Способ полимеризации флагеллина

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Севетсиик

Соцмапистичесиик

Республик >935080 (6I ) Дополнительное к авт. свид-ву— (22)Заявлено 17.10.80 (21) 3008188/28-13 (sl)M. Кл.

А 61 В 10/00 с присоединением заявки М(23) Приоритет

Гееударатеенный камнтет

СССР

IIo делан нзабретеннй н вткрытнй (53) УДК 5» ° 13 (088. 8) Опубликовано 15,06.82. Бюллетень %22

Дата опубликования описания 15 ° 06 ° 82

В.В. Новиков, A.Ë. Метлина и Б.Ф. Погла ов

Ц

Ордена Ленина институт биохимии им. А., Байй„ :;;:- :.;,...„, " (72) Авторы изобретения (jI) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛИМЕРИЗАЦИИ ФЛАГЕЛЛИНА

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для получения чистой фракции бактериальных жгутиков.

Известен способ полимеризации флагеллина путем нейтрализации до рН 6-7 закисленного раствора флагеллина 13.

Однако полимеризация известным способом требует много времени 10 (до 24 ч), скорость полимеризации значительно зависит от концентрации белка и при концентрации флагеллина менее 2 мг/мл идет очень медленно или не идет вообще, кроме того, 15 полимеризация проводится при комнатной температуре, снижение температуры резко замедляет скорость полимеризации.

Целью изобретения является ускорение способа.

Цель достигается тем, что согласно способу полимеризации флагеллинапутем нейтрализации до рН 6-7 закис

2 ленного раствора флагеллина в закисленный до рН 20 раствор вводят полиэтиленгликоль с мол.мас. 20006000 Да.

Пример 1. Жгутики Bacillus

brevis закисляют в деионизованной воде при комнатной температуре до рН 20 с помощью 0,1й НС1. Нерастворившийся материал удаляют. центрифугированием при 105 тыс.Яв течение

60 мин. В раствор флагеллина добавляют полиэтиленгликоль с мол.мас.

2000 Да до концентрации 20т, (вес) (обьем) и после его растворения доводят значение рН раствора до 7,0 с помощью 0,1 N NaOH. Конечная концентрация флагеллина 3,8 мг/мл.

Сразу же отбирают пробу для построе" ния первой точки на кинетической кривой полимеризации. Полимеризация заканчивается уже ко времени отбора первой пробы. Степень полимеризации количество полимеризованного белка

935080 4 полимеризации (полимеризация заканчивается в течение первых 3-5 мин) . формула изобретения

Составитель С. Малютина

Техред Л. Пекарь Корректор 8. Синицкая

Редактор М. Дылын

Заказ 4089/8

Тираж 714 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, 8-35, Раушская наб., д, 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 по отношению к исходному) соответствует литературным данным. .Пример 2. Те же условия проведения эксперимента, но температура снижена до +4 С.

Пример 3 ° Те же условия про. ведения эксперимента, что и в первом случае, но концентрация белка снижена до 0,2 мг/мл.

Il р и м е р 4. Условия проведения эксперимента аналогичны приме1 ру 2, но используют флагеллин Baci ilus subtiI is.

При полимеризации в присутствии полйэтиленгликоля белок гомогенен, в то время как при полимеризации без полиэтиленгликоля флагеллин расцепляется и дает минорные пептиды.

Использование полиэтиленгликоля позволяет резко увеличить скорость

Способ полимеризации флагеллина путем нейтрализации до рН 6-7 закисленного раствора флагеллина, о т10 л и ч а ю шийся тем, что, с целью ускорения способа, в закисленный до рН 2 раствор вводят полиэтиленгликоль с мол. мас. 2000-6000 Да.

15 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Метлина А. Л., Поглазов Б. Ф.

Конформационные изменения флагеллина при самосборке. ДАН АН СССР, зо т. 187, V 2, 1969, с. 459-462.