Изобретение относится к способу получения новых продуктов присоединения дипептидного производного и . аминокислоты, соединений, обладающих биологической активностью, которые могут найти применение в биохимии и медицине.

Известно применение протеаз (таких как папаин, химотрипсин) для образования пептидных связеи ° Таким способом были осуществлены белковые синтезы из моноаминокарбоновых кислот, таких как лейцин, имеющих N-концевую защитную бензоильную группу, и лейцин глицин, обе из которых имеют С-конце.вую защитную группу (1 .

При этом продукты реакции осажда-. лись в водной среде и как водонерастворимые при потере водорастворимых групп (что необходимо для сдвига обратимой реакции в сторону, образования белка) ° В случае, когда водораствори"

g. мая группа сохраняется в реакционном продукте, например, как в случае использования в качестве исходного соединения дикарбоновых аминокислот, необходимо водорастворимую группу ис1в ходного соединения закрыть менее гид" родильной защитной группой.

Цель изобретения - новый способ

I получения новых биологически активных

:соединений.

И1 Поставленная цель достигается тем,,что в способе получения продуктов

,присоединения дипептидного производного и аминокислоты общей формулы

3 9101 где R< вЂ” бензилоксикарбонил, пара-ме= токсибенэилоксикарбонил;

Й вЂ” бензил;

Pi вЂ” метокси, этокси-группы; и -1или2

N-замещенную аминодикарЬоновую кислоту общей формулы, 1

II P II. (11) нос-(сн,)„- ск- со8 где значения Я.1 и и указаны выще, подвергают взаимодействиф со сложным эфиром аминокарбоновой кислоты общей формулы

321% CK- C E3 (yg) !

20 2 ! где значения R и R указаны выше.

При яолярном соотношении исходных соединений формул II. и Н1 1:1 - 1:

;3,75, в водной среде, в присутствии металлопротеазы при рН 5,0«j,2, температуре 10-90 С. Продукты, полученные в процессе реакции, мало растворимы в воде и выпадают в осадок. Кроме

30 того, предлагаемый способ позволяет получить оптически активный продукт присоединения дипептида и сложного эфира аминокислоты из рацематов, по скольку реакция образования пептидной связи при этом происходит только на

L-изомерах. С другой стороны, сложные эфиры аминокислот, используемые для проведения реакции присоединения с образованием продуктов присоединения, могут быть либо, в Е-форме, либо в

D-форме, либо их смесью.

При использовании DL-формы сложного эфира аминокарбойовой кислоты I.изомер DL-формы сложного эфира аминокарбоновой кислоты расходуется в про- 5 цессе пептидного синтеза при получении продукта присоединения, остающийся сложный эфир аминокислоты имеет

D-форму., Если концентрации исходных веществ 0 высоки1процесс проходит с количественным выходом. При использовании двух молей DL-формы сложного эфира амино. карбоновой кислоты на 1 моль L-формы.

N-эамещенной моноаминодикарбоновой N кислоты получают продукт присоединения, состоящий в основном из LL-дипептидного сложного эфира и сложного

17 4 эфира D-аминокарбоновой кислоты. Полученный продукт присоединения может

Ьыть легко разделен на два частичных компонента, т. е. íà LL-дипептидный эфир и сложный эфир D-аминокислоты.

Таким образом, предлагаемый способ может одновременно обеспечить получение дипептидного эфира и оптическое разделение сложного эфира DL-аминокарбоновой кислоты.

Отделенную D-форму или обогащенную D"ôoðèó сложного эфира аминокислоты можно рацемизовать обычным способом, и полученный продукт использовать в качестве исходного вещества в описываемом способе.

При использовании DL-формы N-замещенной моноаминодикарбоновой кислоты и L-формы сложного эфира аминокислоты

D-изомер из DL-формы N-эамещзнной моноаминодикарбоновой кислоты, явля" ясь инертным, остается в водной среде, в результате чего может быть получен продукт присоединения LL-дипептидного сложного эфира и сложного эфира

L-аминокарбонэвой кислоты. Соответственно, если D-форму N-замещенной моноаминодикарЬоновой кислоты выделяют из водной среды, то это может одновременно обеспечить получение продукта присоединения и оптическое разделение

N"3àìåùåíHîé DL-моноаминодикарбоновой кислоты. Если выделенную N-замещенную

13-моноаминодикарбоновую кислоту рацемизировать известным способом, то полученный продукт может быть использован в качестве исходного вещества. При использовании DL" îðèû Х-замещенной моноаминодикарбоновой кислоты и DLформы сложного эфира аминокарЬоновой кислоты из водной среды может Ьыть получена N-замещенная DL-моноаминодикарбоновая кислота, а также продукт присоединения LL-дипептидного сложного эфира и сложного эфира D-аминокарбоновой кислоты, причем укаэанный продукт присоединения разделяют на компоненты, как указано выше. Одновременно может быть достигнуто образование дипептидного сложного эфира и оптическое разделение N-замещенной

DL"моноаминодикарбоновой кислоты и сложного эфира DL-аминокарбоновой кислоты.

Предлагаемый. способ позволяет исключить стадии введения и удаления защитных групп в боковой цепи, которые считаются неизбежными в известных

5 9101 способах, что соответственно позволяет предотвратить потерю исходных веществ; а также использовать DL-форму исходных соединений, В обычных спосоЬах с использованием фермента D-изо- 5 мер DL-формы исходных веществ не нужен в реакции, и хотя он не влияет на ход реакции, но вызывает потерю исходных веществ. Однако D-форму исходных веществ можно с успехом использовать в качестве агента для осаж дения пептида с последующим их восстановлением.

Таким образом, при осуществлении предлагаемого способа может быть одновременно достигнуто оптическое разделение N-замещенной DL-аминодикарбоновой кислоты и сложного эфира DI,аминокарбоновой кислоты.

Продукты присоединения имеют ха- 20 рактеристики, которые можно ожидать на основании формулы 1. Например, типичный продукт присоединения, полученный реакцией N-бензилоксикарбо-. нил L-аспарагиновой кислоты и метилового эфира L-фенилаланина, дает поглощение в инфракрасном диапазоне и спектр ЯМР, указанные ниже.

Инфракрасный спектр: 3260 см г (колеЬание растяжения связи N-Н); Зо

3000-3200 см (колебание растяжения связи С вЂ” Н); 1740 см (сложный эфир

C=0); 1720 см " (C=O уретан):, 1660 см (1-ое амидное поглощение); 1630 см (карЬоксилат); 1540 см (2-е амидное поглощение}; 1430 и 1450 см (С=Н деформационное колебание);

1390 см (êàðáîêñèëàò); 1200 и

1290 см (С-О-С колебание растяжения связи и )-е амидное поглощение);

1050 см (колебание фенила в плос" кости); и 740 и 695 см г(колебание монозамещенного Ьензольного кольца вне плоскости).

ЯМР-спектр, 6: (1) 2,75 ppm (2Н); (2) 3,02 рун (4H); (3) 3,61 ppm (3H);

3,7 ppm (3H); (4) 4,4-4,8 рун (3Н); (5) 5,05 ppm (2И); (6) 5,82 ppm (5H); (7) 7,3 ppm (15H) °

Результаты элементарного анализа

50 продукта присоединения оказались такими же, что и рассчитанные значения для формулы I где значения R<, Rp, R и и указаны выше. Когда продукт присоединения обрабатывают сильной кислотой, такой как соляная, и полученный продукт экстрагируют из органического растворителя, такого как этилацетат, то из органи-.

17 ческого слоя получают кислотное соединение. При обработке продукта присоединения указанным образом получают кислотное соединение с характеристи" ками и свойствами, отвечающими соединению формулы

0 ЖП.1 О Q

II, ll u

HOC (иД„-СК-CHH СНС-Rg (И)

R в LL-форме, где R„, Rz,, R и Б. имеют те же значения, что и в продукте при" соединения.

Кислотное соединение, полученное из продукта присоединения при каталитическом восстановлении дает известное соединение вЂ” метиловый эфир

Результаты анализа соединений, полученные на основании инфракрасных спектров, спектр ЯМР и элементарного анализа подтверждают структуру соединения формулы I. Полностью совпадаювЂ” щие. результаты получены также и в случае, когда выбраны соединения с другими значениями R1, R, R и и.

Протеазы, используемые в предлагаемом способе, являются металлопротеазами, имеющими металлический ион в активном центре. Пригодными металлопротеазами являются ферменты, полученные из микроорганизмов, такие как нейтральные протеазы из актиномицета, пролизин, термолизин, коллагеназа, протеаза Crotulus atrox и т. д. Могут быть использованы также -неочищенные ферменты, такие как термоаз, тациназа-N, проназа и т. д. Чтобы подавить действие эстеразы, содержащейся в неочищенных ферментах, предпочтительно использовать ферментный ингибитор, картофельный ингиЬитор вместе с неочищенными ферментами. Используют тиольные протеазы, папаин или сериновые протеазы, трипсин, однако они оЬладают эстеразной активностью. Поэтому, во время проведения реакции с использованием таких ферментов неоЬходимо принять меры для предотвращения гидролиза сложных эфиров.

Пример 1. 1335 мг (5 ммоль)

8-бензилоксикарЬонил L-аспарагиновой кислоты и 1078 мг (5 ммоль) хлоргидрата метилового эфира L-фенилаланина . помещают в 30 мл колбу и добавляют

20 мл, воды до их растворения, рН доводят до 6 с помощью 74-ной аммиачной

7 9" 01 воды. Полученный раствор смешивают с

50 мг термолизина, смесь встряхивают при 38-40 С в течение ночи. Выпавший осадок отфильтровывают и промывают

ФО мп воды и сушат. Получают 1145 мг

:тонких игольчатых кристаллов, имеющи> т. пл. 117-120 С (продукт присоедине,ния метилового эфира N-бензилоксикарбонил L-аспартил-1.-фенилаланина и метилового эфира Ь-фенилаланина (1: 1); 1о выход 75,54 в расчете на хлоргидрат метилового эфира"фенилаланина).

