Борис Василев Алексиев, Стойчо Борисов Стоев,. Александър Василев Спасов, Лиляна Стойлова Манева, Еманунл Александр Е . и Евгени Викторов Головински (НРБ}

Иностранная фирма

"Институт по биохимии при Б (НРБ) (72) Авторы изобретения (71) Заявитель (54) N,N вЂ” ДИЗАМЕЩЕННЫЕ ГИДРАЗИДЫ ЦИСТИНА, ОБЛАДАЮЩИЕ

ПРО7ИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ

Изобретение относится к новым производным аминокислот, обладающих противоопухолевой активностью, а именно к N,N-дизамещенным гидразидам цистина общей формулы (Т)

СН -Sâ€”

CHNHX

CONHN(CHg СНг Cl) г г где X = Н HBr, ОСОСНгС Н Известно, что производные аминокислот, содержащие N;N-ди- (2-хлорэтил)-группу обладают !О цитостатической активностью и могут быть использованы в качестве противоопухолевых препаратов (1), в частности описан способ получения алкиловых эфиров N,N-дн-(2-хлорэтил)-карбамоил-а-аминокислот, основанный на вза- IS имодействии ди- (2-хлорэтил)-амина с алкиловым эфиром соответствующей й-карбонил-а-аминокислоты (2).

Целью изобретения является расширение ас- З1 сортимента средств, воздействующих на лавой организм.

Поставленная цель достигается новыми N,Nдизамещенными гидразидами цистина вьтшеука2 занной формулы (1), обладающими противоопу холевой активностью.

Указанные соединения получают взаимодействием хлорангидрида N- бенэилоксикарбонил-(=цистина с асимметричным ди-(P-хлорэтил)-гидразином в среде этилацетата с последутощим прн необходимости снятием защитной группы путем обработки полученного N-бензнлоксикарботптл- L-цистин-бис (N,N+õëoðýòèë)-гидразида раствором HBr в ледяной уксусной кислоте.

Пример 1. 1.-ga-(N-альфа-бензилоксикарбонил) -цистнно-бис- (f4, N-ди- (P-хлорзтил)-птдразид) .

Раствор 5 г N-бензилоксикарбонилцистилхлорида в 50 мл безводного этилацетата приливают к асимметрическому ди-(ф-хлорэтил)птдраэину, полученному из 8 г гидрохлорида гидразина. Реакционную смесь выдерлавают в течение 12 ч при температуре окрумающей среды, в результате чего образуется кристаллический продукт, который отфильтровывают и перекристаллизовывают из смеси этилового спирта и воды. Выход продукта составляет

983125

3 . 5,7 (72,4%). Температура плавления составляет 191 вЂ” 2 С.

Анализ: СзеН»еС!» N,,Î»S (786,6).

Расчитано,%: и 10,68; $8,15; Cl 18,03.

Иайдеио,%: и 10,76; S 7,78; С! 18,04.

Пример 2. L-цистин-бис. |N,N-ди- (P-xnopmn)-гидразид, гидробромид) (ЦБХЛ вЂ” 51)

5,0 г вещества (3) обрабатывают при температуре окружающей среды.35 мл ЗО ного раствора бромистого водорода в ледяной:уксус. (16 ной кислоте. Сначала продукт растворяют при интенсивном выделении двуокиси углерода, а затем происходит образование осадка. После полного осаждения посредством прибавления безводного эфира твердый р дукт от- !5 фильтровывают и тщательно промывают сухим эфиром. Выход продукта составляет 3,9 г (91,2%). Температура плавления составляет 167 вЂ”

8 С. Продукт представляет собой очень гигроскопичное вещество. 20

Анализ: С, »Нзе Вгз С!» Й»Оз8з (680,2)

Расчитано, в N 12,36; S 9,43; С! + Br 44,35

Найдено,%: N 1248; S 9,22; С! + Br 4435.

- С целью изучения противоопухолевой активности бьша проведена серия опытов с 72 кры-2s сами Уистр мужского пола весом 150 вЂ” 210 г и с 48 мышами мужского пола весом 16вЂ”

22 r.

Крысы были разделены на 9 групп по 8 крыс в группе. Трем группам крыс была ЗО трайсплантирована подкожно с помощью фрагментов карциносаркома 256 Уокера (КСвЂ”

Уокер), другим трем гру!шам вЂ” лимфосарко. ма Плиса ЛС вЂ” Плис, а последиим трем группам вЂ” саркома Йошиды (С вЂ” Йошида). Жи35 ватные обрабатывались интраперитонеально, один раз в день соединением ЦБХЛ вЂ” 51. Обработка началась с пятого дня после трансплантации, когда опухоли достигли величины чечевичного зерна. Рабочие растворы исследуемых соединений концентрацией 0,5% в физиологическом растворе приготавливались ежедневно.

