Способ обнаружения нефтяных сульфонов и сульфоксидов в объектах ветеринарного надзора

 

(72) Авторы изобретения

Г. А. Кашафутдинов и В. В. Титов

P

Р (Казанский ордена Ленина государственный ветеринарный

1 институт им. Н. Э. Баумана (73) Заявигель (54) СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ НЕФТЯНЫХ СУЛЬФОНОВ

И СУЛЬФОКСИДОВ В ОБЪЕКТАХ ВЕТЕРИНАРНОГО

НАДЗОРА

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к способам обнаружения остаточных количеств ветеринарных препаратов в объектах ветеринарного надзора - молоке, мясе, воде.

Известен способ обнаружения нефтяных 5 сульфонов B биологическом материале, который основан на экстрагировании сульфонов из объектов хлороформом и флуорометрическом анализе экстрактов (1).

Недостатками данного способа являют- О ся невозможность использования его в условиях колхозов и совхозов, так как прибор (флуорометр), необходимый для анализов, труднодоступен, низкая специфичность, т.е. под воздействием ультра15 фиолетовых лучей голубым цветом флуоресцируют многие химические соединения, имеющие в структуре кратные связи, трудность воспроизведения анализов, низкая чувствительность - менее 1 мг/кг не определяется.

Цель изобретения — повышение специфичности и чувствительности способа.

Поставленная цель достигается, тем, " что экстрагирование пробы анализируемого вещества осуществляют Н-гексаном и ледяной уксусной кислотой, концентрирование экстрактов проводят вначале до объема 1,0-1,5 мл на водяной бане при

45-50оС, затем до объема. 0,010,02 мл при 18-22ОС, а исследование концентрированных экстрактов проводят путем их хроматографирования и проявления в парах азотной кислоты или иода с последующей обработкой водой.

Кроме того, поставленная цель достигается тем, что после концентрирования экстракты из объектов ветеринарного надзора животного происхождения дополнительно очищают путем добавления 910 капель ацетонитрила.

Кроме того, хроматографирование осуществляют на пластинке Силуфол вначале в бензоле, а затем в смеси бен« эола с ацетоном в соотношении 1: 1.

Кроме того, после хроматографирования в бензоле проводят проявление нара6 4

Для повторного хроматографирования ластинки во вторую овальную кювету аналогичного размера налили 1,5 мл смеси бензола с ацетоном в соотношении

1:1, куда вертикально поместили предыдущую пластинку. После подъема жидкости до финишной линии пластинку вынули из кюветы и сушили на воздухе в течение

5 мин.

Во вторую чашку Петри внесли 0,5 r кристаллического йода и 2 кусочка стеклянных палочек, на которые фольгой вниз положили пластинку. Закрыв крышку чашки, в течение 10 мин наблюдали за появлением на пластинке окрашенных пятен.

За указанный срок на пластинке появи» лись два нечетких пятна на линии стандарта и экстракта из воды. Пластинку вынули из чашки и обработали водой.

Пятна стали четкими, приобрели яркий желтый цвет, Я f которых равнялся

0,83 и 0,85. При этом фон на пластинке был фиолетово-синим.

Пример 2. Обнаружение нефтяных сульфонов и сульфоксидов в молоке. В коническую колбу налили 25 мл молока, содержащего 50 мкг нефгяных сульфонов, добавили 25 мл ледяной уксусной кислоты и смесь тщательно перемешали. Через 5 мин в смесь добавили 50 мл нгексана и содержимое колбы в течение

1 мин тщательно перемешали. В ходе экстрагирования, т.е. в течение 60 мин, смесь перемешали 4 раза через каждые

12-15 мин. После расслоения фаз гексановый слой отделили и перенесли в цилиндр, куда предварительно было внесено 2 r сульфата натрия безводного.

Зкстракт из молока перелили в фарфоровый тигель, из которого вышеуказанным путем н -гексан испаряли до получения маслянистого остатка. Глазной пипеткой в маслянистый остаток добавили 10 капель ацетонитрила, смесь перемешали стеклянной палочкой и тигель поместили в прохладное место. Через 10 минут ацетонитрильный экстракт осторожно перелили в другой чистый тигель меньшего размера. При этом жирная часть экстракта оставлялась в первом тигле. Со второго тигля ацетонитрил испарили вышеуказанным путем до получения 0,01—

0,02 мл экстракта. Последний полностью нанесли на стартовую линию пластинки.

Параллельно нанесли стандартный раствор нефтяных сульфонов в количестве

2 мкл (2 мкг по ДВ).

Дальнейший анализ, т.е. хроматографирование пластинки и проявление нефтя30

3 97021 ми 65-68%-ной азотной кислоты, а после хроматографирования в смеси бензола п с ацетоном - парами иода с последующей обработкой водой.

Пример 1. Обнаружение нефтяных сульфонов и сульфоксидов в воде. В коническую колбу налили 100 мл воды, содержащей 100 мкг нефтяных сульфонов и добавили 10 мл н -гексана. Колбу закрыли пробкой и в течение одной минуты ее 10 энергично встряхивали. В течение 15 минут встряхивание колбы повторили 3 раза. После расслоения фаз верхний (гексановый) слой отделили и перенесли в цилиндр, куда предварительно было внесено 2 r сульфата натрия безводного.

Содержимое цилиндра перемешали.

В исследуемую пробу воды повторно . налили 10 мл н -гексана и проделали те же операции. Порции экстрактов из 20 воды объединили и весь объем перелили в фарфоровый тигель. На водяной бане при 40-50 С из тигля н -гексан испаряо ли до получения 1,0-1,5 мл концентрата экстракта. В дальнейшем из тигля н - 25 гексан испаряли при 18- 22ОС и объем экстракта довели до 0,01-0,02 мл.

