Способ получения суммы фенольных соединений,обладающей желчегонным и противовоспалительным действием

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

РЕСПУБЛИН уд) A 61 К 39/78

Н ABTOPCNOMV СВИДВТВПЬСТВ)Г

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

OO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЗ (2 1) 3338040/28-13 (22) 17.08.81 (46) 15.06.83. Бюл. и 18 (72) Н. Ф. Комиссаренко, Н. П. Скакун и С. И. Иарчишан . (71) Харьковский. научно-исследова- . тельский химико-фармацевтический институт и Тернопольский государственный медицинский институт (53) 615.45:615.7(088.8) (56) 1 .. Авторское свидетельство СССР

И 309709, кл. А.61 К 35/78, 20 09.71. (Ь4) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СУИМЫ ФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ, ОБЛАДАЮЩЕЙ ЖЕЛ-

„„Я0„„1017338 A

ЧЕГОННЫИ И ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫМ ДЕЙ"

СТВИЕИ путем экстракции растительнот . го сырья этанолом, упаривания экстракта, растворения остатка в воде и очистки полученного водного раствора органическим растворителем, о т л ич а. ю шийся тем, что, с целью расширения сырьевой базы, экстракции

7В-82 -ным этанолом подвергают из-мельченные соцветия арнйки горной (Arnica montana-(.), при соотноше" нии сырье:экстрагент 1:9-1:12, вод ный раствор госле очистки хлоро-формом обрабатывают бутанолом при соотношении 1:2-1:3 и упаривают.

1 10173

Изобретение относится к химикофармацевтической промышленности и касается получения природных полифенолов, которые могут Ьыть использованы в качестве лекарственного сред- 5 ства, Известен способ получения полифенолов путем зкстрагирования соцветий бессмертника 504-ным зтанолом, упаривания, растворения остатка в воде с последующей обраЬоткой

его смесью этилацетата и этанола 11 1.

Недостатком этого способа является ограниченность сырьевой базы 15 в связи с природным происхождением сырья.

Целью изобретения является расширение сырьевой базы.

Поставленная цель достигается 20 тем, что согласно способу получения суммы фенольных соединений, обладающей желчегонным и противовоспалительным действием, включающему экстракцию растительного сырья 25 этанолом, упаривание экстракта, растворение остатка в воде и очистку полученного водного раствора органическим растворителем, измельченные соцветия арники горной {Агп1са поп- 50

tana L) зкстрагируют 78-82 -ным этаналом при соотношении сырье:экстрагент l:9-1:12, а. водный раствор после .очистки хлороформом обраЬаты,вают бутанолом при соотношении

1:2-1:3 и упаривают.

Способ осуществляется следующим, образом.

Измельченные цветочные корзинки арники горной экстрагируют 78-82"ьным этанолом, экстракт упаривают до водного остатка, который очищают от липофильных веществ обработкой хлороформом, очищенный водный раствор обрабатывают бутанолом в соотношении 1;2-1:3, бутанольное извлечение упаривают досуха и измелЬчают. Выход целевого продукта составляет 3,75-4,51.

Пример, 1 кг измельченных корзинок арники горной (Arnica montana L) экстрагируют десятикратным . количеством 803-ного этилового спирта. Полученный экстракт упаривают в вакууме (ост. давление 100 -

140 мм рт, ст,) при 80-90 С до густого остатка (0,5 л), разЬавляют двукратным количеством дистиллированной воды, . a водный раствор обрабатывают хлороформом в соотношении

2:1 к полученному раствору с целью удаления липофильных веществ, очищенный .таким образом водный раствор обрабатывают бутанолом в соотношении 1:2-1:3, Бутанольные извлечения упаривают под вакуумом до полного удаления растворителя, сухой остаток измельчают. Получают 45 г (что составляет 4,54 от веса сухого сырья) аморфного желтовато-коричневого порошка со специфическим запахом, слабо горького вкуса, плохо.растворимого в холодной воде, растворимого в горячей воде, 954-ном спирте, нерастворимый в ацетоне, бензоле, хлороформе, Сумма полифенольных соединений арники горной обладает выраженным желчегонным действием, противовоспалительным эффектом и по желчегонной активности не уступает фламину.

Преимущество препарата арники заключается.в более выраженном действии на синтез желчных кислот °

Сравнительное изучение желчегонной активности препарата суммы фенолов арники горной и фламина показывает, что при однократном введении по 25 мг/100 она примерно одинакова. Увеличение скорости секреции составляет соответственно 19 и

2М . При повторном введении препаратов в течение 7 дней в среднем на

164 под влиянием препарата арники и на 204 - фламина, При более продолжительном повторном введении препаратов (в течение 14 дней) желчегонное действие суммы фенольных соединений арники проявляется почти в 1,5 раза больше.по сравнению с таковым,: фламина. Прирост. показателя общего количества выделившейся желчи за четыре часа наблюдения составляет 37ь под влиянием первого препарата и

26"ь - второго.