После перекристаллизации из смеси растворителей этилацвтата и н-гексана физические свойства и результаты; 1$ элементарного анализа продукта следующие: т. пл. 120-124 С; (4.) = +

+ 7,1 (C=l, метанол).

Йайдено, б: С 63, 15; Н 6, 15; N 7,00

С Нр Ay0g

Рассчитано, 4: С 63,24; Н 6, 13;

Х 6,97.

Сняты ИК-спектр и спектр lH-ЯИР продукта.

1145 мг полученного продукта раст- 2з воряют в 40 мл 1 н . 1!СЕ и трижды экстрагируют 30 мл этилацетата. Экстракты объединяют и промывают водойу беря порции по 20 мл (3 раза), и сушат над безводным сульфатом магния. Раст- зо вор концентрируют и продукт перекрис". таллизовывают из н-гексана, получают

640 мг. Физические свойства и резуль" таты элементарного анализа Продуца следующие: т. пл. 115"125 С (4-)g =

-15,3 (С=1 метанол)

Найдено, ь: С 61,52; H y,65; Ж6,57

CgH@pil@0@

Рассчитано, 4: С 61,67; Н 5,65;

N 6,54.

Результаты инфракрасного спектра и ЯИР-спектра дают характеристики, ожидаемые в.метиловом сложном эфире

N-бензилоксикарбонил-L-acnapren-L-фе,нилаланина.

Полученные результаты совпадают с результатами исследования соединения, полученного при бензилоксикарбонилировании аминогруппы метилового эфира

L-аспартил-L-фенилаланина.

Иетиловый эфир L-фенилаланина выделяют из смеси солянокислой фазы и фракции промывочной воды, отделенной при экстракции из этилацетатной фазы.

Подтверждено, что соединение, полученное посредством первой реакциипродукт присоединения метилового эфира Х-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L17 8 фенилаланина. Спектром Н-ЯИР подтверждено, что их молярное отношение составляет 1:1.

Пример 2. 1335 мг (5 ммоль)

N-Ьензилоксикарбонил-L-аспарагиновой кислоты и 1078 мг (5 ммоль) хлоргидрата метилового эфира Ь-фенилаланина загружают в 30 мл колбу и к смеси добавляют 10 мл воды, до их растворения и рН раствора доводят до 6 с помощью 74-ной аммиачной воды. Полученный раствор смешивают с 50 мг термолизина, и смесь непрерывно встряхивают при 38-40 С в течение ночи. Осадок отфильтровывают, сушат, получают !

504 мг продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-фенилаланина и метилового эфира L-Фенилаланина (1: 1); (выход

99,1 в расчете на хлоргидрат метилового эфира L-фенилаланина, т. пл. 104 113 С

I1 р и м е р 3. Получение продукта и обработку реакционной массы проводят аналогично примеру 2, но изменяют количество N-бензилоксикарбонил-L-аспарагиновой кислоты и метилового эфи- . ра L-Фенилаланина на 534 мг (2 ммоль) и 863 мг (4 ммоль) соответственно, получают. 1068 мг продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил- .- фенилаланина и метилового эфира Ь-фенилаланина (1:1).

Выход 70,44 в расчете на N-бензилоксикарбонил-Ь-аспарагиновую кислоту, т. пл. 116-119 С.

Пример 4. 534 мг (2 ммоль)

N-бензилоксикарбонил-L-аспарагиновой кислоты и 863 мг (4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира L-фенилаланина загружают в 30 мп колбу, растворяют в 8 мл воды, рН доводят до 6,2 с помощью 3-ной аммиачной воды. Полученный раствор смешивают с 50 мг термолизина, и смесь встряхивают при 38-40оС в течение ночи. Осадок отфильтровывают, отделяют от раствора и сушат, получают 1099 мг продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-gcnaptea-L-фенилаланина и метилового эфира Ь-фенилаланина (1:1).

Выход 90,54 в расчете íà N-бензилоксикарбонил-Ь-аспарагиновую кислоту.

Пример 5. 267,2 мг (1 ммоль)

N-бензилоксикарбонил-1.-аспарагиновой кислоты и 537,.6 мг (3 ммоль). метилового эфира L-фенилаланина растворяют в 5 мл буферного раствора Мак-Илвай117 l.0

9,910 на (рН 7,0), Полученный раствор смешивают с 100 мг термоазы и 100 мг t картофельного ингибитора, и смесь встряхивают в течение 20 ч при 38 С °

Осадок отфильтровывают и промывают водой и сушат, получают 580 мг неочищенного кристаллического продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира Ь-фе- io нилаланина (1:1). Выход .95,Q в расчете на И-бензилоксикарбонил-L-аспаргиновую кислоту, т. пл. 123-125 С.

Продукт растворяют в 40 мл смеси диметилформамид и вода (1: 1), и к is раствору добавляют при перемешивании

Н-форму сильнокислотной катионообменной смолы, которую затем отделяют и фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Остаток растворяют в диме- 20 тилформамиде и к раствору добавляют воду, в осадок выпадает 330 мг метилового эфира N-,áåíçèëîêñèкарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина, выход 77,0Ф в расчете на N-бензилоксикарбонил-Ь- zs

-аспарагиновую кислоту, т. пл. 123l25 C.

Пример 6. 267,2 мг (1 ммоль)

N-бензилоксикарбонил-Ь-аспарагиновой, кислоты и 537,6 мг (3 ммоль)- метило" вого эфира L-фенилаланина растворяют в 5 мл буферного раствора Мак-Илвайна. (рН 7,0). Полученный раствор сме" шивают со 100 Mr тациназы И и со

100 мг картофельного ингибитора, Э5 смесь встряхивают в течение 6 ч при

38 С. Осадок отфильтровывают, промы47 вают водой и сушат. Получают 120 мг неочищенного кристаллического продук.та присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1: 1) выход -19,74, т. пл. I19-123 С.

Согласно примеру 5,продукт обраба- 4 тывают сильнокислотной катионообменной смолы в Н-форме, получают 50 мг метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L"àñïàðòèë-L-фенилаланина. Выход

11 74, т. пл. 95"105 С °

Il p и м e p 7. 1335 мг (5 ммоль)

И-бензилокси карбонил-L-аспара гиновой кислоты и 1078 мг (5 ммоль) метилового сложного эфира Ь-фенилаланина загружают в 30 мл колбу, добавляют

4 мл воды, рН полученного раствора доводят до 6,8 с помощью тризтиламийа, добавляют 20 мг термолизина смесь"встряхивают йри 38-40"C в течение 2 дней ° Осадок отфильтровывают, промывают 40 мл воды, сушат, получа" ют.475 кг продукта присоединения иетилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L"ôåíènànàíèíà (1: 1). Выход 31,34 в расчете на хлоргидрат метилового эфира L-фенилаланина. После перекристаллизации из смеси этилацетата и н-гексана получают продукт с т. Пл. 120-124 С, (L) = + 7,2(C =

=1, метанол)

Элементарный анализ

Найдено, Ф: С 63,52; H 6,22; N 7,04

Рассчитано, 4: С 63,24; Н 6,13;

N 6,97

Пример 8. Процесс ведут аналогично примеру 7, но рН доводят до 5,2, получают 753 мг продукта присоединения метилового эфира И-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1). Выход 49,5i в расчете на метиловый эфир Ь-фенилаланина.

Пример 9. K раствору 133,6 мг (0,5 ммоль) N-бензилоксикарбонил-Ь-аспарагиновой кислоты и 89,2 мг (0,5. ммоль) метилового эфира L-фенилаланина в 2,5 мл буферного раствора, Мак-Илвайна (рН 7,0) с 0,07 мл триэтил" амина, имеющему рН 6,7; добавляют

50 мг термоазы и 50 мг картофельного ингибитора, смесь встряхивают при

38 С в течение 20 ч. Осадок отфильт"

4t ровывают, промывают водой, получают

130 мг неочищенного продукта присое динения метилового эфира И-бензилок" сикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира Ь-фенилаланина (1:1). Выход 85,54 в расчете на метиловый эфир Ь-фенилаланина, т. пл. 115124 С.

Раствор продукта растворяют в

20 мл смеси из диметилформамида и воды (t: 1), обрабатывают сильнокислот.

:ной катионообменной смолой в Н-форме согласно примеру 5, получают 75 мг ме-. тилового эфира И-бензилоксикарбонил:-ь"фенилаланина, полный выход 70ь в расчете на 503 количества исходного метилового эфира Ь-фенилаланина.

Пример 10. Реакцию проводят аналогично примеру 9, но используют

0,05 мл N-метилморфолина вместо

0,07 мл триэтиламина при начальном рН 6,4. Получают 120 мг неочищенного кристаллического продукта присоединения метилового эфира И-бензилоксикарбонилгЬ-аспартил-Ь-фенилаланина и

11 91 метилового эфира L-q>ewaaaa a (1:1), фиход 78,9 в расчете на метиловый эфир L-@ewaaaae sa, т. пл. 118-124 С, . Продукт обрабатывают сильнокислотной катионнообменной смолой в Н-форме согласно примеру 9, получают 70 мг кристаллического метилового эфира N-бензилрксикарбонил-Ь"фенилаланина.

Полный выход 664 в расчете на 503ное использование количества исходного метилового эфира L-®ewaana a.

ll р и м е р 11. Проводят реакцию аналогично примеру 4, но реакцию проводят при рН 6,5 при встряхивании в течение 1 ч, получают 920 мг продукта,присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-Фе нилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1). Выход 75,83.

Пример 12. 524 мг (2 ммоль)

N-бензилоксикарбонил-Ь-аспарагиновой кислоты и 863 мг (4 ммоль)- хлоргидрата метилового эфира Ь-фенилаланина растворяют в 2 мп воды, к раствору добавляют 5,5 мг lн. NaOH до:рН 7.

Полученный раствор смешивают с

50 мг термолизина и смесь встряхивают при 38-40 C в течение 2 н. Осадок отфильтровывают, высушивают, получают 734 мг продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-gewaaaawvq и метилоаого эфира L"ôåíèëàëàíèíà (1:1). Выход 60,5l,т. пл. 106-»8 С.