Весь объем экстракта из воды с помо шью микрошприца МП-10 нанесли на стартовую линию пластинки "Силуфол" размером 32 "75 мм. Левее от точки нанесения экстракта, т.е. на расстоянии

15 мм, нанесли стандартный раствор нефтяных сульфонов в количестве 20мкл (20 мкг по ДВ). При нанесении экстракта и стандарта диаметр пятен не превышал

3-4 мм.

Для хроматографирования пластинок в - "вальную стеклянную кювету размером

40-80 мм налили 1,5 мл бензола, куда вертикально поместили пластинку, и закрыли крышку кюветы. После подъема бензола до финишной линии пластинку вынули из кюветы и сушили на воздухе в течение 3 мин.

Для проявления пластинки в чашку

Петри налили 10 мл концентрированной (61-68%) азотной кислоты. На дно чашки поместили 3 кусочка стеклянной палочки, на которые фольгой вниз положили плас50 тинку, и закрыли крьппку чашки. В течение 10; мин наблюдали за появлением на пластинке окрашенных пятен. За указанный срок наблюдения на пластинке появились два круглых розового цвета пятна, Р которых равнялся 0,92 и 0,9З.

При этом одно пятно находилось на линии стандарта, а второй - на линии экстракта из воды.

5 9702 ных сульфонов, провели по аналогичному, способу, описанному в примере 1.

После воздействия парами азотной кислоты на пластинке проявились два пятна розового цвета. Одно пятно находилось на линии стандарта, другое - на линии экстракта из молока, RF которых равкялся 0,92 и 0,90.

После хроматографирования в смеси бензола с ацетоном и обработки пластинки парами йода и водой окрашенных в желтый цвет пятен не получили ни на линии стандарта, а также ни на линии экстракта из молока. Отрицательный результат объясняется недостаточным для детектирования йодом количества нефтяных сульфонов.

Пример 3. Обнаружение нефтяных сульфонов и сульфоксидов в мясе.

Брали 25 г мясного фарша, содержа 20 щего 50 мкг нефтяных сульфоксидов, и внесли в фарфоровую ступку, добавили

2 мл гексана и смесь растирали до полу. чения однородной массы. Последнюю поместили в.коническую колбу и залили 25

25 мл гексана. Экстракцию провели в течение 30 мин. В ходе экстракции массу в колбе 3 раза перемецали. Через

30 мйн экстракт осторожно сливали в цилиндр, содержащий 2 г сернокислого натрия безводного. В колбу повторйо налили 25 мл гексана и провели повторную экстракцию. Порции экстрактов обьединили, поместили в фарфоровый тигель. Вышеуказанным путем из тигля гексан.испарили до получения маслянистого остат3S ка. Дальнейший анализ проведи аналогично анализу экстракта иэ молока.

После воздействия парами азотной кислоты на пластинке проявились llaa

4О круглых пятна розового цвета: одно на линии стандарта, другое — на линии нанесения экстракта иэ мяса, R f пятен совпадали и равнялись 0,92.

Предлагаемый способ обнаружения нефтяных сульфонов и сульфоксидов в

45 объектах ветеринарного надзора позволяет проводить анализы без использования флуорометра в условиях колхозов и совхозов. Кроме того, химические реагенты (проявители) специфичны в отношении основных компонентов нефтяных, сульфонов и сульфоксидов. По чувствительности. предлагаемый способ обнаружения нефтя ных сульфонов и сульфоксидов примерно в 10 раз чувствительнее, чем существую-55

ВНИИПИ Заказ 8377/52

16 6 щий флуорометрический способ. Например, детектируемое азотной кислотой минимальное количество нефтяных сульфонов и сульфоксидов (по обнаружению нефтяных тиофеновых соединений) составляет 0,30,5 мкг. Способ позволяет обнаруживать нефтяные сульфоны и сульфоксиды s анапы-н-„„.емых пробах в следующих количестгах: в воде - 0,05-0,10 мг/л; в молоке и мясе - 1,0-2,0 мг-кг (л)., формула изобретения

1. Способ обнаружения нефтяных сульфонов и сульфоксидов в объектах ветеринарного надзора, включающий отбор пробы анализируемого вещества, экстрагирование пробы органическими растворителями, концентрирование экстрактов и их исследование, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения специфичности и чувствительности способа, экстрагирование пробы анализируемого вещества осуществляют н -гексаном и ледяной уксусной кислотой, концентрирование экстрактов проводят sHaчале до обьема 1,0-1,5 мл на водяной бане при 45-50ОС, затем до объема

0,01-0,0 мл при 18-22 С, а исследование концентрирс ванных экстрактов проводят путем их хроматографирования и проявления в парах азотной кислоты или иода с последующей обработкой водой.

2. Способ по п. 1, отличаюш и и с я тем, что, после концентрирова ния экстракты из объектов ветеринарного надзора животного происхождения дополнительно очищают путем добавления 910 капель ацетонитрила.

3. Способ по и. 1, о т л и ч а юш и и с я тем, что хроматографирование осуществляют на пластинке Силуфол вначале в бенэоле, а затем s смеси бензола с ацетоном в соотношении 1:1.

4. Способ по п. 1, о т л и ч а юшийся тем, что после хроматографирования в бензоле проводят проявление парами 65-68%-ной азотной кислоты, а после хроматографирования в смеси беьзола с ацетоном - парами иода с последующей обработкой водой. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Журнал «Ветеринария», 1977, ¹ 7, с. 94-95.

Тираж 887 Подписное фипиап ППП "Патент, г. Ужгород, уп. Проектная, 4