Способ получения коллагеназы

 

Класс 22i, 3 — lO,г л

ПАТЕНТ HA ИЗО

ОПИСАНИЕ способа 1олучения коллагеназы.

К патенту В. С. Садикова, заявленному 23 апреля 1926 года (заяв. свид. Ы 8018).

0 выдаче патента опубликовано 31 августа 1928 года. Действие патента распространяется на 15 лет от 31 августа 1928 года.

Еоллаген, входящий в состав клейдающих материалов (костей, сухожилиИ, соединит. тканей), в отличие от большинства протеинов, является индиферентным по отношению к трипсину в щелочной среде. Этим свойством пользуются для очистки клейдающего материала от находящихся в нем белковых примесей. Исследования автора показали, что встречаются продажные пре-. параты трипсина, которые способны разрушать коллаген в щелочной среде подобно тому, как это происходит с протеинами.

В зависимости от способа приготовления трипспна из панкреатической железы получаются препараты фермента, либо индиферентные к коллагену, либо

его атакующие. Посредством применения адсорбентов (угля, каолина, гидрогелей, фосфатов и т. п.) из препаратов трипсина или панкреатина, растворяющих не только фибрнн, но и коллаген, удается выделить новыИ фермент, растворяюп(иИ коллаген и не действующий на фибрин (коллагеназа). Посредством применения вышеуказанных адсорбентов удается освободить панкреатический трипсин от примесей к нему фермента, растворяющего коллаген, коллагеназы. Разделение трипсина от коллагеназы достигается также при непосредственной обработке панкреатической железы растворами соды и глицерином.

Панкреатическая железа подвергается последовательной фракционированной экстракции раствором соды в О,Ъ вЂ” 0,3% при различной продолжительности дигерирования при температуре в 18 и в 30 — 35 . Получатотся вытяжки, содержащие преимущественно трипсин и лишь примесь коллагеназы. Прп обработке панкреатическоИ железы посредством дпгерированпя с глицерином при 35" получаются вытяжки, содержащие значительное колпчес, во коллагеназы. Освобождение коллагеназы происходит при автолизе клеток в течение их дигерирования с глицерином. Глицериновые вытяжки по осаждены спиртом дают фермент, не трогающий вовсе фибрина и энергично растворяющиИ коллаген и кожу в щелочной среде.

Этот фермент (коллагеназа) является менее чувствительным к алкоголю сравнительно с трипсином и отличается свойством в слабо кислотноИ среде (0,2 — 0.3 %) глутинировать коллаген

1. Способ получения коллагеназы, ! фермента, растворяющего клеевое вещество в щелочной среде и свертывающего (глутинирующего) его в кислой, отличающийся тем, что панкреатическую железу, селезенку, печень илп другие железы, илн же оактериальные культуры, убитые антисептиками или нагреванием, экстрагируют слабыми растворамп соды с целью очистки, а затем глицерином с целью извлечения коллагеназы, осаждаемой затем из глицеринового раствора, спиртом.

2. Прием выполнен 1я означенного в п. 1 способа, отличающийся тем, что глнцерпновые вытяжки обрабатывают углем, каолнном, гидрогелямп, фосфатами плп т. п. адсорбентамп, вымывают из адсорбента коллагепазу подходящими растворителями и осаждают из полученных растворов спиртом.

3. Применение означенного в п. п. 1 и 2 способа для очистки препаратов трппсина от коллагеназы. и. л.

Типо-ннтографил «Красный Бечагнин», Ленинград, Международный, 7ý. при биологической температуре (30 —..

37. ), превращая клейдающие вещества в клей. Даже при продолжительном воздействии коллагеназы на глутин в кислой среде, глутин не испытывает углуоления гидратации и не превращается в неклеющий и в незастудневающий продукт, .Коллагеназа встре- чается и в других органах:помимо панкреатической железы (печень, селезенка и т. д.). СоДовые и глицериновые вытяжки селезенки содержат коллагеназу, лишенную примесей трипсина (фибриназы). Боллагеназа также обнаружена в препаратах, применяемых для мягчения кожи, например, оропон, эродин, эско и т. п. 11з подобных препаратов коллагеназа получается по методу фракционированных экстракций растворами соды и глицерином. Этот фермент находится и в убитых культурах многих бактерий, как-то: прот е уса, сарцины, ппоцианеус и т. g., а также в токсинах дифтерийных, дизентерийных н т. д.

1Лз разводок чистых культур бактерий также может быть получена коллагеназа, при чем эти культуры убиваются антисептическ ми средствами нли нагреванием до 60 и фермент фиксируется адсорбентом (уголь, каолин). IlpNменяется коллагеназа в этом случае лиоо совместно с адсороентом, либо после элуирования его соответствующим растворителем, после чего фермент осаждается алкоголем II высушиваетсн в вакууме., Источником получения коллагеназы мо.; гут быть бактерии, находящиеся в фекалиях птиц, собак и других плотоядных животных. Фекалии подвергаются извлечению и дигерированию с раствором соды или с глицерином. Полученные вытяжки обрабатываются адсорбентами .и адсорбаты затем элуируются и осаждаются алкоголем.

Предмет патента.