Под влиянием суммы фенольных со-, единений арники горной концентрация желчных кислот в желчи увеличивается во всех опытax: при однократном введении препарата суммарная концентрация желчных кислот возрастает в среднем с 1421+139 до 1978+134 мг.1, и при повторном - в среднем с 1558+8 до 2140+156 мг А (через 7 дней) и с.

2157+206 до 2728+259 мг.Ф (через 14 дней) ° фламин также вызывает увеличение содержания желчных кислот, однако ния с желчью холатов и билирубина, М что свидетельствует о торможении синтеза и секреции печенье как желчных кислот, так и Ьилирубина.

Уже на 7-Й день после введения скорость секреции желчи возрастаи ла с 2,9+0,1-3,0+0,2 мг/мин/100 до

3,1+0,1-3,4+0,1 мг/мин/100 или почти на 104, а на 14-й день - с 2,8+0,13,2+О, l до 2,9+0,1-4,4+0,1 мг/мин/100 или на 1о"ь, достигнув исходного уровщ -ня °

Ф

Применение препарата суммы феноль: ных соединений арники способствует очень Ьыстрому восстановлению нарушенного четыреххлори стым углеродом синтеза желчных кислот, причем в. большей мере, чем применение фламина.

Уже на 7-й день наблюдения суммарная концентрация желчных кислот более чем в 2 раза превышает .контрольный уровень. Она достигает 1826+38 мг.C против 1421+139 мг.4 у интактных животных, В аналогичных опытах фламин также приводит к повышению показателя суммарной концентрации, но не в такой степени, как препарат; арники

3S горной (соответственно 1687+70 и

1826+38 мг А), К 14-му дню суммарная концентрация желчных кислот под влиянием препаратов арники возрастала с 1086+82 до 1963«+133 мг, а фламина - до 1783+

+144 мг А, И в первом и во втором случае этот показатель намного превосходит контрольный уровень (l421+

+139 мгА).

Под влиянием препарата суммы фенольных соединений арники быстро вос1станавливается содержание и ЬилируЬииа в желчи. Уже íà 7-й день концентрация его увеличивается в среднем с 13,81+1,280 до 18,8l+1,831 иг.Ф, особенно за счет пигмента, конъюгированного с: глюкуроновой кислотойс 10,56+1,100 до 15,25+3,724 мг.4.

На 7-й день заболевания под влиИ янием препарата арники показатель общего количества выделяемых с желчью желчных кислот увеличивается с

1,358+0,094 до 3,558+0,034 мг/100/ч, 3 101 лишь при повторном введении, При од, нократном введении прироста этого показателя желчегонного действия фламина не происходит.

При однократном введении суммы фенольных соединений арники горной выделение желчных кислот возрастает в среднем с 2,867+0,208 до 4,666+

«+0,51 (р (0,05) мг/ч/100 или на 63ь, в том числе тауроконъюгатов на 42ь и гликонъюгатов - a три раза. В меньшей мере действие проявляется под влиянием фламина - соответственно на 8,3 и 431.

Эффективность влияния на дистрофию печени белых крыс суммарного фенольного препарата арники горной в сравнении с фламином.

-Опыты поставлены на 40 белых крысах массой 120-160 . г. -Острую дистро фию печени вызывали путем введения под кожу 503-ного масляного раствора четыреххлористого углерода по 0,4 мл на 100 r массы животного ежедневно в течение 4 дней. С целью профилактики некрозов на месте введения яда дозу последнего делили пополам и вводили в обе задние лапы в Области бедра, Об эффективности полученного средства судили по данным определения функционального состояния печени, проводимого на 7-й .и 14-й день от . начала введения четыреххлористого углерода. В качестве тестов функционального состояния йечени служили: скорость секреции желчи за каждый из четырех часов наблюдения, общее количество желчи, подученное на 4.ч, концентрация в желчи кислот (суммарно и раздельно конъюгированных с таурином и глицином), билирубина (суммарно, прямого и непрямого) и холестерина, а также общее количество этих ингредиентов, выделяющихся с желчью.

