Способ определения активности гормона тимуса в крови
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ГОРМОНА ТИМУСА В КРОВИ путем вьаделения сьторотки крови, удаления из нее ингибитора гормона тимуса ультрафильтрацией с последующей постановкой реакции роэеткообразования в полученном фильтрате, отличающийся тем, что, с целью повыше;ния чувствительности, удгипение инги битора проводят непосредственно из крови путем ее дефибринации, а реакцию розеткообраэования ведут в полученной сыворотке с лимфоцитов тимуса мьвией в присутствии тёофиллина и по степени ингибирования розеткообраэования определяют актигвность гормона тимуса.
/ .ф
СОЮЭ СОБЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
1(5)) 0 01 Б 33/48
ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛ4М ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ .
Ф
1 (21) 3219824/28-13 (22) 17.12,80 (46) 07.08.83. Бюл. 9 29 (72) В.A.Èàëûæeâ и T.Ê.Âàëóåâà (72) Киевский научно-исследовательский йнститут эндокринологии и обмена веществ (53) 612.13(088.8) (56) 1. The Biological Activity of
Thymic Hormones, Rotterdam, ed. by
Van Bekkum, Kpoyker Sci.. Publ. 1975, р. 235. (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ AKTHBHOC
ТИ ГОРМОНА ТИИУСА В КРОВИ путем вцце- .
„„SU„„A ления сыворотки крови, удаления из нее ингибитора гормона тимуса ультрафильтрацией с последующей постановкой реакции розеткообразования в полученном фильтрате, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повыаения чувствительности, удаление ингибитора проводят непосредственно из крови путем еа дефибринации, а реакцию розеткообразования ведут i полученной сыворотке с помощью лимфоцитов тимуса мышей в присутствии теофиллина и по степени ингибирования розеткообраэования определяют актИВность гормона тимуса.
Изобретение относится к б)<с)х1<м1111 и мОжЯт быть испОльзов анО В медкц:1НЕ В КЛИНИЧЕСКОЙ ПРактИКЕ И 3 К С 11<3РИМЕНТаЛЬНЫХ ИССJIЕт,oваНКRI --,,..
ИЭНОМ СTeH CIIGСQQ ЗП ОЕ ттw JIЕ =;)тя
Н0С ТН I ОРМОНа Т111?1?тс а К PQB К ПУT -j?« выделения сьвороткк к )QBH„удал- ня:=: иэ нее НКГибиBopa Гарма ;1а T:::- !I »I)«ca.
УЛЬтРафИЛЬтРаЦКЕй С .10<СЛЕДУ1ССЦ»З и, Ог тановкой реа:<цкк разетi ОДHаКQ ИЗВЕ C ТНЬтй .1?Оса? 3 5.).;;, НЕДОС Тата,HO ЗЫСОКСй т? Ч Ст т, ят ЛЬ костью, Ц!ЕТ1Ь1<т «?<3 абртз тт. Нття;.В Ля,=: Г< я;тс,; шенке чувств итез(ь нОс т!я . Цель достиг ает--:: ОПрЕдЕ ?1Е11КГт aK THB 1!ОС т Гарг1О,."-.i "„-К?,? ленкя сыворзткк крови, тг.-:.Лен 1.1ЕЕ т,<кт ?.16КТQ Çа <" ОМ»)HЯ филь-.рацией с паследуюи,„--.й »-к< кой реакции разеткаааразо=.а.нк ;. ЛУЧЕННОМ фс»ЛЬтюат т аЛЕН1 < ТОРа пРОВОДЯт HPHoc 1)2, Ви гтуте" т ее пефкбокна*!Ит»1 . =? )3(=с - т !.:с Ра 3 е тк ОобРа зов сан ИЯ НОй сыворот1 е с ПОМО!Кью лкмфац;. -. :=. ТИМУСа "тЫШЕй В ПРКСУТСтвин тзат!т.-.:-.: .— нa и пo степени кнгкбH?ОаваH я тз;,--,-, кообразованкя onpPïPIJ:;BþT акт)1внстс ::, гормона тимуса, Способ осу1це -..ТВЛЯЮТ с.лец??1с Ц*.<«. разам, ОПРЕДЕЛЕН H<3 ?2КТКВ HC) «?4 ГСРГ:О-„a МУСа В ?!<РОВ К С КЛаДЫБ 2Е т
