Способ получения поливалентного анатоксина для иммунизации против анаэробных инфекций

 

Класс 30п, 6 № 103907

СССР

1 I ,(У

О П И С А Н И Е И 3 О Б Р Е-Т-Е- Н И Я

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Г. В. Выгодчиков, С. А. Зелевинская, 3. М. Волкова, Н. С. Кашинцева, Е. А. Гильгут, Е. В. Власова, И. В. Буланова, В. А. Благовещенский, Л. Я. Мармалевская, А. П. Кузьмина и И. Н. Виноградова

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИВАЛЕНТНОГО.

АНАТОКСИНА ДЛЯ ИММУНИЗАЦИИ ПРОТИВ

АНАЭРОБНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Заявлено 2 июня 1955 г. за X 2099/452933 в Министерство здравоохранении СССР

Известны способы изготовления поливалентных анатоксинов для иммунизации людей против возбудителей анаэробных раневых инфекций.

Осооенность предлагаемого способа заклю !ается в том, что культуры соответствующих патогенных анаэробов раздельно выращивают на казеиново-растительной питательной среде, полученной в результате гидролиза с !кв!о!цью растительной (грибной) проте азы, после чего т оке и и ф ил ьтруют и детоксицируют, как обычно. а затем освобождают от балластного белка II концентрируют п,)BTopHhl..l высаживанием в кислой среде. Ооразовавшийся остаток. содержащий анатоксин, отделяют цснтрифугированием и растворяют в фосфатном буфере, адсорбируют на гидроокиси алюминия и далее анатоксин охлаждают, элюируют. стерилизуют, проверяют на оезвредность и иммуногенность, как обычно.

Полученные таким путем анатоксины применяются для приготовления поливалентного (три, тетра и т д ) анатоксина

Предлагаемый способ позволяет получать комплексный препарат-трианатоксин для одновременной иммунитации против столбняка и двух возбудителей газовой гангрены — перфрингенс и эдематиенс.

Для осуществления способа производится раздельное выращивание патогенных анаэробов на казеиновой растительной среде, получаемой в результате гидролиза с помощью рястительно "l (грибной) протеазы.

КаждаЯ кУльтУРа BbIPBIIIHBBCTcH при температуре 35 в течение нескольких часов нли дней, после чего фильтруется через стерилизую !ие пластинки фильтра Зейтца.

Токсин проверяется на стерильное!ь высевом в яэробных и а»яэробных усloBHHx, затем к нему дооавляется 0,3 — 0,4!)!о формалина (пз расчета 40",о-ного формяльдсгида), после чего он обезврежи",àåòñÿ в термостате при температуре 38 в течен.не несколь! их дней.

ВЫНУтЫИ II3 ТЕРМОС! ЯТЯ 0tttrtT0K № 103907 син проверяется на стерильность, безвредность и "Ьн>гигенность. К нативному"анатоксину добавляется сухая поваренная соль; после полного растворения которой анатоксин подкисляется 1 нормальной соляной кислотой до определенной рН.

Выпавший осадок определяется центрифуги ров ани ем, затем растворяется в физиологическом растворе, после чего концентрат подщелачивается 5", -ным раствором щелочи до рН б,8 — 7,2.

Далее концентрат разводится фосфатным буфсром до получения смеси с рН равной 5,9 — б,0. Смесь адсорбируется на гидроокиси алюминия и центрифугируется. Полученный осадок промывается фосфатпым буфером, центрифугируется, окрашенный промывной буфер оторасывается. а осадок обрабатывается для элюции анатоксина.

Д, гя элюцип а па гоксипа осадок взмучивается в фосфатном буферс и в течение 2 часов выдерживается при комнатной температуре с периодическим перемешиванием. Затем смесь цен> рифугируется, 1-й элюат сливается и вся процедура элн>ции повторяется сщс трижды тем >«е оуфером. Затем все элюаты сливаются вместе. полученная смесь подкисляется соляной кислотой до рН 6.2 и поступает для стерилизуюшего фильтрования.

Трианатоксин получается путем смешивания моновалентных анатоксинов и должен содержать в 1 ял не менес 25 ед. св. перфрингенс, 25 ед. св. эдиматиенс и 200 ед. св. столбняка. Затем триапатоксин сорбируется 60 >-ной гидроокисыо алюминия и для отстаивания помещается на 18 часов на ледник, после чего надосадочпая жидкость декаптируется через сифон до первоначального объема и проверяется на стерильность путем высева на питательные среды.

Стерильный препарат разливается в ампуль. и подвергается контролю на стерн,чьность, безвредность и иммуногенность.

Стерильность моновалент Iblx анатоксинов и триaпатоксина i1роверяется путем высева 3 ампул от ка :дой оутыли из питательной среды в аэробных и в анаэробных условиях: на 2 пробирки Тароцци и 2 пробирки полужидкого агара.

Посевы выдерживаются при 37" в течение 15 дней, кроме того, производится посев из тех же 3 ампул на агар Сабуро и простой бульон. Последний выдерживается при температуре 20 — 22" в течение 8 дней.

Безвредность трианатоксина проверяется путем введения морским свинкам весом 300 — 350 г под кожу и три места 3 >ил препарата по

1,0 ял в каждое место и наблюдения за животными в течение 20 дней. У привить:х ?KHBOTltblx на месте введения образуются плотные узлы — депо. сохраняющиеся на протяжении 1 — 2 месяцев. У привитых животных не должно быть общей реакции или явления столбняка.

Иммуногепность трианатоксина в отношении столбняка и эдематиенс проверяется на тех >ке свинках, на которых проверяется безвредность препарата. Через 20 дней после введения 3 л л содержащего 0,3 л л столбнячного апатоксина и 0,3 лл апатоксина эдематиенс (в два места по 1.5 ял в каждое) трем морским свинкам вводится 100 ДУМ столбнячного токсина и трем свинкам

10 ДУМ токсина эдематиенс. Наблюдение за животными проводится в течение 7 дней. Годным считается трианатоксин, предохраняющий больше 50", животных от заболевания столбняком и газовой гангреной.

Иммунизирующпе свойства трианатоксина в отношении газовой гангрены, вызванной В. perfringeIIs, проверяются на белых мышах путем введения под кожу 1,0 мл трианатоксина. Для испытания берется 10 мышей. Через 30 дней после введения трианатоксипа мышам вводится внутривенно или внутрибрюшинно DCI., токсина перфрингенс.

Наолюдение за животными проводится в течение 3 дней. Годными № 10.3907 считаются трианатоксины, предохраняюи ие от гибели более 50% животных.

Предмет изобретения

Способ получения поливалентного анатоксина для иммунизации прогив анаэробных инфекций, о т л ич а ю шийся тем. что культуры соответствующих патогенных анаэробов раздельно выращивают на казеиново-растительной питательной среде, полученной в результате гидролиза с помощью растительной (грибной) протеазы, после чего токсин фильтруют и детоксицируют. как обычно, а затем освобождают от балластного белка и концентрируют повторным высаживанием в кислой среде. образовавшийся остаток анатоксина отделяют центрифугированием и растворяют в фосфатном буфере, адсорбируют на гидроокиси алюминия и далее анатоксин осаждают, элюируют, стерплизуют, проверяют на безвредность и иммуногенность как обычно и смешивают.