Способ определения жизнеспособности яиц цестод

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ЯИЦ ЦЕСТОД, включающий активацию яиц путем инкубации их при 36-40 С в водном растворе, содержащем пип1еварительный фермент - панкреатин, соду пищевую и овечью желчь, отличающийся тем, что,с целью повышения точности способа и его ускорения , перед инкубацией яйца цестод помещают в 1,8-2,2%-ный раствор едкого калия или соляной кислоты на 812 мин. (Л

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

00 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21)3440249/30-15 (25) 3403006/30-15 (22) 17,02.82 (46) 23.05.84. Бюл. 11 19 (72) А.К.Журавец (71) Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт (53) 541 124.7:542.,97(088.8) (56) l. Камалова А.Г. Разработка и сравнительная оценка методов установления жизнеспособности яиц тениид..

Канд.дисе И., 1948

2. Е.Neymarian.Взаимосвязь между хозяином и паразитом при эзинококкозе.-Американский журнал тропической медицины и гигиены.. т.10, вып.5, 1961, с.719-726.

„ЯК„1 3 24 А

gag А 61 В 1О/ОО; С, 01 N 33/48 (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ЯИ11 ЦЕСТОД, включающий активацию яиц путем инкубации их при

36-40 С в водном растворе, содержащем пищеварительный фермент — панкреатин, соду .пищевую и овечью желчь, о т л ич а ю шийся тем, что,с целью повышения точности способа и его ускорения, перед инкубацией яйца цестод помещают в 1,8-2,2Х-ный раствор едкого калия или соляной кислоты на 8-

12 мин.

1 IO

Изобретение относится к ветернна— рии, в частности к определению жизнеспособности яиц гельминтов, Известен способ определения жизнеспособности яиц тениид, включающий воздействие на них 1%-ного раствора сернистого натрия 11).

Недостатком этого способа является непригодность его для определения жизнеспособности яиц других видов цестод, как зхинококков, Известен также способ определения

Жизнеспособности яиц эхинококков, включающий активизацию яиц путем инкубации их при 36-40 С в водном растворе, содержащем пищеварительный фермент — панкреатин, соду пищевую и овечью желчь (2).

Недостатком данного способа является низкое содержание освободившихся и подвижных онкосфер, длительность воздействия на яйца, сложность процедуры активирования с применением центрифугирования пробирок для осаждения яиц.

Целью изобретения является повышение точности способа и его ускорение.

Поставленная цель достигается тем, что проводят активизацию яиц путем о инкубации их при 36-40 С в водном растворе, содержащем пищеварительный фермент — панкреатин, соду пищевую и овечью желчь, перед инкубацией яйца цестод помещают в I 8-2,2 -ный раствор едкого калия или соляной кислоты на 8-12 мин ° о

Затем инкубируют при 36-40. С,промывают, добавляют водный раствор, содержащий панкреатин 0,8-1,21oíå÷üþ желчь 18-22, соду пищевую 1,1-1,5,è вновь инкубируют в течение 10 мин, после чего пробу просматривают под микроскопом.

П р и м е p l. Членики эхинококков с помощью препаровальных игл освобождают от яиц, к последним добавляют дистиллированную воду и полученную суспензию яиц с помощью глазной пипетки вливают в луночку предметного стекла в количестве до

2-3 тыс.яиц, После этого лишняя вода удаляется с помощью фильтровальной бумаги и в луночку добавляется с помощью капельницы или глазной пипетки 1012 капель 2%-ного водного раствора едкого калия, Предметное стекло поме щают в термостат и выдерживают там при 38 О в течение 10 мин. По истечео

93324 2 нии указанного времени пробу вынимают иэ термостата и яйца дважды промывают, Для этого раствор осторожно удаляют фильтровальной бумагой так, чтобы не захватить яйца эхинококков и часть освободившихся инкосфер, затем вливают в лунку с помощью капельницы 10-12 капель дистиллированной воды, снова удаляют с помощью

10 фильтровальной бумаги, снова добавля. ют воду в лунку и вновь удаляют. Под микроскопом можно пронаблюдать освобожденные онкосферы яиц в результате действия 2%-ного раствора едкого калия, После этого в луночки вливают раствор, содержащий пиц еварительн.яе секреты, на основе воды, соду пищевую и кишечные ферменты, а именно,X: панкреатин 1, желчь овечья 20 и сода пищевая 1,3, вода дистиллированная остальное, помещают в термостат и выдерживают там при 38 С в течение о

10 мин. После этого пробу вновь вынимают из термостата.

Для подсчета освободившихся онкосфер часть осадка суспензии переносится на другое предметное стекло, после чего ведется просмотр при малом (объектив х 8) и большом (объектив х

40) увеличении микроскопа на предмет наличия онкосфер и их подвижности, При данном способе освобождается от оболочек яиц 98% онкосфер, из них 79X — подвижных.

Пример 2. На шести предмет. ных стеклах с лунками или часовых стеклах поместили с помощью глазной пипетки по 2-3 тыс. зрелых свежевыделенных яиц эхинококков, хранившихся в физрастворе в холодильнике при температуре воздуха 5Т.

Две пробы яиц были опытными (I и

2), остальные четыре (3-6) — конт-рольные.

