Способ подготовки костных образцов к морфологической диагностике

 

Изобретение относится к медицине, а именно - к морфологии, может быть использовано для морфологической диагностики патологии костной ткани. Сущность способа: после фиксации костных образцов в растворе формалина осуществляют их декальцинацию в течение 7-8 суток в 5%-ном растворе азотной кислоты на основе 5%-ого раствора формалина, после чего костные образцы в течение 2 ч промывают проточной водопроводной водой и на 12 ч погружают в 5%-ый раствор серно-кислого лития, затем в течение 20-30 мин снова промывают проточной водой и подвергают дегидратации в спиртах возрастающих концентраций. Предлагаемый способ сокращает время обработки костных образцов, полученные блоки отличаются большей пластичностью, что позволяет получить качественные гистологические срезы, которые характеризуются сохранением всех структур костной ткани.

Изобретение относится к медицине, а именно - к морфологии, может быть использовано для морфологической диагностики патологии костной ткани.

Известны две основные группы методов декальцинации - бескислотные и кислотные [4, 5, 7, 8, 9]. Кислотный метод декальцинации [2, 3] заключается в подготовке материала к декальцинации и декальцинации. Подготовка к декальцинации заключается 1) в фиксации костных образцов в 15-20%-ом растворе формалина не больше 48 ч; 2) в промывке костных образцов проточной водопроводной водой в течение 24 ч; 3) в их дегидратациии в растворах спиртов 50%, 70%, 96%, 70%, 50%, в течение суток в растворе спирта каждой концентрации.

Декальцинация:

1) соблюдая правила декальцинации, костные образцы помещают в 5-7,5% раствор азотной кислоты на основе дистиллированной воды на 10-12 суток; 2) затем костные образцы помещают в 5%-ый раствор серно-кислого натрия или лития на 24 ч для устранения набухания; 3) костные образцы промывают в проточной водопроводной воде в течение 1-2 суток; 4) проводят заливку в целлоидин или парафин или резку на замораживающем микротоме.

Недостатками данного метода декальцинации являются: продолжительность сроков декальцинации (10-12 суток). продолжительность сроков промывания костных образцов в проточной воде (2-3 суток), что способствуют насыщению их жидкостью, снижает качество окраски срезов и четкость проявления структур костной ткани.

Задачей предполагаемого изобретения является сокращение сроков декальцинации, повышение пластичности костных образцов и сохранение структуры костной ткани.

Поставленную задачу осуществляют за счет того, что декальцинацию костных образцов проводят в течение 7-8 суток в 5%-ом растворе азотной кислоты на основе 5%-го раствора формалина, после чего их в течение 2 ч промывают проточной водопроводной водой и на 12 ч погружают в 5%-ый раствор серно-кислого лития, затем в течение 20-30 мин снова промывают проточной водой и подвергают дегидратации в спиртах возрастающих концентраций.

Способ осуществляют следующим образом.

Костные образцы размером 1,0×1,0 см (трупный материал) фиксируют в 7-8%-ом растворе формалина в течение 2-х суток. Затем их промывают проточной водопроводной водой в течение 20-30 мин и погружают в 5%-ый раствор азотной кислоты на основе 5%-ого раствора формалина [1, 6].

Раствор кислоты на основе формалина меняют ежедневно. Декальцинация продолжается 7-8 дней, для определения ее завершения используют прокалывание образцов препаровальной иглой, пробный надрез и их сжимание. Затем костные образцы промывают проточной водопроводной водой в течение 2 ч и погружают на 12 ч в 5%-ый раствор серно-кислого лития для устранения их набухания.

Далее после промывания проточной водой в течение 20-30 мин, костные образцы подвергают дегидратации в спиртах возрастающих концентраций (50%, 70%, 90%, 96%, абсолютный спирт, спирт - эфирная смесь). В каждом растворе образцы выдерживают в течение суток. Затем следует их заливка в целлоидин.

Достичь полной декальцинации позволяет раствор азотной кислоты, приготовленный на основе 5%-ого раствора формалина, который обладает эффектом деминерализации. Повышению пластичности костных образцов способствуют сокращение сроков нахождения их в растворе серно-кислого лития, их дегидратация только перед заливкой и заливка в целлоидин, который по своим свойствам (пластичности) близок к декальцинированным костным образцам. Оценить полноту декальцинации и пластичность костных образцов можно только при приготовлении срезов. При этом отсутствует хруст и получают полные, ровные срезы. Сохранность структуры костной ткани можно оценить только после окраски срезов (по Шморлю) и гистоморфометрии. На изучаемых препаратах определяются слои кости, остеонные структуры, клетки.

Предлагаемый способ позволяет сократить продолжительность декальцинации на 5-7 суток, достигнуть полной декальцинации, увеличить пластичность костных образцов, сохранить структуру костной ткани.

Список литературы

1. Валенсон Б.А. Метод ускоренной декальцинации в кислотно-формалиносолевом растворе. Архив патол. 1950, т.XII, N.5, c.93. 2. Волкова О.В., Елецкий Ю.К. Основы гистологии с гистологической техникой. - М.: Медицина, 1971, с.271. 3. Елисеев В.Г. Основы гистологической техники. - М.: Медицина, 1967, с.209. 4. Клевезаль Г.А. Регистрирующие структуры млекопитающих в зоологических исследованиях. - М.: Наука, 1988, с.285. 5. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. - М.: Мир, 1969, с.645. 6. Меркулов Г.А. Курс гистологической техники. - Л.: Медицина, 1969, с.424. 7. Миньков С.А. К вопросу декальцинации зубов и фрагментов челюстей. Бюлл. Вост.-Сибирск. научн. центра СО РАМН. - Иркутск, 1993, вып.3-4, с.150-154. 8. Никоноров С.Г., Козлова Т.А. Декальцинация костной ткани в возрастающих концентрациях соли трилона Б. Архив анат., гистол. и эмбриол. 1986, т.XCL, N.1, с.78-80. 9. Саркисов Д.С., Перов Ю.Л. Микроскопическая техника. Руководство для врачей и лаборантов. - М.: Медицина.

Формула изобретения

Способ подготовки костных образцов к морфологической диагностике, включающий фиксацию костных образцов в растворе формалина, промывку их водой, декальцинацию 5%-ным раствором азотной кислоты, выдерживание в 5%-ном растворе серно-кислого натрия с последующей промывкой водой, отличающийся тем, что декальцинацию проводят в течение 7-8 суток в 5%-ном растворе азотной кислоты на основе 5%-ного раствора формалина, после чего в течение 2 ч образцы промывают проточной водопроводной водой и на 12 ч погружают в 5%-ный раствор серно-кислого лития, затем в течение 20-30 мин их снова промывают проточной водой и подвергают дегидратации в спиртах возрастающих концентраций.