Способ диагностики диффузного гломерулонефрита

 

В.А. Кулганов и В.Л. Зубер 1

1-;(22) Авторы изобретения (7E) Заявитель (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ДИФФУЗНОГО

ГЛОИЕРУЛОНЕФРИТА

Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии для диагностики сглицерофосфолипидемий при гломерулонефрите и хроническом пиелонефрите.

Известен способ диагностики диффузного гломерулонефрита путем определения в сыворотке крови пациента хроматографических фракций фосфатидилсерина, фосфатидилхолина, фосфа1Ю тидилэтаноламина, фосфатидной кислоты, определения содержания в них липидного .фосфора с последующим сравнением его количества в каждой фракции с таковой полученной из сыворотки здорового человека (1) .

Однако известный способ не обеспечивает необходимой точности диагностики диффузного гломерулонефрита.

Цель изобретения - повышение точности способа.

Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа диагностики диффузного гломерулонеф2 рита путем определейия в сыворотке крови пациента хроматографических фракций фосфатидилсерина, фосфатидилхолина, Фосфатидилэтаноламина,фосфатидной кислоты, определения содержания в них липидного Фосфора с последующим сравнением его количества в каждой фракции с таковой, полученной из сыворотки здорового человека, дополнительно выделяют фракцию сфингомиелина и определяют в ней содержание липидного фосфора.

Способ осуществляют следующим образом.

К сыворотке крови 1,0 мл добавляют 10,0 мл смеси хлороформ-метанола (объемная пропорция 2:1) . Содержание пробирок перемешивают и выдерживают на водяной бане 3040 мин при 40-45 С. Этим достигают выделение липидов из липопротеиновых комплексов и осаждение денатурированного белка. Содержание пробирок фильтруют через складчатый

92457

3 фильтр в дрозофильные стаканчики.

Для удаления из экстракта водорастворимого фосфора на Фильтрат наслаивают 15-20 объемов дистиллированной воды. Ее добавляют до верха стаканчика и ставят в сосуд также с дистиллированной водой на ночь. На следующий день верхнюю водную фазу осторожно удаляют с помощью водоструйного насоса, а к нижней (хлороформен- io ной фазе, содержащей липиды) добавляют по каплям метанол (1-2 мл) до полного растворения тонкого пограничного слоя-пленки. Затем производят выпаривание в термостате при 50- 15

55 С. После выпаривания липиды растворяют,в 0,5 мл смеси хлороформ-метанола (2:1) и наносят шприцем на пластинки с тонким слоем силикагеля (марки КСК), который предвари- щ тельно измельчают- на шаровой мельнице, отмучивают и отмывают от примесей железа. Используют частицы размером 200 меш..Размер пластинок

13х18 см. Силикагель тщательно пере- 2s мешивают с водой и полученную однородную массу наносят на пластинку, находящуюся на столике со строго горизонтальной поверхностью. Непосредственно перед нанесением ли- Эв пидов пластинки с силикагелем активируют в термостате при 110 С в течение 50 мин. Перед нанесением вещества пластинку с адсорбентом выдерживают в камере для насыщения силикагеля аммиаком до тех пор, пока фронт растворителя не достигнет верхнего края пластинки. Липиды наносят полоской шириной 15-20 мм на расстоянии 1,5 см от нижнего края пластинки. Разгонку производят в камере с системой растворителей хлороформ-метанол-7N %1> (60: 35: 5) в течение 35-50 мин. При этом хлороформ и метанол после соответствующей обработки (хлороформ после высушивания над СаС1 и метиловый спирт после абсолютирования) перегоняют.

Хроматографирова гь повторно в одной и той we порции растворителей не ре-комендуется. Растворитель заливают в камеры за 1 ч до погружения в них пластинок. Для лучшего насыщения стенки камеры с внутренней стороны до дна покрывают Фильтровальной бумагой. Оптимальная температуо ра для разделения фосфолипидов 22 С

При более низких температурах растворитель проходит через пластинку очень медленно, при более высоких получается нечеткое деление. После разделения хроматограмму вынимают из камеры и сушат в термостате при

50 С а течение 30-40 мин. Для проявления фосфолипидов используют пары йода. Йод окрашивает липиды, имеющие ненасыщенные связи, в темнокоричневый цвет. Насыщенные липиды слабо окрашиваются парами йода.

