Способ получения индуктора защитных реакций картофеля к болезням
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНДУКТОРА ЗАЩИТНЫХ РЕАКЦИЙ КАРТОФЕЛЯ К БОЛЕЗНЯМ, включающий экстрак цию мицелия возбудителя фитофтороза картофеля , концентрирование экстракта и отделение индуктора из экстракта от антииндукторов , отличающийся тем, что, с целью его ускорения и упрощения, выделение индуктора из экстракта проводят путем двухкратного препаративного центрифугирования. О)
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК з(5о А 01 N 63/00
/,., ОПИСАНИЕ ИЗОЕРЕТЕНИЯ "«, Н А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3399561 30-15 (22) 15.01.82 (46) 23.10.84. Бюл. № 39 (72) Л. В. Метлицкий, О. Л. Озерецковская, Л. И. Чалова, Г. И. Чаленко, Л. А. Юрганова и Т. Э. Карапетян (71) Ордена Ленина институт биохимии им. А. Н. Баха (53) 632.4.01 (088.8) (56) 1. Bostock R., Kuc J. А lipophilic fraction from Phytophthora infestans elicits
the accumulation stress metabolites in potato tuber. — «Phytopathology», ч. 70, № 7, 1980, р. 688.
2. Чалова Л. И., Барамидзе В. Г., Юрганова Л. А., Дьяков Ю. Т., Озерецковская
О. Л., Метлицкий Л. В. Изолирование и характеристика индуктора защитных реакций картофеля из цитоплазматического содержимого возбудителя фитофтороза.
Докл. АН СССР, т. 235, 1977, № 5, с. 12151218 (прототип).
„„SU„„1119647 Д.(54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕН(1Я ИНДУКТОРА ЗАЩИТНЫХ РЕАКЦИЙ КАРТОФЕЛЯ К БОЛЕЗНЯМ, включающий экстрак цию мицелия возбудителя фитофтороза картофеля, концентрирование экстракта и отде. ление индуктора из экстракта от антииндукторов, отличающийся тем, что, с целью его ускорения и упрощения, выделение индуктора из экстракта проводят путем двухкратного препаративного центрифугирова ния.
1119647
Известный (гель-фильтрация через сефадекс) 48,2
0,95
Предлагаемый (центрифугирование) 46,5
0,97
Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности, к защите картофеля от болезней.
Известен способ получения липидных фракций из мицелия возбудителя фитофтороза Phytophthora infestans (Mont.) d By, индуцирующих в картофеле образование антибиотических веществ — фитоалексинов (ФА) (1).
Недостатком этого способа является необходимость механического разрушения мицелия и ультразвуковой обработки до экстракции органическими растворителями.
Известен способ получения активного индуктора защитных реакций картофеля из фитофторы — липогликопротеинового комплекса (ЛГП-комплекса) по следующей схеме: экстракция неразрушенного мицелия гриба 70О/о-ным этиловым спиртом при нагревании на кипящей водяной бане в течение 20 мин (2 раза); концентрирование объединенного водно-спиртового экстракта в вакуумном испарителе при 40 С до удаления спирта; диализ полученного водного экстракта через целлофан против дистиллированной воды в течение 18 ч; хроматография недиализуемой части экстракта 25 на колонках с сефадексом G-50 (2).
К недостаткам известного способа относится то, что он основан на использовании дорогостоящих импортных реактивов (сефадекс G-50).
Кроме того, многократное разделение на колонках для получения достаточного количества индуктора является трудоемким и малопроизводительным процессом.
Следовательно, известный способ выделения индуктора не может быть использо- З
35 ван для получения индуктора в количествах, достаточных для индуцирования защитных реакций с целью предупреждения развития болезней картофеля в условиях современного сельскохозяйственного производства.
Целью изобретения является ускорение, упрощение и удешевление процесса получения активного индуктора защитных реакций картофеля к болезням (ЛГП-комплекса) из мицелия возбудителя фитофтороза.
Поставленная цель достигается тем, что согласно способу для получения целевого продукта ЛГП-комплекса водный экстракт мицелия после удаления спирта подвергается двухкратному препаративному центрифугированию.
Существенным отличием предлагаемого способа является замена двух стадий получения 18-часового диализа и разделения на колонках с сефадексом на двухкратное центрифугирование, что позволяет ускорить и удешевить процесс получения целевого продукта.
Пример 1. ЛГП-комплекс получают по следующей схеме: двухкратная экстракция мицелия фитофторы 70О/р-ным этиловым спиртом при нагревании на кипящей водяной бане в течение 20 мин; концентрирование объединенного водно-спиртового экстракта в вакуумном испарителе при 40 С до удаления спирта; центрифугирование водного экстракта при 15000 д в течение 30 мин; перераспределение получившегося осадка в дистиллированной воде и повторное центрифугирование; лиофильное высушивание осадка, представляющего собой ЛГП-комплекс.
Пример 2. Данные, характеризующие количественный выход индуктора и его биологическую активность в зависимости от метода выделения из мицелия фитофторы, приведены в таблице.
11!9647
Составитель В. Агафонов
Редактор И. Дербак Техред И, Верес Корректор В. Синицкая
Заказ 7499/2 Тираж 721, Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений. и от крытый
113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП <Патент>, г, Ужгород, ул. Проектная, 4
О биологической активности выделенного индуктора судят по образованию в картофеле антибиотических веществ — фито:Глексинов и снижению развития фитофтороза на клубнях по сравнению с контролем (обработка водой). Оказалось, что при использовании центрифугирования экстракта выход ЛГП-комплекса был такой же, как и при гель-фильтрации. При этом способность вызывать защитные реакции в картофеле оставалась неизменной.
При центрифугировании происходит не только концентрирование ЛГП-комплекса, но и отделение его от сопутствующих веществ — супрессоров. Эти вещества, предР ставляющие водорастворимые глюканы, препятствуют проявлению индуцнрующей способности ЛГП-комплекса.
Пруер 8. Для выделения индуктора из
10 г Йицелия фитофторы необходимо провести двухкратное центрифугирование в течение 2 ч или 18-часовой диализ и 1б разделений на колонке с сефадексом размером
40х2,5 см, что занимает 34 ч. Таким образом, процесс выделения ускоряется в 17 раз.
Упрощение и ускорение способа выделения индуктора защитных реакций у картофеля делает его доступным для применения в сельском хозяйстве с целью борьбы с болезнями картофеля.
