Способ диагностики почечной недостаточности

Авторы патента:

ГАБРИЭЛЯН НИНА ИНЗАРОВНА

ДМИТРИЕВ АНДРЕЙ АЛЕКСЕЕВИЧ

МОРОЗОВ ЛЕОНИД ВАСИЛЬЕВИЧ

ЩЕРБАНЕВА ОЛЬГА ИВАНОВНА

A61B10G01N33/48 -

Союз Советсиин

Социалистических

Республик

<и 1 1?1

К . АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6l ) Дополнительное к авт. саид-ву (22) 3asa e o 25. 04. 80 (21) 2928745/28-13 с присоединением заявки М(23) Приоритет

Опубликовано 30. 05. 82. Бюллетень II 20

А 61 S 1О/ОЬ

С О! И 33/48

Государстванный квинтет

СССР

IIO делан нмбретаннй н открытнб, (SS) 3Я КД616т

-.07(088.8) Дата опубликования описания 30.05.82

Н.И. Габриэлян, А.А. Дмитриев, Л.В. Морозов и О.И. Щербанева (72) Авторы изобретения

Научно-исследовательский институт транспла и искусственных органов (7l ) Заявитель (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПОЧЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ

Изобретение относится к медицине, в частности к урологии, и может быть использовано для диагностики уремических состояний.

Известен способ диагностики почечной недостаточности путем определения в крови содержания компонентов средней молекулярной массы, который включает гелевую хроматографию сыворотки крови, спектрофотометрирование фракций элюата, выходящих вместе с маркером (витамином В ), и определение наличия уремической интоксикации по увеличению их содержания LI3.

Недостатком известного способа является использование достаточно растянутого во времени (не менее

2 ч на разгон одного образца) метода гелевой хроматографии.

Цель изобретения - ускорение способа.

Указанная цель достигается тем, что при осуществлении способа диаг2 ностики почечной недостаточности путем определения в крови содержания компонентов средней молекулярной массы с помощью спектрофотометрии плазму крови обрабатывают раствором трихлоруксусной кислоты, образовавшийся осадок отделяют и спектрофотометрируют супернатант.

На фиг. 1 дана гельхроматография плазмы нативной (I) и обработанной трихлоруксусной кислотой (! I ), колонка (!02к2 см), сефадекс Г-25; на фиг. 2то же, колонка (40к1,0 см), сефадекс r-75. Способ осуществляется следующим образом.

Образцы свежей сыворотки или плазмы крови в количестве 1,0 мл

10 депротеинизируют 0,5 мл 10т,-ного раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ):

При постановке микрометода 0,1 мл сыворотки или плазмы предварительно

93117

3 разводят до 1 мл физиологическим раствором.

При заборе крови из пальца аналогичным образом разводят 0,2 мл цельной крови. Дальнейшие манипуляции во всех случаях идут по общей схеме.

После обработки ТХУ образцы центрифугируют со скоростью 3000 об/мин в течение 30 мин. Полученный супернатант, содержащий спектр метаболи- ð тов с молекулярной массой около

1000 дальтон, характер распределения которых соответствует таковому в нативной плазме, детектируют после разведения дистиллятом в отношении

1:9 на спектрофотометре при длине волн 280 или 254 нм.

Параллельные исследования по гельхроматографии сыворотки крови с маркером метаболитов средней молеку-.. лярной массы (витамин В„1) и плазмы, обработанный ТХУ, показывают, что величины абсорбции при 254 и

280 нм образцов такой плазмы соот" ветствуют высоте среднемолекулярного пика (фиг. 1 и 2)..

Содержание компонентов средней молекулярной массы в плазме крови уремических больных достоверно превышает уровень, характерный для здоровых людей. Выявлена зависимость указанных показателей от степени тяжести уремической интоксикации. При удовлетворительном состоянии больных на фоне минимальных проявлений симптомов уремической интоксикации содержание в крови компонентов средней молекулярной массы значительно снижается и, наоборот, наиболее выраженное увеличение их содержания (в 5-7 раз и более от уровня здоровых) отмечают у больных с явлениями нарастания симптомов криза отторжения почечного трансплантата.

Пример 1, В пробирки, содержащие по 0,5 мл 10i-ного раство1 4 ра ТХУ, .последовательно добавляют по 1 мл плазмы крови 20 больных хронической почечной недостаточностью и 20 здоровых доноров. Образцы центрифугируют в течение

30 мин при 3000 об. в мин. В чистые пробирки, содержащие по 4,5 мл дистиллированной воды, добавляют по

0,5 мл супернатанта, полученного от центрифугирования образцов обработанной плазмы. Пробы просматривают на спектрофотометре против дистиллированной воды. Как следует из данных табл. 1, уровень средних молекул в плазме больных хронической почечной недостаточностью в 3 и более раз выше, чем у здоровых доноров.

Пример 2. В пробирки, содержащие по 0,9 мл физиологического раствора, добавляют по 0,1 мл плазмы крови 13 больных хронической почечной недостаточностью.и по 0,1 мл плазмы крови 13 здоровых доноров.

В каждую пробирку добавляют по 0,5 мл

103-ного раствора трихлоруксусной кислоты, центрифугируют и детектируют предварительно разведенный, как указано в примере 1, супернатант на спектрофотометре при длине волны

280 нм. Результаты, представленные в табл. 2, свидетельствуют о том, что в сыворотке больных хронической почечной недостаточностью содержание средних молекул значительно превосходит уровень у здоровых доноров.

В табл. 1 приведены показатели содержания (Е) компонентов средней молекулярной массы по результатам спектрофотометрии (254 нм) плазмы крови больных с хронической почечной недостаточностью и здоровых доноров.

931171

Таблица

Здоровы доноры

Больные с хронической . почечной недостаточностью (ХПН) I

Фамилии

С 0,840

1,20

0,673

0,268

0,298

0.328

l,01

0,256

0,282

1,02

0,790

0,267

1,27

1,24

1,33

0,940

0,920

1,22

0,217

0;247

0,258

0,900

0,880

О 735

0,197

Средняя (М) 0,263

0 950

Ошибка средней (m) О, 060 0,085

П р и м е ч а н и е . Достоверность различий между группами по критерию Стьюден,а Р 0,001.

55 больных с хронической почечной не-достаточностью и здоровых донороа (мийфометод), О 940

0,720

0,452

0,550

1,42

В табл. 2 приведены показатели содержания (Е) компонентов средней молекулярной массы по результатам спектрофотометрии (280 нм) плазмы

О,188

0,280

0,300

0,285

0,265

0,262

0,242

0,272

0,268

931171

Таблиц а 2

Больные с хронической почечной недостаточностью (ХПН}

3доровые доноры

Фамилии Е фамилии Е

0 570

0,680

0,650

0 500

0,545

0,445

0,145

0,230

Г.

0,195

0,150

0,125

0,180

0,455

0,140

0,190

С редняя (М) 0, 529

Ошибка .средней (m) 0,021

0,007

П р и м е ч а н и е . Достоверность различий между группами по критерию

Стьюдента Р<0,001. рения способа, плазму крови обрабатывают раствором трихлоруксусной кислоты, образовавшийся осадок отделяют и спектрофотометрируют супернатант.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР о по заявке " 2838001, 1979 r.

Способ диагностики почечной недостаточности путем определения в крови содержания компонентов средней молекулярной массы с помощью спектрофотометрии, о т Jl и ч а ющ и. и с я тем, что, с целью ускоФормула . изобретения

0,450

0 325

0 505

0,620

0,650

0,490

0,245

0,170

0,245

0,200

0,225

0,160