Окрашенные пятна обводят препаровальной иглой. Для идентификации фосфолипидов используют характерные цветные реакции и изменение величин Bf — отношение расстояния от старта до середины идентифицируемого пятна к расстоянию от старта до фронта. 8 качестве специфических проявителей применяют раствор нингидрина, аммиачный раствор азотнокислого серебра, реактив

Драгендорфа и родамин 6У. Применение цветных реакций и величины Rf .. позволяют идентифицировать 5 фракций: фосфатидилсерин, сфингомиелин, фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидную кислоту. Перед определением фосфолипидов строят калибровочную кривую по стандартному раствору КН2РО,1. Далее каждую фракцию переносят в пробирки для сжигания, куда добавляют по 1 мл 724-ной

НС1 0,1. Сжигание длится 34-45 мин.

После этого добавляют в пробирки по 1 мл воды и переносят в центрифужнйе пробирки. Время центрифугирования 10 мин при 3000 оф мин.Процедуру повторяют дважды. М центрифугату добавляют по 0,2 мл 54-ого молибдата аммония и 0,2 мл эйконогена. Содержание пробирок перемешивают и доводят водой до 5 мл. В качестве контроля берут силикагель из тех зон .хроматограмм, где не обнаружено наличие фосфолипидов, и проводят все операции, как и для проб. Фотометрию осуществляют на

СФ-4 при длине волны 830 нм. Расхождение в определении глицерофосфолипидов в параллельных пробах не превышает в среднем 54, что свидетельствует о хорошей воспроизводимости, метода. Результаты выражают в микрограммах липидного фосфора, а окончательно в процентах.

Пример 1. Больная P-ва

Е.Г., 41 год, диагноз: острый диф9245

5 фузный гломерулонефрит с изолированным мочевым синдромом; Хроматограмма фосфолипидов:. Фосфатидилсерин (ФС) 12,64, сфингомиелин (Сф)

16,73, фосфатидилхолин (ФХ) 56,74, фосфатидилэтаноламин (ФЭА) 10;8Ж, фосфатидная кислота (ФК) 3,2/.

Пример 2. Больной О-н Н.В., 37 лет, диагноз: острый диффузный гломерулонефрит с нефротическим о синдромом. Нефрогенный отек легких.

Остаточные явления рожистого воспаления в области голеней. Хроматограмма фосфолипидов: ФС 8,83, СФ 13,53, ФХ 56,34, ФЭА 17,5Ф, ФК 3,54.

Пример 3. Больной П-в В.ф., 48 лет, диагноз: хронический диффузный гломерулонефрит с изолированным мочевым синдромом. Сопутствующие заболевания: хронический бронхит.

Эмфизема легких, дыхательная недостаточность. Хроматограмма фосфолипидов: ФС 11,34, СФ 22,7Ф,ФХ 50,74, ФЭА 4,5Ф.

Пример 4. Больной П-нь В,Ф., 49 лет, диагноз: хронический диффузный гломерулонефрит с гипертензивным синдромом. Сопутствующие заболевания: пневмофиброэ. Хроматограмма 30 фосфолипидов: ФС 14,44, СФ 19,94, ФХ 49, 14, ФЭА 1 3, 2:о, ФК 3,4 î

Пример 5. Больной Б-в. Ю.П.

34 лет, диагноз: хронический диффузный гломерулонефрит смешанного типа. Фосфолипидограмма: ФС 12,74, СФ 12,4 о ФХ 45 34 ФЭА 19 9 о

ФК 9,74.

Пример 6. Больной П-в Б;А;, 43 лет, диагноз: хронический диф- щ фуэный гломерулонефрит в терминальной стадии. Фосфолипидограмма:

ФС 10,74, Сф 28,2Ж, ФХ 45,94, ФЭА 11,6Ж, ФК 3,64.