Контрольные группы бьши обработаны теми

4 же объемами физиологического раствора. При

КС вЂ” Уокер и ЛС-Плис обработка соединением проводилась 8 дней ежедневно, а при

С вЂ” Йошида, также ежедйевно 10 дней. Соединение ЦБХЛ вЂ” 51 вводилось в дозах 10 мг/кгвЂ” для первых двух опухолей и 5 мг/кг для третьей опухоли. Животные были убиты через 24 ч после последнего введения, Мыши бьши разделены на 6 групп по 8 в группе. Трем группам был трансплантирован подкожно с. помощью фрага!ентов саркома180 Крокера, а другим трем группам вЂ” интраперитонеально лимфома НК/Ли /НК вЂ” Ли/.

При С вЂ” 180 (солидная форма) введение

ЦБХЛ вЂ” 51 было начато с пятого дня после

1трансплантации в дозе 10 мг/кг, интраперитонеально, ежедневно в течение 10 дней. Животные были убиты через 24 ч после последнего введения. При НК/Ли (асцитная форма) обработка началась через 24 ч после трансплантации, в той же самой дозе как и п1!и

С вЂ” 180, но вводилось подкожно, ежедневно, в продолжение 10 дшней. Рабочие растворы

ЦБХЛ вЂ” 51, концентрацией 0,1% в физиологическом растворе; приготовлялись каждый раз.

Были отмечены следующие показатели: средний вес опухолей, средние диаметры опухолей (5-oro и 9-ого дня после трансплантащщ и в день умерщвления), средний вес животных (до начала обработки и при умерщвлении, оси опухолей), средняя продолжительность жизни (только при НК/Ли). Было определено подавление опухольного роста (ПТР) по формуле

Tê Т0

ПТР вЂ” 100, Тк где Т, и Т„ вЂ” средние весы опухолей, соответственно, в контрольной и в опытной группе.

В таблице представлено влияние соединения

ЦБХЛ вЂ” 51 на.трансплантационные опухоли.

00 00 еч ь

OO 00 о ь

О0

1- Й ь

00 »

° ° Ф Ф

- V

01 О сл

I м

"Ъ

I Х

5 ь Д

Ч Ф х g ь о о а М

° «Ф

L2 о фф

1 О О ", р) Ч

00 а О, сч о

° Яи

34 о

I о Ч (O0 еч 1О .

I ч +

t»

ФЧ р }

983125

-СЧ ц О (4

° ° 3„

00 м .1

I ф»

° \

"Х

I фФ1

° 4

1 о

Ф, Ч. оо фУ) Ъ »

9 4 и

ОО

° ч (1

+ +

С 4 (»

9 983125

Соединение ЦБХЛ вЂ” 51 проявило выраженньй; противоопухолевый эффект при С вЂ” Иошида (100 o), с полнои регрессией опухолей при

ЛС вЂ” ПЛис (80,6%) и при КС вЂ” Уокер (75,6%).

СНт вЂ” Sâ€”

CHNHX

1. G.Khedeuri and oth, N,N-bis(2-chloroethyl)вЂ” Carbamoyl derivations of а-aminoacids, А Med..

Chem., 7, 653, 1964..

2. F. Mann, А Chem. Soc., Hobmanrl s

Ethylene Bases, 1934, 461..

Составитель Л. Иоффе

Техред Л.Пекарь

Редактор Г. Волкова

Корректор М. Шароши

Тираж 445

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 9833/29 Подписное

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

CONHN (СН, СН, Cl)

При С вЂ” 180 ПТР равняется 26,1%, а при НК/Лц не наблюдается удлинение жизни опытных жи- где Х = ОСОСНэС Н,, Н HBr, вотных, по сравнению с контрольными. Изме- обладающие противоопухолевой активностью. кения в диаметрах опухолей шлн параллельно с уменьшением весов опухолей под влиянием Источники информации, ЦБХЛ вЂ” 51. Уменьшение телесного веса в tó принятые во внимание при экспертизе опытных группах равно соответственно: 13;8%, . 13,7% и 11,5%. Сравнительно высокая смерт- ность наблюдалась при КС вЂ” Уокер и при

ЛС вЂ” Плис (25%) .

4 ормула изобретения

N,N-дизамещенные гидразицы цистина общей формулы