П р. и м e p l3. 540 мг (2 ммоль)

И-бензилокси карбонил-L-аспарагиновой кислоты и 863 мг (4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира L-Фенилаланина растворяют в 7 мл воды, рН раствора доводят до 6 с помощью 73-ной аммиачной воды, к раствору добавляют 100 мг термоазы, смесь встряхивают при 3840 С в течение ночи. Осадок отфильтровывают, промывают 70 мл воды, сушат., получают 550 мг продукта присо-. единения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-.àñïàðòèë-L-.ôåíèëàëàíèíä (1:1). Выход 45,33, т. пл. 113-116©С.

Пример 14. 270 мл (1 ммоль)

N-бензилоксикарбонил-Ь-аспарагиновой кислоты и 432 мг (2. ммоль) метилового эфира Ь-фенилаланина растворяют в

4 мл воды, рН раствора доводят до 6 с помощью 73-ной аммиачной воды.

К полученному раствору добавляют

50 мг термоазы, смесь непрерывно встряхивают при 38-40 С в течение

40.ч. Осадок отфильтровывают, сушат, получают 177 мг продукта присоедине-.

0117 12 ния метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-аспаргил-L-фенилаланина и метилового эфира L-Фенилаланина (1: 1) ° Выход 29, 13 т. пл. 103-» 2 С, П р -и м е р 15 ° Процесс проводят аналогично примеру 14, но в раствор добавляют дополнительно еще 50 мг кар« тофельного ингибитора. Получают. 381 мг того же самого продукта. Выход 62, "., 10 т. пл. 105-» 7 С.

Пример 16. 534 мг (2 ммоль)

N-бензилоксикарбонил-L-аспарагиновой кислоты и 863 мг (4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира D4-фенилаланина

1ю растворяют в 7 мл воды, величину рН доводят до 6,2 с помощью 74-ной аммиачной воды.

Полученный раствор смешивают с

50 мг термолизина и встряхивают в те20 чение ночи при 38-40 С. Осадок отфильо тровывают, сушат, получают 1045 мг . продукта присоединения метилового эфира И-бензилоксикарбонил-аспартил-.

-фенилаланина и метилового эфира Фенилаланина (1:1). Выход 86,13 в рас" чете на N-бензоилкарбонил-L-аспаргиновую кислоту, т. пл. 104-1084С.

После перекристаллизации из смеси этилацетата и н-гексана пол чают про3ф дукт с т. пл. 127-135 С,(Й ) = - 6,4 (С = 1, метанол).

Найдено, ь: С 63,52; Н 6,19; N6,92

ЕС g H qN 0 2

) Рассчитано, 4: С 63,24; Н 6,13; з

Иетодом ЯИР показана тождественность полученного продукта с продуктом присоединения метилового эфира

N-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-L4О

"фенилаланина и метилового эфира D-фенилаланина (1: l), т. е. соединение по примеру l.

800 мг продукта растворяют в 40 мг

1 н. НС1 и экстрагируют дихлорметаном, (30 мл х 3), органическую Фазу отде.ляют, промывают водой, сушат над безводным сульфатом, упаривают, остаток перекристаллизовывают из смеси этил- . ацетата и н-гексана, получают 450 мг кристаллического продукта, т. и. 124132 С, 34 ) = - 15,3 (С = 1 метанол).

Найдено, 3: С 61,38; Н 5,58; N6,29

Сйа Н24 И 6 у

Рассчитано, 4: С 61,67;.Н 5,65;

И 6,54.

Продукт представляет собой метиловый эфир И"бензилоксикарбонил-L-аспаргил-L-Фенилаланина.

13 910

Водную фазу после отделения слоВ дихлорметана смешивают с бикарбонатом натрия, значение рН доводят до

8,7, продукт трижды экстрагируют

30 мп хлористого метилена..Экстракт . s сушат над безводным сульфатом магния, в экстракт подают газообразный хлористый водород в течение 10 мин, затем упаривают досуха. Остаток перекристаллизовывают из этилового эфира, по- î лучают 29,0 мг хлоргидрата метилового

-Х;Ь-А@-Ь- Phe- NS L-phd -ИВ

ОСПдо (1:1) выход 64,84 в расчете íà N.-бензилоксикарбонил-L-аспарагиновую кислоту, т. пл, 105-110 С.

После перекристаллизации из смеси этилацетата и н"гексана, получают продукт с т. пл. 121«125еС ГМ ю

7,2 (С = 1, метанол) ..

35 Из оставшейся реакционной смеси выделяют N-бензилокси ка рбониласпарагиновую кислоту (в основном в D-форме) .

Пример 18..Используют оба

-рацемета

N вЂ” Z вЂ” Ш вЂ” As вЂ” изакер Ъ -изоиер

Остаепгя

N реикнибннОИ раст доре

pacmE0pewcw

З-Е-L-Asy-I.-Phe-Ne-D- Phe вЂ” Ms

Остать

1069 мг (4 ммоль) N-бензилокси карбонил-DL-аспарагиновой кислоты и!

863 мг (4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира Ь-фенилаланина растворяют в 2 мл воды, значение рН доводят до б с помощью 7l ной аммиачной воды.

Полученный раствор смешивают с

50 .мг термолизина и встряхивают при

38-40еС в течение 2 ч. Осадок отфильтровывают, промывают 20 Mtl воды,. сушат, получают 787 мг продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспаргил-Е-фeнилaлaнина и метилового эфира L-фенилаланина

Процесс проводят аналогично при-меру 17, но используют метиловый эфир

DL-фенилаланина вместо метилового

117 Ц эфира D-фенилаланина, . пл. Ai9l5l С, 33 р = - 15; 1 (С 1, метанол); (инфракрасный спектр и-спектр ЯИР совпадают со спектрами L-формы).

Таким образом, полученный продуктпродукт присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира 0фенилаланина (1:1) .

Пример 17 ° эфира L-фейилаланина. Получают

756 м1- продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L)15 9101

-аспартил-I,-фенилаланина и метилового эфира О-фенилаланина (1: 1). Выход

62,3ь в расчете íà N-бензилоксикарбонил-1.-аспарагиновую кислоту, т. пя. 105-111O С °

Продукт перекристаллизовывают из смеси этилацетдта и н-гексана, т.пл.

126-134 С, Ж1 = - 6,5 (С = 1, метанол). Из оставшейся реакционной смеси выделяют N-бензилоксикарбониласпара- 30 гиновую кислоту (в основном в D-форме).

Пример 19. 5,34 г (20 ммоль)

N-бензилоксикарбонил-L-аспарагиновой кислоты и 7,32 r (42 ммоль) метилово- 15 го эфира L-фенилаланина растворяют в

70 мл воды. Получают раствор с рН

6,2-6,3.

К раствору добавляют 200 мл термолизина и смесь непрерывно встряхивают щ в течение 4 ч при 38-40 С. Осадок отфильтровывают, промывают 70 мл воды, сушат, получают 10,11 г- продукта, (т. пл. 117"120 С).

Полученное соединение - продукт . 25 присоединения метйлового эфира N-бензилоксикарбонил-1.-аспартил-1.-фенилаланина и метилового эфира 1.-фeнилаланина (l:1), после перекристаллизации из смеси ацет та и н-гексана, т. пл, 120 З0

124 С, E*3p = + 7,2 (C = 1, метанол).

Найдено, Ф: С 63 16; Н 6,14; N6,99

С Н„N,О, Рассчитано, 3: С 63,24; 8 6,13

И 6,97. 55

Инфракрасный спектр и спектр ЯЙР показали те же характеристики, которые указаны выше для продукта присое-. . динения (1: I) метилового эфира И-бен« зилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенил40 аланина и метилового эфира L-фенил" аланина. После обработки полученного продукта сильной кислотой> экстракции этилацетатом, последующей отганки ор-ганического растворителя получают ме", тиловый эфир Ы-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-L-фенилаланина.

1,00 r (1,65 ммоль) полученного продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-acnap50 тил-L-фенилаланина. и сложного эфира

L-Фенилаланина загружают в 30 мл кол6у и добавляют 2 мл воды и 2,0 мл 1н.

НСЕ, смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин.

Суспензию Фильтруют, осадок промы"

55 вают 4 мл воды, сушат, получают

0,72 r метилового эфира N-бензилок17 16 сикарбонил-L-аспаргил-Ь-фенилаланина. Выход 98,84. После растворения в этилацетате продукт осаждают н-гексаном, т. пл. 121-124 -С, $41 >

-15,4 (С = 1, менол).

Найдено, 4: С 61,58; Н 5,64;

N 6,56 ° с и и,о

Рассчитано, 4: С 61,67; Н 5,65;

N 6,54..

Инфракрасный спектр продукта совпадает со спектром стандартного продукта.

Идентичность продукта подтверждена сравнением водного раствора полученного продукта с водным раствором стандартного соединения методом высокоскоростной жидкостной хроматографии. Чистота, измеренная этим способом, составляет 1003. Устройство для проведения высокоскоростной жид- костной хроматографии и условия ее проведения указаны ниже. Этот способ также использован для оценки чистоты продуктов разложения, продуктов присоединения в примерах, если это не оговорено иначе. То же устройство и те же условия использованы в примерах, если речь идет об этом способе.

Устройство для высокоскоростной жидкостной хроматографии (Т$К-HLC

801).

Колонка: внутренний диаметр 7,5 мм длина 30 см; наполнитель: крахмальный гель, размер частиц 5 мкм (TSK -

GEL Ю 170)...

Элюент: 0,54"ный водный раствор ацетата натрия.. Скорость потока

0,8 мл/мин перепад давления 20 кг/см,. температура измерения комнатная, де- тектор -. дифференциальный рефрактометре

Пример 20. 1,00. г,{1,65 ммоль) продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбанил-1.-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфи" ра Е-фенилаланина, полученного в примере 19, растворяют s смеси 2 мл воды и 1,32 мл 1 н. НСс . Реакционную массу перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин и обрабатывают в условиях по примеру 19. Получают 0,70 r продукта в виде тонких призматических кристаллов. Содержание метилового эфира N-бензилоксикарбонил-1;аспартил-L -фенилаланина

96,8В т. пл. 100-,126 С.