ЦИTaРНОй СУСЛЕ Н 3КИ т ПОС тс.НОВ К г)т !ЗЕ аК ции и ее уче т. К".3ОВ B сОбирают кз СтЕРИЛЬНЫй::ПРИЦ< ?3 01- ЬЕМЕ О, В l, 2 МЛ И ПЕрЕНОСят В C)уяуЮ? Проб)тт)<т СОДЕрЖ<)тцуЮ 4-- б CreKЛя;. 1тЫХ 1ттарКК 3; ДкаметРО?м ? 5- 3 т 0 зст4, 11?<3<3?з.-!РАЙ<;;,т в течение всегс време;--.к .!Ос гупленкя нее крови и 15 мин после 3?Того вст я-хив ают да 11алн<3й дс ф -6p)Iíaöl-.к I< pQB:,.1. Дефкбрк11краван! .ую кровь цтентр-.<т?тг)т,-. руют прк 3 тыс. Об/мкн в .сечен.;е 15 мин, отбирают сыво;отку H r QToBIIт различные разведения на среде 99 или другой падхадясцей сре,."„:. „ ПРКХ О ? ОВЛЕНКЕ С УС 1 Н 3. ги КЛЕ .га" тимуса, зрктрсзпктарнсй суспснзк:::. постановку реакции проводят ? Звесз:ным способом. Ткмттс мышек любога пол-. 303!3=:.," C:; 1-4 мес, тзмельчают: —.:.:;. Ка "Qã?:.«в с<"де для культур тканей (!-I.a j! p!1 .Ср де 1 99 } любым пстдз<ся.:.-1ц я1. " <.тсс О: я» и клеточную взьесь;.)к? ь. ":::,;. тонкую стал1 ную клк;.,::;!<за. -QB)»1.; с . ку, Затем к ". TKИ дв:а:.;гты Q т!»гс-; —.:,ают с 13;- .-дай, центр. -)фугируя .:рн 4GG "= р ние 5-т ; 1" !1 тк го с,,=„p.. T B звес.»-, -:: TСЗб;. -- ОД;,ОМ 1 ?КЛЛКЛНТРЕ СРЕДЫ СОДЕР;,, ал-;С: .< - „1 r кМФОЦКТ . т-, : J?IB РВ1 ?3K Ц111„;Р1С ПСтЛЬ3, Ют РР11Т)3ОЦИб.-: ?3с< на? I TO "1)I<»q5I B OQ! I?1B a((!T А из Иала,"- тя Орам, J,= ятг)я;;зугкруя B т = че ен «1;-„: тз - т I»IHH, <ЗТ1 1» -:тр?.; -А:-0 I?1-;,, Ы у(: le Г)дируЮТ В К уль ту13й срзве —.;I Ko:1H«BÍ Tpa?!H«tI 350." . =., . т к к, ., г", ..:,.(::?«)к;1е ХОНКЧЕСКИ6 Пт3абКР С! т1;.1Л СУC!.33HЗИК тКМИ<з 1,лл т.в т? ед?те,«)ГС»т?<1:, В,з)1? -1!I,, !Qa ЗВЕДЕНК. . я — .=;-, - я:-1К1»,у<я В ?1 ПрабкрКК? Ь ны —: сто- бкрк:- В:=с =с сыворат" ...Ся" " .,,;.,?Л CрЕдЫ, . .ОН:.РОЛЬ"-.!<30 -,.—,-авя z В Bтермас?) с-.i:=HaÈÍ клеток инку< т;:; -1»3НК»3 <с !ill! . ПОСГ1Е ЗТОГQ .;. ?ЗВ.-,т:у р:::; т <».;«" H!НЫ). <<раб дабаВЛя" ;За !!,, -Ь-. G - 1 З.гBOpa ТЕОФКЛЛИс.:-.е.: —,е,.; в другую палоь кну ВС, } .-? Л Ст)адЫ, ИНКубацИЮ В П ОЛЖНЮТ Е<ЦтЕ В ТЕЧЕ НИЕ «и терматс < а?С )«1! и 3 Н BX дебаB BI?3T ПО 3, .! 1»тл KPК?I ГО O»3ЛЕ -!HOВ С УС)IЕН3 КИ - -,к.-г,.зц1.тав Клетки пе-.Заме!..тивают и . - --1)я
С а;-! --..;!1
О ;та; т< Q - — - Н Р СУ ПЕНДЬ1РУЮ На ВЕР <1-. КаЛЬНОМ ?ООтатарЕ При CKopOCTN Bpa ?цгзнкя барабана 1 G об/мкн в течение унг} s. :т<н — .,--=- и;rIeтксй Отбирают каг,лю СУ" П?)IЗКК К 1тЕРЕНС<ЗЯт В СЧЕТНУЮ Ка«С OV 1 Н1:1„ Зз » т- 3 K a!? РУ PQ OBЕВ a } 3дc÷кт:.ва;-ст . :.::ло розеткаабразуюсцях <::. -.«к 1-т?К} =-О ВС; и КаМЕрЕ Г.ОД 1 ..";:.