Пример 7. Больная В-ва

И.П., 47 лет, диагноз: хронический пиелонефрит беэ нарушения аэотовыделительной функции почек преимущественно с поражением одной почки..

Сопутствующие заболевания: гипертони- в ческая болезнь II ст., церебро-кардиальный вариант. Диффузный эутиреоидный зоб. Фосфолипидограмма:

ФС 15,6Ф, СФ 17,33, ФХ 30,1Ж, ФЭА

23,7 ФК 1 3 3i

Пример 8. Больная 3-ва О.А., 54 лет, диагноз: хронический пиелонефрит без нарушения азотовыделитель72 6 ной функции почек с преимущественным поражением обеих почек. Фосфолипидограмма: ФС 14,74, Сф 19,24, ФХ 31,4/, ФЭА 22,1r,, ФК 12,64.

Предлагаемый способ был применен при обследовании 123 больных в возрасте от 11 до 73 лет. Наблюдением установлено, что повышение одной фракции ФХ от 44,0 до 61,0ь и уменьшение трех фракций: ФС от 17,1 до

6 3ã., ФЭА от 22,0 до 4 43, ФК от

10,8 до 0,6i свидетельствует об остром диффузном гломерулонефрите; отличие от нормы пяти фракций - повышение двух фракций: СФ от 14,7 до

23,91, ФХ от 33,6 до 63,73 при понижении трех фракций: ФС от 15,5 до 8,3i, ФЭА от 25,7 до 4,03, ФК от 8,3 до 1,8г — подтверждает диагноз хронического диффузного гломеру. лонефрита с изолированным мочевым и нефротическим синдромом; отличие от нормы трех фракций - повышение одной фракции ФХ от 31,8 до 59,84 и понижение двух фракций: ФЭА от

22,8 до 8,4, ФК от 11,1 до

2,13 — свидетельствует о хроническом диффузном гломерулонефрите с гипертензивным синдромом;отличие двух фракций от нормы — повышение одной фракции ФХ от 25,9 до 61,93 и понижение одной фракции ФС от

17,14 до 7,1В - говорит о наличии хронического диффузного гломерулонефрита смешанного типа; отличие от нормы одной фракции — понижение ФС от 13,8 до 5,43 - подтверждает диагноз хронического диффузного гломерулонефрита в терминальной стадии, Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить пять фракций и выгодно отличается от известного способа, тем, что фрак. ции сфингомиелина и фосфатидилсерина совершенно четко делятся и, таким образом, исключаются погрешности при определении липидного фосфора в них, что увеличивает воэможность более точной диагностики диффузного гломерулонефрита.

Формула изобретения

Способ диагностики диффузного гломерулонефрита путем определения в сыворотке крови пациента хроматографических фракций фосфатидилсери.

924572 8 ределяют в ней содержание липидного фосфора составитель 6. Алмазов

Техред Т.Маточка Корректор В. Синицкая

Редактор С. Юско

Тираж 883 ° Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, N-35, Раушская наб., д.4/5.

Заказ 2806/60 филиал ППП "Патент", г. Ужгород,ул. Проектная,4 на, фосфатидилхолина, фосфатидилэтаноламина, фосфатидной кислоты, определения содержания в них липидного фосфора с последующим сравнением его количества в каждой фракции с таковой, полученной из сыворотки здорового человека, о т л и ч а ющ и й. с я тем, что, с целью повышения точности способа, дополнительно выделяют фракцию сфингомиелина и on- 10

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Смирнова Н.Н. Изменения содер-. жания глицерофосфолипидов при диффузном гломерулонефрите у детей.

Автореф. дис. на соиск. учен. степени канд. мед. наук. Л., 1974.

Способ диагностики диффузного гломерулонефрита Способ диагностики диффузного гломерулонефрита Способ диагностики диффузного гломерулонефрита Способ диагностики диффузного гломерулонефрита 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях
Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови
Наверх