Пример 21..18

17.

N- Z-L-Аф

910117 . DL вЂ” Phe-Ие

N-X вЂ” L-As)-Ь-Fhe -Ме В-Phe вЂ” Ие

ОС0ддя

®вЂ” мера 19, получают 0,35 г кристаллов метилового эфира N áåíçèëîêñèêàðáî" нил-L-аспартил-L-фенилаланина. Чистота 1004; выход 99 3 ь .

Пример 22.. К 0 50 r (0,82 ммоль) продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-

Пример 23. К смеси 0,45 r (0,82 ммоль) 853 муравьиной кислоты и 8 мл воды добавляют 0,50 г (0,82 ммоль) продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина, полученного в примере 19, смесь перемешивают в течение 20 мин при.комнатной температуре, продукт отфильтровывают, промывают 10 мл воды, сушат,. получают 0,312 г белых кристаллов метилового эфира, N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина. Чистота 003; выход 88,63.

D-Phe-Ме не реагирует с N-Z-L-Asp, в реакции с протеазой связывается с дипептидом и осаждается как аддитивное, соединение.

0,534 г (2 ммоль) N-бензилоксикар" бонил-Ь-аспарагиновой кислоты и

0,863 г (4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира DL-фенилаланина растворяют в 10 мп воды, рН раствора доводят до 6,0 с помощью 7ь-ной аммиачной во- р ды. К раствору добавляют с 50 мг термолизийа и смесь встряхивают в течение ночи при 38-40 С. Осадок отфильтровывают, промывают 10 мл воды и сушат, получают 0,90 r кристаллического зо продукта. T. пл. 120-126 С. После перекристаллизации из смеси этилацетата и н"гексана, получают продукт с т.пл.

128-134 С и Г4.) = - 6,3 (С = 1, меD танол). Инфракрасный .спектр и спектр

ЯИР продукта идентичны спектрам присоединения метилового эфира N-бензи локсикарбонил-Ь-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1).

Найдено, 4: С 63,42; H 6, l7; N6,95

Ся. Hgr Лаз

Рассчитано, 4: С 63,24; Н 6,13;

N 6,97.

Продукт обрабатывают кислотой, nogs лучают метиловый эфир N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-Ь-фенилаланина и метиловый эфир D-фенилапанина .в мольном отношении 1:1. Из полученных результатов сделан вывод, что соедине" ние есть продукт присоединения метиso лового эфира N-бензилоксикарбонил-Е-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира D-фенилаланина (1: 1).

Смесь 0,50 г (0,82 ммоль) продукта присоединения с 4 мл воды и 0,26 r лимонной кислоты перемешивают при комнатной температуре в течение .l0 мин и обрабатывают в условиях при Пример 24. 0,47 r (0,82 ммоль) ледяной уксусной кислоты и 8 мл воды помещают в 30 мл колбу, 0,50 г (0,82 ммоль) продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-L-фенилаПанина и метилового эфира Е-фенилаланина, смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин, продукт отфильтровывают, промывают 10 мл во-. ды, сушат, получают 0,308 г белых кристаллов метилового эфира N-бензи-!.

19 9 l011 локсикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина. Чистота 1003, выход 87 23.

Пример 25. 1,00 г (1,65 ммоль) продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ьсаспартил-Ь-фенилаланина и метилового эфира Ь-фенилаланина, полученного в примере .19, загружают в

30 мл колЬУ, добавляют 2 мл воды и

2,0 мл 1 н.НС1, смесь перемешивают io при 60 С в течение 3 мин, затем обраЬатывают способом, описанным аналогичным в примеру t9, получают

0,35 r кристаллов метилового эфира

N-оензилоксикарбонил"L-аспартил"L- is

-фенилаланин. Чистота 1004; выход

1 ЮО .

П р и и е р 26. 0,594 r (2 ммоль)

N-P-метоксиоензилоксикарбонил-L-аспарагиновой кислоты и 0,860 г (4 ммоль))2о хлоргидрата метилового эфира Ь-фенилаланина растворяют в 1 н.NaOH, значение рН доводят до 6,0. Полученный раствор смешивают с 50 мг термолизина, встряхивают в течение ночи 2S

38-40 С. Осадок отфильтровывают, промывают 10 мл воды, сушат, полу" чают 0,928 r кристаллов, имеющих 687 îc

Результаты подтверждают получение зв продукта присоединения метилового эфира N-P-метоксибензялоксикарбонил"L-аспартил-L-фенилаланина и метило-вого эфира L- фенилаланина (1: 1).

После перекристаллизации продукта из смеси этилацетата и н-гексана.

Т,пл. 72-76 С. (31 = + 6,5 (С = 1, метанол).

Найдено, 1: С 61,85; Н 6,04; N6,46

СмНм Ф о - о

Рассчитано, : С 62,15, Н 6,16; и 6,5.9.

Инфракрасный спектр: 3280 см - ..(колебание растяжения связи N-Н);

3020 и 2930 см 1 (колебание растяжения С-H); 1735 см (сложный эфир

С 0); 1700 см (С = О уретан); (2-ое амидное поглощение); 1435 см .(С-.Н деформационное колебание);

l380 см " jêàðáîêñèëàò); 1210 до

1?40 см- (колебание растяжения связи

C-О-С и 3-е амидное поглощение);

1030 см (колебание фенила в плоскости). и 690, 740 и 810 см колебание фенила вне плоскости).

Спектр ЯМР, 8 : (1) 2,7 ppm (2Н); (2) 3, 1 ppm (4Н); (3) 3,6, ррп (ЗН);

3, 7 ppm (ЗН); (4) 3, 8 р (ЗН); (5)

4,0 ppm (1н); (6) 4 5 ppm (1Н) (7) 7 20

4,8 ppm (1H); (8) 5,0ppm,(2Н); (9)

5,65 ppm (ЗН); (10) 5,65 ррп (1H); (11)

Ь,2 "(1Н); и (12) 6,8 до 7, 3 ppm (14Н).

Полученные результаты показывают, что продукт является продуктом присоединения формулы I, где Rq Rz, Йъ, и и означают и-метоксибензилоксикарбонил, бензил, метокси и 1 соответственно.

Смесь 0,500 г (0,78 ммоль) продукта присоединения метилового эфира N-P-метоксибензилоксикарбонил-L-аспар- тил-L-фенилаланина и метилового эфира

Ь-фенилаланина, полученного таким образом, с 2 мл воды и 0,94 мл . (0,94 ммоль) 1 í.HCR перемешивают при

60 С в течение 3 мин. Полученную суспензию отфильтровывают и промывают

6 мл воды, сушат, получают 0,32 г кристаллов.

Нижеследующие результаты подверждают, что продукт является сложным эфиром Ы-P-метокси-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина. Чистота 100 выход 89,11.

Кристаллы растворяют в этилацетате. и продукт осаждают н-гексаном получают соединение с т. пл. 128-130 С, ("-10 = - 15,1 (С = l метанол)

Найдено, 4: С 60,30; Н 5,74; N 5,99

С ь 4е М в

Рассчитано, /: С 60,25; Н 5,72;

М 6,11.

Инфракрасный спектр: 3280 см (растяжение N-H); 2930 и 3020 см (колебание растяжения С-Н); 1735 см (С = О сложный эфир); 1700 см " (С=0 уретан); 1650 см (1-ое амидное поглощение); 1510 до 1540 см (2-е амидное поглощение); 1440 см " (дефор.мация С-Н); 1220 до 1270 см (колебание растяжения С-О-С, 3-е амидное поглощение); 1030 и 1050 см "(колебание фенила в плоскости); 690 и 810 см (колебание фенила вне плоскости).

ЯИР спектр, 8 : (1) 2,8 рртй (2Н); (2) 3,0 ppm (2Н) (j) 3,6 реп (ЗН); (4) 3,8 ppm (ЗН) (5) 4 5 ppm (1H) (6) 4,8 pgm (1H) (7) 6,6 ррп (2Н); (8)

6,0 ppm (1Н) (9) 6,6ppm (1Н); (10)

6,6 ppm (1H) (11) 6,8 до 7,3 ppm (9Н).

Эти результаты показывают, что конечным продуктом является соединение формулы IV, в котором Й, R, R> и и означает и-метоксибензилоксикарбонил, бензил, метокси и 1 соответственно.

21 9101

0,2 весовых частей полученного ме- тилового эфира N-P-метоксибензилокси-карбонил-1,-аспаргил-l.-фенилаланина растворяют в 2 вес.ч. ацетона и к полученному раствору добавляют

1 вес.ч. 4 н.НС, смесь нагревают на водяной бане со слабым противотоком в течение 1,5 ч, до полного разложения для образования раствора, содержащего в качестве. основных компонентов метиловый сложный эфир L-аспартил-L-фенилаланина, метиловый эфир L-фенилаланина и анисовый спирт, причем из указанного раствора получают метиловый эфир 1.-аспартил-1.-фенилаланина 1

Пример 27. 0,562 г (2 ммоль)

N áåíçилоксикарбонил-!. вЂ” глутаминовой кислоты и 0,860 r (4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира «,-фенилаланина растворяют в 1 н.Nao«-«, и.рН доводят до 6,0.

Полученный раствор смешивают с

50 мг термолизина и смесь встряхивают при 38-40 С в течение ночи. Осадок отфильтровывают, промывают 10 мл воды, сушат, получают 0,510 r кристаллов, т. пл. 80-.85 С.

Следующие результаты подтверждают, что получили продукт присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-1-глутамил-1.-фенилаланина и метилового эфира L-фанилаланина (1:1).

Продукт перекристаллизовывают из смеси этилацетата и í-гексана т. пл.