В качестве активизирующих сред приготовили три раствора. Раствор

1 — 2X-ный водный раствор щелочи KOH.

Раствор 2 имеет следующий состав на дистиллированной воде: сода пищевая (NaHCO ) 1,3, панкреатин медицинский IX,желчь овечья 4 кап./

l мл раствора., Раствор 3 .имеет следующий состав: сода пищевая 1,3, панкреатин медицинский l, желчь овечья 4 кап./1 мл холестерин (твин — 80) 0,05, трипсин 0,4%.

3 10933

Раствор 4 — IX-ный водный раствор сернистого натрия.

В лунки предметных стекол двух опытных проб 1 и 2 добавили с помощью капельницы 10 капель раствора 1.

Две контрольные пробы 3 и 4 заполнили 10 каплями раствора З,конт. рольные пробы 5 и 6 заполняли 10 каплями раствора 4. После чего все б проб яиц эхинококков поместили в термостат при температуре воздуха

37-38 С. Через 8-10 мин все пробы о вынули из . термостата.

В опытных пробах 1-2 жидкость уда- !5 лили с помощью фильтровальной бумаги так,чтобы яйца остались в осадке.

Затем лунки заполнили каплями дистиллированной воды и снова удалили надосадочную часть жидкости. Промывание культуры яиц э инококков повторили

2-3 раза. В контрольных пробах отмывание яиц не проводилось.

Результаты воздействия сред наблюдали под малым (х8) и большим (объек- д тив х 20) увеличением микроскопа.

После отмывания яиц в опытные пробы добавили по 10-12 капель раствора

2. В контрольных пробах 2 и 4 и 5 и

6 оставались прежние активизирующие растворы 3 и 4, Все пробы яиц Е.granulosus снова поместили в термостат при режиме

37-38оС продолжительностью íà 10 мин.

По истечении указанной экспозиции пробы яиц эхинококков достали из

35 термостата и наблюдали под микроскопом.

Путем подсчета количества вылупленных и подвижных онкосфер учиты- 4О вали эффективность нового и известных способов активизации яиц.

При наличии в пробах Онкосфер, в том числе:. и активных, часть осадка с помощью глазной пипетки перено- 45 ,сили в другук лунку и исследовали на процентное содержание онкосфер, а также на наличие подвижных зароды дыней. В случае отсутствия или малого количества выделенных онкосфер пробы с яйцами снова помещали в термостат на 10-15 мин, после чего их исследовали прд микроскопом. При необходимости термостатирование культур яиц повторяли 2-3 раза, об- 55 щей продолжительностью до 90 мин.

Пример 3. На четырех предметных стеклах с лунками или на ча24 4 совых стеклах поместили с помощью глазной пипетки по 2-3 тыс. свежевыделенных яиц. М. мультицепс, выдавленных из зрелого членика цестоды, хранившегося в физрастворе при о температуре воздуха 5 С в холодильнике.

Две пробы заведомо живых яиц были подопытными, две служили контролем.

В качестве активизирующих сред использовали три раствора.

Раствор 1. 27.-ный водный раствор соляной кислоты (НС1). Раствор 2 имеет следующий состав, г/Ж: сода пищевая (ИаНСО ) 1,3, панкреатин медицинский 1,2, 4 кап 1 мл раствора дицинский 1,2, желчь овечья 4 кап./

1 мл раствора, вода дистиллированная остальное.

Раствор 3. 1Х-ный водный раствор сернистого натрия.

В лунки предметных стекол опытных проб 1 и 2 добавили с помощью капельницы по 10 капель раствора 1.

Две контрольные пробы 3 и 4 заполнили 10 каплями раствора 3. Затем 4 пробы яиц поместили в термостат при о

38 С. Через 9-10 мин все пробы вынули иэ термостата. В опытах 1 и 2 с помощью фильтровальной бумаги жидкость осторожно удалили так, чтобы яйца остались в осадке. Затем лунки заполнили несколькими каплями дистиллированной воды и снова удалили надосадочную часть жидкости. Отмывание культуры яиц М.мультицепс повторили дважды. В контрольных пробах отмывание яиц не проводили.

Результаты воздействия сред наблюдали под малым (объектив х 8) и большим (объектив х 20) увеличением микроскопа.

После отмывания яиц в опытные про" бы добавили по 10-13 капель раствора 2. В контрольных пробах оставался активирующий раствор 3.

Все пробы яиц М.мультицепс снова поместили в термостат при температуре воздуха 37-38 С продолжительносТью на 9-10 мин. По истечении указаннбй экспозиции пробы яиц достали из термостата и наблюдали при малом и большом увеличении микроскопа.

Предложенный способ определения жизнеспособности яиц цестод повышает эффективность активизации яиц цестод, достигается выход 987 освободившихся онкосфер, из них 807. подвижных, или

% l 093324 O

Составитель М.Белоусова

Редактор С,Патрушева Техред Т.Фанта Корректор А.Лежннна

Заказ 3326/3 Тираж 688 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 в среднем активность повышается в два раза; ускоряет процесс определе ния жизнеспособности яиц в 4,5 раза; .предложеннйй способ может с. успехом применяться для определения жизнеспособности яиц цестод для выявления овоцндных препаратов.