в расчете на 1 мл плазмы эа определенный интервал времени (мкгlмл-ч или мин).LlJIB этого вычисляют разность в коли4О честве брапикинина, найденного в контроль« ных (% 1, М. 2) и опытной пробах, и, зная копичество взятой в пробу плазмы, вычисляют абсопклные величины активности. !

Н а п р и м е р: ТХУ-филы рат контрольной пробы N-. 1 содержит 400 ммкг брадикинина, такой же ТХУ-фипьтрат контропьной пробы 2 — не содержит кининов ("0 ), в опытной пробе обнаружено 40 ммкг кининов, спедоватепьно ИКЛ о

50 исспедуемой плазмы в количестве 0,025 мл затормозил кининогеназную активность

3 4 калликреина на 40%, что соответствует

160 ммкг брадикинина, а в переводе на

1 мп плазмы (х 40) = 6,4 мкгlмп/ч.

Если контрольная проба 2 содержит

20 ммкг кининов, тогда эту цифру отнимают от величины опытной и контрольной пробы 1 и рассчитывают так, как описано выше.

Данные клинических исследований свидетепьствуют о большой точности предложенного способа дпя диагностики остроты ипи обострения разнообразных заболеваний воспапитепьно-аппергического характера, прогноза их течения, изучения патогенеза -(в сочетании с показателями каппикреина) плазмы и терапевтической целью при назначении ингибиторов протеиназ (контрикала, тразипопа, гордокса и др,). Показатели ИКЛ являются лабораторным контропем сроков печения перечисленными препаратами. Кроме того показатели ИКЛ плазмы крови лабораторных животных могут быть использованы в эксперименте при изучении моделей различных воспалительных процессов.

Формула изобретения

Способ определения антикаппикреиновой активности плазмы крови путем биохимического исследования ее, о т и ич а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, плазму крови донора инкубируют при 61-62 С и рН 2,5-3 2 в течение 15-20 мин, затем устанавливают рН 7,5-7,8, к 0,0011,0 мп полученной смеси добавляют плазму обследуемого и ингибитор капли-. креина, инкубируют 40-60 мин, затем полученным инкубатом обрабатывают изолированный рог матки, по сокращению которого определяют антикаппикреиновую активность плазмы крови,

Способ определения антикалликреиновой активности плазмы Способ определения антикалликреиновой активности плазмы 

 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано при постановке диагноза и определении индивидуальных подходов к лечению больных с соматотропиномой гипофиса и синдромом акромегалии

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для раннего выявления нарушений менструальной функции (НМФ), возникающих на фоне синдрома поликистозных яичников (СПКЯ)
Изобретение относится к медицине, в частности - к кардиологии и может быть использовано для прогнозирования инвалидизации больного после перенесенного инфаркта миокарда
Изобретение относится к медицине и может быть использовано при динамическом наблюдении больных с аденомой гипофиза и синдромом акромегалии, которым был проведен курс дистанционной гамма-терапии

Изобретение относится к медицине и касается оценки функционального состояния гипофизарно-надпочечниковой, гипофизарно-яичковой и симпато-адреналовой систем у пациентов с эректильной дисфункцией

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для прогнозирования послеоперационных осложнений
Изобретение относится к медицине, в частности к нефрологии
Наверх