92-97 С. Eh.) 0 = О, 1 (С = 1, метанол)

Найдено, i: С 63,61; H 6,31; N 6,65 Ъ««N "«.Ф9

Рассчитано, б: С 63,75; Н 6,32;

N 6,76.

Инфракрасный спектр: 3340 см (колебание растяжения связи N-Щ;

2950 и 3030 см (колебание растяжения связи С-Н); 1730 и 1745 см (С = 0 сложный эфир); 1690 см= (С = 0 уретан); 1660 см (1-ое амидное погло45 щение); 1620 см (карбоксилат);

1530 см "(2-ое амидное поглощение);

1440 см " (С-Н деформационное колебание); 1405 см " (карбоксилат); 1240 до «310 ам (С-0-С колебание растяже50 ние и 3-е амидное поглощение);

1050 см (колебание фенила в плоскости); 700 и 750 см (колебание Фени. ла вне плоскости).

Спектр ЯМР, 8 : (l) 2,0 ppm 2Н); (2) 2,3 ppm «2H); (3) 3,0 ppm (4Н); (4) 3,6 ррп (3Н) и 3,7 реп 3H); (5)

3,8 ppm (.1H) (6) 4,3 ppm (1H) (7)

14ô,8 ppm (.1Н)1 (8) 5,0 Ppm «2Н); (9) 17 22

5,8 ppm (3Н); (10) 5,8 ртяп (1Н); (11)

7,2 ppm (1H); (12) .7,2 ppm (10Н); (1,3) 7 3 ppm (5Н) .

Эти результаты показывают, что продукт является присоединением формулы 1, где Rq R, R и и означают бензилоксикарбонил, бензил, метокси и 2 соответственно.

0,100 г продукта присоединения метилового эфира И-бензилоксикарбонил-L-глутамил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина добавляют при перемешивании 2,3 мл (0,32 ммоль) 0,14 и НСГ, и смесь затем перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин. Полученный белый осадок отфильтровывают и промывают 3 мл воды, сушат, получают 0,0683 г кристаллов.

Следующие результаты подверждают, что продукт представляет метиловый эфир «l-бензилоксикарбонил"L-глутамил-L-фенилаланина,,Чистота 100 ; выход

95,8i.

Кристаллы растворяют в этилацетате,.и продукт осаждают- н-гексаном, т. пл. 97- 99 С, «.«Л1, = - 11,0 (С = 1, метанол)

Найдено, л : С 62,63; Н 5,94; N 6,24

Сэ «ba ИаО

Рассчитано, л;: С 62,43; Н 5,92;

N 6,33.

Инфракрасный спектр: 3300 см (колебание растяжения N-Н); 2930 и

3030 см, (колебание растяжения С-Н);

1735 см (С = 0 сложный эфир); 1690 см (C = 0 уретан); 1650 см (1-ое амидное поглощение); 1530 см (2-ое амидное поглощение); l440 см (колебание деформации С-Н); 1220 до

1280 см (колебание растяжения С-0-С и 3-е амидное поглощение); 1050 см, (колебание фенила в плоскости) и

695 и 735 см (колебание фенила вне плоскости).

Спектр ЯМР, В : (1} 2,g реп (2Н); (2) 2,4 ppm (2H) (3) 3 1 pram (2Н); (4) 3,7 ppm (3H); (5) 4,3 ppm (1Н); (6) 4,8 ppm (1Н) (7) 5,1 ppm (2Н); (8) 5,9 ррп (1Н); (9) 7,2 ppm (1Н); (10) 7,2 ppm (5H); (ll) 7,3 ppm (5H); (12) 8,1 ppm (1Н).

Эти результаты показывают; что конечный продукт представляет собой соединение формулы IN где Ri R2,, Кз и и означает бензилоксикарбонил, бен- зил, метокси и 2 соответственно.

Полученный метиловый эфир N-бензи» локсикарбонил-L-глутамил-L-фенилала23,, 9101 нина посредством восстановления водородом превращают в метиловый эфир L-глутамил-L-фенилаланина, и гидролизом его превращают à N-бензилокси. карбонил-L-глутамил-L-фенилаланин, Пример 28. К раствору

0,686 г (3, 12 ммаль) хлоргмдрата метилового эфира 1-фенилаланина в 25мп воды при охлаждении льдом добавляет

2 н.NaOH водного раствора при переме!о шивании, при этом доводят рН до 7,5, затем не прекращая перемешивания, постепенно добавляют 0,360 r . ., (1,44 ммоль) ангидрида N-бензилоксисарбонил-L-аспарагиновой кислоты, рН 1з поддерживают в пределах 7,0-7.,5 посредством добавления 2 н.водного раствора NaOH. Смесь перемешивают в течение 2 ч, к реакционной смеси добавляют 1 н.HCB водный раствор, .чтобы щ довести рН до 6. Полученный осадок отфильтровывают, промывают 50 мп воды, сушат, получают 0,416 г продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарЬонил-L-аспартил-фенилала- 2$ нина {смесь 863 метилового эфира М-бензилоксикарбонил"L-аспартил-(Q)-1-Фенилаланина и 144 метилового эфира М-ЬензилоксикарЬонил-L-аспартил-ЯЗ)-1-фенилаланина) и метилового зв эфира 1-фенилаланин (1:1) (т. пл.

103-115 С). В реакционной смеси обра" зуется значительное количество ме" тилового эфира N-Ьензилоксикарбонил-1-аспартил-(Сф-1-фенилаланина, но большая часть соединения остается в фильтрате и в промывочной воде.

Полученный продукт присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбо" . нил-1-аспартил-(С . и Cp)-L-Фенилаланина и метилового эфира 1-фенил" аланина добавляют к 1,7 мп (0,7 моль)

0,4 í.НС0 при перемешивании, смесь продолжают перемешивать при комнатной температуре в течение 15 мин. По45 лученный белый осадок отфильтровывают, промывают 3 мл воды, сушат, по" лучают О, 136 г {выход 96,3i) кристаллов метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-1-фенилаланина (содержащий 173 N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-(Cp)-L-шенилаланина (т.пл.

110-118 С).

Пример 29. В 30 мл колбе

0,543 r (2 ммоль) N-бензилоксикарбонил-L-аспарагиновой кислоты и 0,918 r (4 ммоль) хлоргидрата этилового эфи" ра L-фенилаланина растворяют в 5 мл воды, к раствору добавляют 4 н.NaOH ., 17 24 значение рН доводят до 6. Полученный раствор смешивают с 50 мг термолизина, и смесь встряхивают в течение ночи при 38-40 С. Осадок отфильтровывают, промывают 30 мл воды, сущат, получают 0,913 г кристаллов, т. пл. 85-904С.

Продукт тождественен с продуктом . присоединения этилового эфира N- áåíзилоксикарбонил-Ь-аспартил-L-фенил1 аланина и этилового эфира L-фенилаланина (1: 1) .

После перекристаллизации из смеси этилацетата и н-гексана получают продукт с т. пл. 93-954C,f. -10 = + 6,0 (С 1, метанол).

Найдено, 3: С 64,50;.Н 6,56; N 6,63

Сз Ний Оу

Рассчитано, 4: С 64,23; Н 6,50;

N 6,61

Инфракрасный спектр: 3300 см (колебание растяжения связи N-H); 2900 до 3050 см "(колебание растяжения

С-Н); 1710 и 1740 см (С = О сложный эфир и С = О уретан).; 1640 см (1-ое амидное поглощение); 1585 см- (карбоксилат); 1520 см- (2-е амидное поглощение); 1440 см (деформационное колебание С-Н); 1380 см (карбоксилат);

1200,- 1270:см (колебание растяжения

С-О-С и 3-е амидное поглощение);

1055 см (колебание фенила в плоскости); 700, 730 и 750 см (колебание фенила вне плоскости).

Спектр ЯМР, 8 : (1) l,l ррп (6Н); (2) 2,7 ppm (2Н); (3) 3,0 ррах (4Н); (4) 4,0 ppm (4Н); (5) 4, 1 ррп (1Н);

{6) 4,5 ppm (1Н); (7) 4,7 ppm (1Н); (8) 5,0 ppm (2Н); (9) 6,2 ррп (1Н);. (10) 6,7 ppm (3Н); (11) 7,2 ppm (1Н); (12) 7,2 ррп (1QH); (13) 7 3 ppm (5H) °

Эти результаты показывают, что продукт является продуктом присоединения формулы ?, где R1u Е, R3 и и озна чают бензилокси ка рбонил, бензил, этокси и 1.

В 30 мл колбе 0,125 г (0,197 ммоль) полученного продукта присоединенияэтилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и этилового эфира L-фенилаланина смешивают

2 мл воды и 0,24 мл lн. HCL(0,24 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течейие 30 мин. Полученную суспензию фильтруют, осадок промывают 5 мп воды, сушат, получают

0,0807 r кристаллов этилового эфира

N-бензилоксикарбонил"L-аспартил-L-фенилаланина. Чистота 1003; выход

92,64. Кристаллы перекристаллизовывают из смеси этилацетата и н-гекоана, получают продукт с т. пл. 128135 С,LX)> = - 17,3 (С = 1, метанол) .

Найдено, Ж: С 62,82; Н 5,96; Х 6,40 о

88-92 С. Выход 75,6"ь в виде продукта присоединения метилового эфира Ы-Pнилаланина (1:1). После перекристаллизации из смеси этилацетата и н-гек" логичны продукту присоединения, полу- до лового эфира N-P-метоксибензилоксикарбонил-Ь-аспартил-L-Фенилаланина .и воряют 3 мл ацетона, к раствору добавляют 2 мл 2,4.н.НС, реакцию про- водят при 60 С в течение 1 ч. Реакционную смесь смешивают с водой, 1,2 н.

50 саноном, добавленным в качестве вну" треннего стандарта. Иетодом высоко" скоростной жидкостной хроматографии ра 4 -L-аспартил-L-фенилаланина. Вы-ход 72,73.