J! .;|, L 11 .: «В, C 33:-- НКВ aIOT KOJIH -с —. Q РГЛ< в 1.! ° Зх с тс Офклинам и т„т с-,;; . а.тз,,:.- . с ют кн гкб крую»= .С»)йС - КС; тт-:.;.::,;.,:;.Il Ia B ПРОЦЕНтаХ. :! < .: . В Я О<: т Ь Г С Рг.;С вЂ”. 3 т КМУ С = В С ЫВ ОРО т, - я-.ывяют .-<..: =Ибсльше1яу разведе1-, кю ес Koт<зро:::.: бесг<еч яв aе т ингибирОК „ ?Bа< к;Ii!» «.04 ка 5G 3,-BB,.)AHû oi33óëьтты оп ;:3ЕТ1ЕЗЗЕН1-1Я:— :.:-Я- ;OCTH -ОРМс)Н тИМУСа г Дстд,бр:-< н я т с 3 с!в .- Ой к рор и мьыей Прк ОтИ П<ЗЛ: .,;,,.-; .. Ь рЕДЛНГНЕМЫМ СПОСО—.с, Г;.1-,...:... --. гт.т: —. Н; —;-, я;-: ., -а<< Т1.!СИЗО!30тк «Ч .1 <1:;;,„-Зц ., г-„.;,,-,:,11::,,?1«:,ЗК Гаг«тира-l я1- ". . .j?»jl!, " . -.: ? ь !!11 яо кз Та блицы т 1;..С..л=.:..-ае.",. ",у -; О: Обу гормон ткму,,:ред: ляе. Ся B сы Iopc TKp) при раз;. :Де н lк 1 1? 0 О, . О<д=-: <а-:: чувстВитель ;:..т,:31. .;=.;.ного способа эначител=-но 925186 ниже " активность гэрмона тимуса определяется при разведении сыворотки lг32. Результаты атого определения свидетельствуют также о том, что дефибринация действительно способствует 2173 2622 8548 2030 8621 1гl 2411 9461 9112 1 г10 934 7l ° 0 3188 14,4 62,9 5000 5841 . 1:16 2300 4424 62,0 1709 6200 lг32 27,0 3636 5747 65,2 3225 9255 lг64 1:128 3,7 2900 3010 2372 7692 2666 7833 1:150 4900 8200 lг200 1:250 4625 5790 П р и м е ч а н и е: каждый показатель представляет среднюю трех параллельных проб. Как показали испытания по предла- Предлагаемый способ обладает высогаемому способу, активность тимуса кой чувствительностью и не треопределяется в сыворотке различных 55 бует пРоведения тимэктомии у ььгшей видов животных: мышей, крыс, морских и приготовления О-антисыворотсвинок — а также и у человека. ки. ВНИИПИ Заказ 8140/4 Тираж 873 Подписное Филиал ППП "Патент", г.ужгород,ул.Проектная,4 Недефибринированная кровь Дефибринированная кровь удалению ингибитора гормона тимуса из сыворотки, так как недефибриниро". ванная сыворотка не проявляла специфической гормональной активности ни по предлагаемому, ни по известному способам (см. таблицу). 70,0 66,0 51,0 20,0