На 7 и 14-й день после начала воздействия на животных четыреххлористого углерода интенсивность секреции желчи была намного ниже по сравнению с интактными. На 7-й день наблюдения скорость секреции желчи не превышала 2,9+0,1 - 3,0+0,2 мг/мин/100 против 3,1+0,2-3,3+0,1 в контроле, а на 14-й день,- 2,9+0,1-3,2+0,1. В эти сроки наблюдения за 4 ч было получено 714+3,2 и 720+24 мг/100 желчи или на 15 и 14Ъ меньше, чем у инт-.. тактных крыс, Происходило также зна7338 4 чительное уменьшение концентрации желчных кислот в желчи (на. /-й день почти вдвое), в том числе конъюгированных с таурином и глицином, а также билирубина. Практически не изменялась концентрация холестерина в желчи. Еще в Ьольшей мере наблюдалось снижение показателей выделе5 .! 017338 d значительно превосходя нормальный, весом правой и левой лапки судили о уровень (в среднем 2,867+0,208). степени воспалительного отека (контПротивовоспалительное действие рольные данные). Препарат мышам суммы фенольных соединений арники вводили внутрь в дозах 10 мг/100, горной. 25 мг/100 и 50 мг/100 эа 2 ч до

Мышам весом 20-25 r в толщу бед- введения формалина. ра правой задней лапы вводили 0,1 мл По разнице в весе лапы у мышей кон1 ь-ного раствора формалина. Спуетя трольной группы и получавших препа24 ч животных забивали и на уровне рат арники судили о противоотечном тазобедренного сустава отрезали обе 1в действии. лапы, их взвешивали. По разнице между Результаты приведены в таблице, I 1 Ф

Влияние суммы фенольных соединений арники горной на отек лапы, вызванный у мышей формалином

Доза в мг/100

Величина отека

Противовоспалительный эффект, Вещества мг 4 формалин

405+16 100

Формалин+ препарат

355+28 87,6 l2,4

Формалин+ пре и арат

315+21 77, 7

22,3

Формалин+ препарат

21,0

320+19 79,0

Из данных таблицы видно, что у мы-. шей под влиянием формалина развивается отек лапы. Максимальная величина отека лапы в контроле составляет 405+16 мг (1003). У мышей, получавших препарат, отек лапы значительно меньше.

Во второй серии опытов изучали действие веществ на асептический отек лапы крысы, Опыты проводились на крысах массой 120-180 г. Животные были распределены на две группы °

Крысам первой группы (подгруппы

1,2,3) под апоневроэ задней лапы вводили 0,1 мл 2,53-ного раствора формалина, О,ООЯ раствора серотанина, 5Ф декстрана, Крысам второй группы (подгруппы 4,5,6)одновременно с флогогенными веществами и спусSO тя 5 ч вводили препарат арники горной в дозе 25 мг/100, В последующие дни препарат вводили 2 раза в день до дня исчезновения отека. Объем лапы измеряли онкометрически по методу

И, А. Салямоиа. О противовоспалительном эффекте судили по разнице в вели-. чине отека лапы KoHTpoflbHoh группы и животных, получавших одновременно с флагогенными веществами фенольные вещества.

После введения формалина мак симальная величина отека наблюдалась спустя 6 ч и сохранялась в пределах этого уровня в течение последующих

6 дней. На 10-й день, сравнительно с первым днем, отек лапы уменьшался почти в 2 раза и составил. 58,13, к 12-13 дням отек лапы постепенно уменьшился, объем ее достиг исходной величины.

Под влиянием декстрана максималь-. ное развитие экссудативной фазы воспаления отмечалось спустя 60 мин, серотонина - 3 ч. Затем произошло постепенное уменьшение объема лапы, достигающее исходных величин после введения декстрана спустя 72 ч и серотонина - спустя 48 ч. Максимальный отек на фоне действия декстрана составил 133,3+6,74, серотонина-!

08,6+4,91.

У крыс, которым одновременно с флогогенными веществами вводили сумму фенольных соединений арники, отек, по сравнению с контрольными данными, на всех моделях был значительно меньСоставитель Е „Волкова

Техред. С,.Мигунова . Корректор И.Демчик

Редактор С. Тимохина

Заказ 3423/9 Тираж 713

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Носква- Х-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

7 10173 ше, Наступило также сокращение време.мени возвращения объема лапы к исходной величине, У крыс, получавших препарат, на формалиновой модели величина отека .. составила 57,43, т.е. в s два раза меньше, чем в контрольной группе.

На шестой день отмечалось возвра.щение объема лапы к исходной величи- 1в не. Величина отека лапы у крыс, кото38 8 рым вводили препарат арники на фо-н не действия серотонина, составляла

88,5+6,44, декстрана - 100+5,4 ..Следовательно, величина отека, в отличие от контрольных данных, соответственно моделям на 32,4Ф, 16,63 и 25,63 меньше, Эти данные указнвавт, что сумма фенольных соединений арники горной обладает выраженным противовоспалительным действием.