Пример 31. 0,3 продукта присоединения метилового эфира N-P-ме\

25 910117 26 токсибензилоксика рбонил-L-аспартил-Ь-фенилаланина и метилового эфира

L-фенилаланина, полученного в примере 30, разлагают и анализируют сог-. ласно примеру 30, но вместо ацетона используют диоксан.

С ьНьв i

N 6,33. Пример 32. Аналогичен при-

Инфракрасный спектр: 3300 см ; от . меру 31 но используют метанол вместо

2900 до 3100 см ; 1730 см "; < диоксана. Выход метилового эфира М

1690 см ; 1655 ; 1530 см ; <. -L-аспартил-L-gevvaaaawea 63,3i, 1440; 1200-1280 см ; 1030 см Пример 33. Аналогичен при690 см-"; 740 см . меру 31, но используют вместо диоксаСпектр ЯИР, о: 1,1 ppm; 2,8 ppm; íà N N-диметилформамид. Выход мети3,0 ppm; 4,1 ррах; 4,6 ррд1; 4,8 ppm, лового эфира 4- -L-аспартил-Ь-Фенин5,1 ррп; 6,0 ppm; 7,1 ppm; 7,3 ppm аланина 28,13.

9,6 ppm. Пример 34. Аналогичен примеПример 30. 5,00 г > ру 31, но в качестве нейтрализующего (16,82 ммоль) N-р-метокси-бензилокси-2о агента используют 4 мл диоксана, 1 мл карбонил-Ь-аспарагиновой кислоты и диоксанового раствора 5, 3 н. НС и

7 26 r (33 64 ммоль) хлоргидрата ме- триэтиламин вместо 3 мл диоксана, тилового эфира L-фенилаланина загру-, 2 мл 2 4 н.НС1 и 1,2 н. водного ражают в 1 00 мл колбу и добавляют 1 н. створа ИаНСОь, соответственно. Выход

1ЧаОН, РН раствора 6,0. Полученныи zs метилового эфира - -L-аспартил-L-фе- раствор смешивают с 2,0 г термолизи- нилаланина 98,6 . на и с 0,4 г картофельцого ингибито- Пример 35. Аналогичен примера, смесь встряхивают при 38-40аС в РУ 34, но Реакцию пРоводЯт пРи 90 С течение 5 ч. Осадок отфильтровывают, в течение 20 мин (вместо 60 С в течепромывают 100 мл воды, сушат, получа-зо ние 1 ч). Выход метилового эФира h ют 8,11 г кристаллов, имеющих т.пл. -Ь-аспаРтил-L-фенилаланина 88,5i.

П р и м е Р 36. Аналогичен примеру 34, но используют 4,5 диоксана и

-метоксибензилоксикарбонил-аспартил 0,5 мл диоксанового раствора 5,3 н.

-фенилаланина и метилового эфира фе- З5 НС вместо 4 мл и 1 мл вышеуказанных веществ соответственно, а также проводят реакцию при 90 вместо 60 С. Выход сана физические характеристики и ре метилового эфира 4 -L-аспартил-L-феьс зультаты элементарного анализа, ана- нилаланина 84 " <

Пример 37. Аналогичен примеченного в примере 26. ру 34, но используют 3 мл диоксана и .0 3 г продукта присоединения мети- 2 мл диоксанового РаствоРа 5,3 н.НСЗ вместо 4 мл и 1 мл указанных веществ соответственно, а также проводят реако метилового эфира L-Фенилаланина раст 4g .цию при 30-С в течение 120 мин вместо

60-С в течение 1 ч. Выход метилового эфира L. -L-аспартил "L-фенилаланина

98,6Ф.

Пример 38. Аналогичен примеводным раствором ЯаЯСО и циклогек- РУ 34, но использУют 4 5 мл диоксана и 0,5 мл 60ь хлорной кислоты вместо

4 мл диоксана и 1 мл диоксанового раствора 5,3 н.НИ соответственно. подверждено получение метилового эфи" Выход метилового эфира 1. -Ь-аспар™л-Ь-фенилаланина.

П. р. и м е р 39. Аналогичен приме" ру 34, но используют 4,85 мл диоксана и 0„ 15 мл концентрированной серной кислоты вместо 4 мл диоксана и 1 мп

27 9101 диоксанового раствора 5,3 н.НС . Выход метилового эфира Ф, -L-аспартил-L-фенилаланина.

Пример 40. 0,3 r продукта присоединения метилового эфира N-P-метоксибенаилокси ка рбонил" L-acna ртил-L-фенилаланина и метилового эфира

L-фенилаланина (1:1), полученного в примере 30, растворяют в 2 мл диоксана и добавляют 3 мл трифторуксусной 10 кислоты. Реакцию проводят при 60 С в течение I ч. Реакционную смесь упа" ривают под пониженным давлением, а затем к части этого вещества добавляют воду, триэтиламин. и циклогексанон is в качестве внутреннего стандарта, по" лученный образец анализируют высокоскоростной жидкостной хроматографией. .

Выход метилового эфира J -L-аспартил-L-фенилаланина 96,М. 20

Пример 41. Смесь l 000 г продукта присоединения метилового эфира N-P-метоксибензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1 1), по- 25 лученного в примере 30, 14 мл диоксана и 4 мл диоксанового раствора 5,3 н.НС3, загружают в 650 мл колбу „и, перемешивают при 60 С в течение

1 ч. Диоксан отгоняют из реакционной смеси при пониженном давлении, добавляют б мл воды и 20 мл диэтилового эфира к оставшемуся маслянистому продукту, перемешивают, смесь разделяют на две фазы. К водной фазе добавляют

1 0 мл диэтилового эфира, продукт экст3s рагируют трижды таким же образом.

Эфирные экстракты объединяют, дважды промывают 5 мл 54-ного водного раствора бикарбоната натрия и сушат над

40 безводным сульфатом магния. Эфир отгоняют при пониженном давлении, получает 0,176 r (выход 81,24) неочищенного анисового спирта. Водную фазу нейтрализуют 74-ным водным раствором гидрата окиси до рН 6, выдерживают

45 примерно при 5 С в течение ночи. Iloлученные кристаллы отфильтровывают и промывают 2 мл воды, сушат, получают

0,316 г (выход 68,54) неочищенного метилового эфира Ь-аспартил-Ь-фенил50 аланина. Иаточник и водные промывки .объединяют и подщелачивают 74-ным водным раствором гидрата окиси натрия до рН, продукт экстрагируют дихлорметаном (3 х 15 мл), объединенные экстракты промывают 5 мл воды, сушат над безводным сульфатом магния.

Дихлорметан отгоняют при пониженном

l7 28 давлении, получают 0,234 г (выход

83,44} неочищенного метилового эфира

Ь-фенилаланина.

П р и и е р 42. 1,189 гф ммоль)

N-P-метоксибензилокси карбонил-L-аспарагиновой кислоты и 1,837 г (8 ммоль) хлоргидрата этилового эфи" ра L-фенилалани на растворяют в 1 н. водном растворе Na0H, рН 6,0. Доводят объем реакционной смеси водой до ,15 мл. Полученный раствор смешивают с 100 мг термолизина. Смесь переме; шивают при 38-40 С в течение 7 ч. о

Осадок отфильтровывают, промывают

30 мл воды, сушат, получают 2,40I r (выход 90,2Ц продукта присоединения этилового эфира N-P-метоксибензилоксикарбонил-L-аспартил-L- ôåíèëàëàíèíà и этилового эфира L-фенилаланина (1; l ), что подтверждено нижеприведенными результатами анализа.

Продукт перекристаллизовывают из смеси метуола и эфира. Т. пл. 8287 С. (М + 6,0 (С = 1, метанол)

Найдено, 3: С 63,52; Н 6,57; М 6,54

См Н 4>N@Oio

Рассчитано, 3: С 63,14; Н 6,51

N 6,31.

Спектры инфракрасного поглощения и ЯИР дают следующие характеристические максимумы.

Инфракрасный спектр: 3300 см (колебание растяжения И-Н); от 2900 до

3050 см (колебание растяжения С-Н); !

720, 1730 и 1740 (С = О сложные эфиры и уретан); 1650 см= (1-ое амидное поглощение); от 1510 до 1540 см (2-ое амидное поглощение); 1440 см " (деформационное колебание С-.Н); 1390 см (карбоксилат); от 1220 до 1280 см " (C-О-С растяжение и 3"е амидное поглощение); I030 см 1 (деформация фенила в плоскости); и 690, 760 и 810 см (колебание фенила вне плоскости).

Спектр ЯИР, д : (1) 1,2 ppm (6H); (2) 2,7 ppm (2Н); (3) 3,1 ppm (4Н); (4)3,8 ppm (3Н); (5) 4,0 ppm (4Н); (6) 4, 1 ppm (1Н); (7) 4,5 рр (1Н); (8) 4,7 ppm (1H); (9) 5,0 ppm (IH); (10) 5,5 ppm (4Н); (11) 6,1 ррп (1H); (12) 6,8-7,4 ррах (14Н).

Результаты показывают, что продукт представляет собой присоединение формулы(, где R<, R2r Й и 11 означает р-метоксибензилоксикарбонил, бензил, этокси и 1, соответственно.

Повторяют процесс аналогично примеру 34, но используют полученный про910117

29 дукт присоединения вместо продукта присоединения метилового эфира И- )-.

-метоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина, получают этиловый эфир L-аспартил-L-фенилаланина. Выход эти. лового эфира 4- -L-аспартил-1-фенилаланина 95,54 °

Пример 43. 1,189 г(4 ммоль)

N-p-метоксибензилоксикарбонил-1,-аспа- i0 рагиновой кислоты и 1,725 r. (8 ммоль) хлоргидрата метилового эфира DL-фенилаланина загружают в 30 мл колбу и растворяют при добавлении 1 н. водно"

ro раствора NaOH; рН 6,0. Раствор раз-1з бавляют водой до 15 мл. Полученный. раствор смешивают с О, 1 г,термолизина, и смесь перемешивают при 38-40 C в течение 50 мин. Осадок отфильтровывают, промывают 30 мл воды и сушат, уд получают 2,109 r кристаллов, имеющих т. пл. 119-128 С, затем перекристаллизовывают продукт из смеси этилацетата и н-гексана, высушивают при 80 С

6 . в течение 7 ч при пониженном давле" 2s нии, Подтверждено, что соединениепродукт присоединения метилового эфира N-p-метоксибензилоксикарбонил-Lаспартил-L-фенилаланина и метилового эфира 1)-фенилаланина (I: Ц полугидра- З0 та. Т. пл. 131-138 ., 1 вЂ” вЂ” - 4,2 (С = 1, метанол) .

Найдено, 4: С 61.50,Н 6,12; N6,49

Сзь H q NyOe 1/2 Н О

Рассчитано, 4: С 61,29; Н 6,23;

N 6,S0.

Спектры инфракрасного поглощения и ЯИР дали те же характеристические особенности, что и в продукте присо40 единения формулы I, полученном в при". мере 26, где R, Rp, Rg и и означали р-метоксибензилоксикарбонил, бензил, метокси и 1 соответственно, за тем исключением, что поглощения, вызванные протонами воды и групп -NH- и . 45

% - сдвигались на 4, 1 ppm из-за возмущения, обусловленного наличием воды, поскольку продукт включал кристаллизационную воду, как указано ниже.

Навеску 1,5024 r продукта нагревают . 0 микроволновым излучением в течение

12 мин в микроволновой печи при частоте 2,45 ГГц и мощности 1,2 кВт, чтобы высушить образец, вес которого уменьшился до 1,48152 г после облуче- ss ния (потеря при сушке 0,,02091 r).

Элементарный анализ обулученного образца дал следующие результаты:

Найдено, 4: С 62,07; Н 6,17; N6,69

С 33 (<ай А Ор (<) ,-Рассчитано, С 62,15„ Н 6,16;

N 6,69.

- Спектры инфракрасного поглощения и

ЯИР облученного образца дали те же характерные особенности, что и в. про" дукте присоединения формулы 1, полученном в примере 26.

Навеску 1,0 r облученного образца смешивают с 4 мл воды и 2 мл l í. HCL затем полученную смесь перемешивают при 60 С в течение 3 мин. Фильтруют, вводят метиловый эфир N-p-метоксикарбонил-Ь-фенилаланина и метиловый эфир D-фенилаланина в молярном отношении 1:1 из твердой фазы и из жидкой фазы, соответственно.

Повторяют способ аналогичный примеру 34, но используют 0,3 r полученного продукта присоединения (полугидрат вместо продукта присоединения, полученного в примере 30). Выход метилового эфира 3 -Ь-аспартил-Ь-фенилаланина и метилового эфира D-фенилалайина 95,93.

Н р и и е р 44. 0,3 продукта присоединения метилового эфира N-р-метоксибензилоксикарбонил-Ь-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1), полученного в примере 30, растворяют в 10 мл раствора 0,31 н. НС в хлороформе, реакцию проводят при 60 С в течение

2 ч. Реакционную смесь упаривают при пониженном давлении, к остатку добавляют воду, триэтиламин и циклогексанон в качестве внутреннего стандарта, образец анализируют высокоскоростной жидкостной хроматографией. Выход метилового эфира * -L;аспартил-L-фенилаланина 94,34.

ll р и м е р 45. 53 4 r N-бензилоксикарбонил-L-аспарагиновой кислоты и 107,8 r (0,5 моль) хлористоводород ного метилового эфира фенилаланина помещают в 1-литровую колбу и добавляют.к смеси 300 мл водного раствора едкого натрия для их растворения и для доведения рН до 6,4. Добавляют к реакционной массе 0,3 г термоазы и 0,26 г моногидрата ацетата кальция, полученный раствор оставляют при 20 С на 218 ч, при этом в осадок выпадает полученное в результате реакции аддитивное соединение метилового эфира

ff-бензилоксикарбонил-L-аспарагил-.L-фенилаланина и метилового эфира 0-фе" нилаланина. Осадок отфильтровывают, 3l 91 01 .промывают водой, высушивают, Скоростной жидкостной хроматографией показывают, что выход продукта 92,74, считая на взятую N-бензилоксикарбонил-L»; . -аспарагиновую кислоту. 5

Пример 46. Процесс и анализ продукта реакции проводят аналогично примеру 45, но используют 161,8 г (0,75 моль)",хлористоводородного метипового эфира D-фенилаланина, 500 мл © раствора едкого натрия,. рН 6,7, 1,0 r термоазы и 0,88 г моногидрата ацетата кальция, вместо соответственно 107,8 г, 6,4, 0,3 г и 0,26 r при 25 С в течение 100 ч, вместо 20 С и 218 ч. Вы-!> ход 93,33, считая на взятую И-бензилоксикарбонил-L-аспарагиновую кислоту. .Пример 47. Процесс проводят в условиях примера 45, но используют

149,2 г (0,65 ммоль) метилового эфира з

DL-Фенилаланина гидрохлорида, 500 мп водного раствора гидроокиси натрия, рН б,б, 0,7 г термоазы и 0,62 r ацетата кальция моногидрата вместо l07,8 r, 300 мл, 6,4, 0,3 г и 0,26 r з соответственно,при 13"С в течение

195 ч вместо 20 С и 218 ч. Выход 90,9 исходя иэ И-бензилоксикарбонила-Е-аспартата.

Пример .48. 0,534 r (2 ммоль} зз

N-бензилоксикарбонил- 1.-аспартата и

0,863 г (4 ммоль) метилового эфира

L-фенилаланина гидрохлорида помещают в 30 мл колбу и туда же добавляют

7 мл гидроакиси аммония для растворе- з ния и доведения рН раствора до 6,0.

В раствор вводят 50 мг термолизина.

Раствор перемешивают при 69 С s течение 2 ч до выпадения продукта.присоединения из метилового эфира М-бензи- 4о локсикарбонил-L- àcïàðòèë-1.-фенилала" нина и метилового эфира L-фенилаланина. Большое количество воды добавляют в реакционную смесь, содержащую выпавшие кристаллы примесного соедине- .4$ ния для их растворения. Полученный в результате этого гомогенный раствор анализируют с помощью высокоскоростной жидкостной хроматографии; выход примесных. соединений 5М.

Пример 49. 0,534 r (2 ммоль)

N-Ьенэилоксикарбонил-Е-аспартата и

0,053 r (4 ммоль) метилового эфира

DL-фенилаланина гидрохлорида помещаS

17 32 ют в 30 мл колЬу и туда же добавляют

5 мл воды вместе с триэтиламином для растворения и доведения рН до 5,0. В раствор вводят 50 мг термолизина.

Раствор перемешивают при 33-40 С в течение 16 ч. Выпавшие кристаллы продукта присоединения, состоящего иэ метилового эфира N-бензилоксикарбонил"1.-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира D-фенилаланина, отделяют .фильтрацией, сушат. Получают 0,836 г кристаллов, т. пл. 96-113 С.

" р и м е р 50, 0,534 r. (2 ммоль)

N-бензилоксикарбонил-L-аспартата и

0,863 г (4 ммоль) метилового эфира

1л -фенилаланина гидрохлорида помещают в 30 мя колбу и туда же добавляют

6 мл аммиачной воды, для растворения и доведения рН до 7,2. В раствор вводят 50 мг термолизина и перемешивают при 38-404С в течение 4,5 ч. Выпавшие кристаллы продукта присоединения,. состоящего из метилового эфира И-бенэилоксикарбогил-L-acoap a-Е-Фенилаланина и метилового эфира И,-фенилаланина, отфильтровывают и сушат. Полу-чают 0,630 г кристаллов. Выход 51,84.

Пример 51. 10,7 г (40 ммоль)

N-бензилоксикарбонил-L-аспартата и

28,0 (130 ммоль) метилового эфира 1.вЂ” фенилаланина гидрохлорида помещают в 200 мл колбу и туда же доЬавляют

16 мл водйого раствора гидроокиси натрия для растворенйя и доведения рН до 6,6 . В раствор вводят 32 мг термолиэина. Раствор выдерживают до выпадения кристаллов продукта присоединения, состоящего из метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира "L-фенилаланина. Иолученные кристаллы отфильтровывает и сушат. Высокоскоростная хроматография показала выход 82,54 исходя из 11-бензилоксикарбонил-L-@cnapxaxa.

Пример 52. Процесс проводят в условиях примера 49, но используют

15 мл аммиачной воды вместо воды и триэтиламина, рН раствора доводят до

6,0 вместо 5,0. Получают 0,800 г примесных соединений. Выход 65,83.

Изобретение иллюстрируется табл. 1 и 2., 34

Таблица 1

9IOII7 продукта

Ао оочистки, C

120-124

117-120

104-113

116-119

123" 1 25

119-123

ЬЬ-Ь

LI L

L1 L

ЫЬ

120-126

ЬЬ-Ь

Lb-Ь

ЬЬ вЂ” Ь

LL-Ь

ЬL-Ь

ЬL-0

127""135

121-125

126-134 . 120-124

128-134

ЬЬ-Ь

ЬЬ 0

ЬЬ-Ь

ЬЬ43

Пример, б

Иэомерия продукта

115-124

118-124 I 06-118

113-116

103 112

1 05- ll 7

104" 108

105-110

105"111

117-120

120-126

96-»3

После очистки, С

910117!!

ФЧ 4!

=г хо

CQ O

ll о о о о о о

=,3

«Ф -Ф - Й -Ф

1 1 1, 1 1

Ф 00 40 Ф0 Ю Я 00 СО 440 COCO м m м м м сса м м м м сса о о

° ф О

-е э

1 1 .CO 00

Ф ъ м

40. !

4 ., е

З холуе

Z 1Z

ХOXIQ

9 z з cL

IQ O O

cI z!0z

ФР I

ФР! !!

ФЧ ФЧ М ФЧ

° ° a ° и

Х о

z л л д

ФЧ «» А! Ф

ФЧ «Ф М «Ф а а с е о о о о о о о о

Ф4Ъ

° ° о о м м а я

Ф о о

o o о

Фч an

» Ф о о о а о

С«4 ФЧ

« о о о

Ф о о о

« о

1»

0 с и

X л

« о! 3

X zO З, о о л о

О иб Ч,б СО

ФЧ СЧ С«4 ФЧ

«« « о о о о

ФЛ сО

ФЧ о о о а а

С«4 ФЧ

«« о о о а о ФЧ СЧ

« о о о

ФЧ

Ю о о о

ФЧ

Ф о л

ФЧ

ФЧ 41

В Юь о о

CV ФЧ

00 ФЧ

° ФЧ

Ю ° о о

Фбь

ФЧ

С«4

Ф g !»

Rz 8

I ! а !

1 X

1 I»

1 Q

1 X

1 I

Н\

ФЧ

Ф4\ о о ФЧ

Фч а

C× м

« м м а а

% а

СЧ СЧ

О с ю о л а

v z х L

r I»

Э Ig х а о о .л ..а о

0 ° !

443ама

4 б

1-1 1 б

1 1

1 ! ! !

1 !

- 1

ФГ\

С«4 о о ф о о а

ФЧ о о о о а а

Q а

S !

Фб S оа "т

О х (й Ф

СЧ

ЧР ъО

ФЧ О О an

» ° ° 11

Фбб Ф,Л С! о л о

Ф!

«« а !

Ф !

Ф 4

« фа е

+ о + оз

«Ч Ч е е

« сч сО л л! а

4! в

Ф!б

X о с

X o а<ч

ФФФ х

X со

z o аю

r. з

ICI

X с о о о

an aan

Q о о ао .v аю

Ig ф

2аа

QI е» о 2о

an ао

gI 1»

X o

".4 о

Ig °

Iо л ь о а an

I»

z л а о

I ° 1

X I l» «»

ФЛ Д m ФЧ

Ф ФЧ С«4 «Ф уол

an э о! и

z й

an Ю

Ю ФЧ

lA C4 ФЧ

1 °

CL !.

ФЧ М .Э Е

%«««Ф» Ю«М«!

I ! !

I ! 1

1 ! !

1 о

2 а

Ф»

r о с«! а

4I в

I о !

° а

1 4

3 О а. х с!в2

1 Cc) Ig

Р 1

Ф !

О 1 Z

44 О

4> о

z z!!б Ig а 1 Ф!б 44

) ! б

1 !

t ! !!

1 !

I !

1 !

I !

I»

ФО

In е

ФЧ 44 1 Е

4О ФЪ

N ФЧ ФЧ ФЧ ФЧ ФЧ

ФЧ 4Ч «» « ФЧ ф

910117

I. o

1 «

Ф; >

1 СО м

1 ! !

Ф ° ° ! !

I м

° »

I («ф

1 m

I а

I а ! °

> СЧ

> (е

° 1 Й g с= ф- z el Й Х

ЕФ e (Oe

„1 R eaa

91 ф>

Z I е.«Ф

> а

° е«

I I

3--3

> I со OO м м

e e о о о

Э е «

1 I I 1

CO ЮО CO ФО CO

m i м м m в а сч а а

М М ФЧ, СЧ СЧ а

СЧ Cal

° е

М ее

° е е ° б ° е

° ° ее ° е

О ъО ЕО

Ч .3 СФЪ а а о о о

О еО

С« а а о о м м а а о м л

М еО

an а

О СЧ о о о о аА м о л о о сО Е Р

cO aO м сч

Ь о

О О о о а а

« л О

СЧ а о еО СЧ

СО СО

СЧ а ° о о о о о о а а а а о о м а

ch м 3 а а о о

СС1 CO о п

«» «I сч

an an а (Ч СЧ а а an а а а

° СЧ СЧ CV ф «е а с л

СЧ а о

СЬ

ch (Ч е с/Ъ

>» о с о

z х

l > t

z о э с(xz

ooх е х Ф! а а

t СЧ

° »

l l о! с!!!

1 j! фе а

l »! °

СЧ (t

t (1

cfa а а СЧ со а а сч а в а an а м сч сч сч а а

СЧ П м а

О (СЧ О а а О еО ф(+ о о л о о а а» «Л о о

o D а а л in ao х

2 с ойдо в аan

e eXo о оаа

o e

° >еа е

Се> е о

o X D о ао

° ф> а !

» о о о а

СЧ о о а о

СЧ

D а

1 !

1 .Ф .1

I I

1 б

I !

1 1

1 Я

1 !

1 ЕО

1 е» б б о о сч е а а m a о е а .е (ф е «е а а Сее!

Л О

ЕО СО О

«д

-Ф е О

° е м

ЫВ d8 И сч

t«3 а 4б

Сеф ° (1 о о

o o е !

Ч СЧ СЧ ФЧ ФЧ .Е Ia>!

>ф ф ф!

c a! ФФ" с! ххах.е

О,.ФФЪ Х

zz(X К>Обй?Охео

a! eezzac; =! Sry04о ъъетс>х

>-еоо о оеzaoхz !

I l

>>(О ЪОО ъ ax(V .l SZV

С > ezz

1 ФС > A Е Y

1 Z D >

I N С l (Э ео>z>ъ ай> ФО> Ф (- (игz zo

ze(эo(xz

Фi- > XXOO

I Е t Е Ъ(О

za> eexa о»- t зxm

v > 2 Е Y

> °

> l Ф >

О О ! a(-D> аа* < Фос! в(оо > sâÔ

I >е Х (!» ((3 Е ф>оХ

z - (о

XYL(t XX

Ф Ъ (. ф>

8(-» a8

ХК>-1 >-X>C (-em> зеъ о x a > (- сф х

> ! > (>- щ

> v a

> е х ае z

> a хох

l a В е ! l ! (O а

1 Е

g o

X aсЯ

1 а

I В !

o a.

> Ю

1 3 о

l Ф.m

l,Й l»

1 (Z. о Ф

x x

3»

1 I

z»I Ю Ф Х 3

z о з

SI-oo

x vaz

СЧ СЧ СЧ СЧ СЧ СЧ СЧ СЧ

Л 3 D O aO О М а НЪ

О e O O СО О М О М

СЧ сО 1 -4 СЧ .Ф а ь ь а,л ° ° °, л ее о o o o о е о a о

Л (» сО О О СЧ Е а а а а а а л а О О О О О О О О сО а О сО

ЧЭ Л 61 O ФЧ Ус% IA ф Саа „ф C!O g еа ф

« ф O ф

I tO ф и

В ! ! O ф z

° g

I Ю ф а

1 Ю фф

Ф е

I С. и

1 Ю

О ъ

1 Е

1 И (1

I t1 Z

I L

1 Е

1 ф> с

1 ф>

3 !

Ф а !

1 з

1 ф е а

1 (33

1 1»

I Z

1 ! О

1 Z

I e

1 С

1 Ю

3 ф 3 ! 8, 39 910117 40

Формула изобретения динения дипептидного производного и

Способ получения продуктов присое- аминокислоты общей формулы 1

m, o o а>-с -се-ми есс -(сн ) - сн-с -мн-сН- с -R3

l. 1

Rg Eg !

Составитель В. Волкова

Редактор И. Ковальчук Техред 3. Фанта Корректор Г. Решетник

Заказ 3734 Тираж 448 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 где R вЂ” бензилоксикарбонил, и -метоксибензилоксикарбонил

Rg вЂ” бензил;

R вЂ” метокси, этокси-группы;

n вЂ” l или2, I$ отличающийся тем, что

М-замещенную аминодикарбоновую кислоту общей формулы П, I

О МК О

И П

»с-(сн,)„-ск- сви где. значения R и и указаны выше, подвергают взаимодействию со сложным эфиром аминокарбоновой кислоты общей формулы Ш

;н, -и- с-я, !

Зф где значения Rg и В указаны выше, при молярном соотношении соединений формулы II u III 1:1 - 1:3,75, в водной среде, в присутствии металлопротеазы при рН 5,0-7,2, температуре

10-90 С.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Josef S. Frufon Advances in

Protein chemistry, Academic Press, Jnc. New Jork, Н. Y. 1949, vol. 5, с ° 33 °

Способ получения продукта присоединения дипептидного производного и аминокислоты

Способ получения дипептидныхэфиров // 841583

Способ получения метилового эфира -карбобензокси- -0-бензил- - -аспартил- -фенилаланина // 713863

Способ получения метилового эфира -аспартил фенилаланина // 713862

Способ получения алкиловых эфиров -аспарагил- -фенилаланина или их солей // 544367

Водорастворимые 2-нитро-4-сульфофениловые эфиры защищенных аминокислот как промежуточные продукты в синтезе пептидов // 707909

Способ получения аминоацильных или пептидных производных фосфоновой или фосфиновой кислоты или их солей // 679131

Способ получения производных тирозина // 671722

Способ получения -3- (3,4-диоксифенил) -2- метилаланинпептидов // 656505

Способ получения оксимов или гидразонов дезаланилотетаина или его производных // 593658

Способ получения этилового эфира дипептидов // 383712

Способ получения солей канцеролитических пептидов // 132229

Способ получения производных тирозина // 671722

Способ получения -3- (3,4-диоксифенил) -2- метилаланинпептидов // 656505

Производные пептидов или их фармацевтически приемлемые соли, способы их получения, фармацевтическая композиция, способ предупреждения и устранения тромбозов // 2103276

Трипептид или его фармацевтически приемлемые соли или сольваты, фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении амидазы тромбина // 2105010

Способ лечения острых респираторных вирусных заболеваний и гриппа // 2107498

Изобретение относится к медицине, а именно, к способу фармакологического лечения острых респираторных вирусных заболеваний и гриппа с помощью индуктора эндогенного интерферона-дибазола

Средство для повышения роста и сохранности молодняка // 2111756

Производные n-ацилпролилдипептидов // 2119496

Иммуностимулятор и препарат на его основе // 2120298

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммуностимуляторам и препаратам на их основе