Штамм @ @ @ @ 36-8-продуцент ингибитора трипсина

 

Штамм Screptoverticillium cinnamoneum 36-8, ЦМПМ-8-645 (Центральный музей промышленных микроорганизмов ВНИИгенетика) - продуцент ингибитора трипсина.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) а) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ вЂ” К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬГГИЙ (2 1) 3545208/28-13 (22) 20.01.83 (46) 23.12.84. Бюл.У 47 (72) А.М.Безбородов> И.В,Улезло, М.В.Шульгина, Н,А.Куропаткина, А.Н.Полиц и К.А.Виноградова (71) Институт биохимии им. А.Н, Баха (53) 615.779.94(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

У 659610, кл. С 12 P 1/06, !978.

3(51) С !2 P 1/05 /./ С 12 Р,l/06; (54) ШТАММ STREPTOVERTIGILLIUM CINNAMONEUM 36-8 — ПРОДУЦЕНТ ИНГИБИТОРА

TPHII CHHA .. (57) Штамм Streptovertici11ium cinnamoneum 36-8, ЦМПЬ -8-645 (Центральный музей промышленных микроорганизмов "ВНИИгенетика") — продуцент ингибитора трипсина, 1130603

Изобретение относится к микробиологии, в частности к получению ингибитора трипсина.

Известен продуцент ингибитора трипсина бЕлковой природы из группы фиолетовых актиномидетов Ц .

Однако для получения ингибитора трипсина с помощью известного штамма используется сложная технология, Цель изобретения — создание íî- 10 вого штамма — продуцента ингибнтора трипсина, не требующего сложного цикла ферментации.

Эта цель достигается с.помощью штамма Streptoverticillium cinnamoneum 36-8, Шатмм 36-8 выделен из образца карбонатной почвы Крыма. Депонирован в Центральном музее промьппленных микроорганизмов "ВНИИгенетика" под номером UMIIM-S-645 и характеризуется следующими свойствами.

Культурально-морфологические признаки.

На большинстве сред штамм форми. рует прямые опоровые цепочки, расположенные в мутовках, споровая оболочка гладкая. На среде 1Ф 1 Гаузе субстратный мицелий неокрашен, воздушный мицелий бледно-розовый.. На среде Чапека субстратный мицелий желтовато-бурый, воздушный мицелий белый, растворимого пигмента нет.

На глюкозо аспарагиновой среде субстратный мицелий от неокрашенно35 го до желтовато-бурого, воздушный мицелий образуется, растворимый пигмент яркий, золотисто-желтый, образующий узкую зону.

На среде Линденбайна субстратный 40 мицелий светло-буровато-желтый, до желтого, воздушный мицелий белый, слабый, растворимый пигмент отсутствует.

На среде У 2 Гаузе субстратный ми- 45 целий темно-желтовато-бурый, воздушный мицелий слабый, беловатый, растворимый пигмент желто-бурый.

На овсяной среде субстратный ми- 50 целий неокрашен, воздушный мицелий и растворимый пигмент отсутствует.

Штаьж меланин отрицательный.

Физиолого-биохимические свойства.

Желатину не разжижает, молоко не 55 изменяет, крахмал гидролиэует, иа клетчатке не растет, нитраты не восстанавливает, усваивает глюкозу, арабинозу, сахарозу, не усваивает ксилозу, маннифруктозу,раффинозу.

Пример 1 ° Трехсуточную культуру штамма 36-8 на среде следующего состава: пелтон 0,57.; перевар

Хоттингера ЗХ (a/о1 глюкоза 1Х; NaC1

0,5Х, вода водопроводная, рН 6,8-7,2 (стерилизация — 0,5 атм. 30 мин) засевают в количестве 107 в среду того же состава. Через 16 ч выращивания при 28 С с перемешиванием культуральную жидкость отделяют фильтрованием. Активность ингибитора достигает в культуральной жидкости максимального значения через

16 ч и составляет 33 ед/мл.

Характеристика целевоГо продукта. Препарат ингибитора трипсина, содержащийся в культуральной жидкости Streptoverticillium cinnamaneum

36-8, представляет собой смесь 3-5 кислых пептидов (в зависимости от условий культивирования) молекулярной массой 400-600, с антитрипсиновой активностью 12 ep/Nï, Пример 2. (сравнительный).

Для выращивания трехсуточную культуру на среде следующего состава: пептон 5 г/л; перевар Хоттингера 30 ип/л, вода водопроводная, глюкоза 10 г/л, рН 6,8-7,2; стерилизация 5 атм, 30 мин, NaC1 5r/ë, засевают в количестве 10Х в среду того же состава.

Через 16 ч выращивания при 28 С с перемешиванием культуральную жидкость отделяют фильтрованием. Активность ингибитора определяют по подав" лению гидролиэа 1-ного Х казенка

5 мкг трипсина в 2 мл 0,1М боратного буфера (рН 7,4) эа 30 мин при

37 С. Реакцию останавливают 2 мл

107-ной трихлоруксусной кислоты.

Количество гидролиэовавшегося казеина определяют спектрофотометрически по поглощению растворимых в трихлоруксусной кислоте компонентов при длине волны 280 нм. За единицу активности принимают такое количество ингибитора, которое вызывает 50Х-ное подавление гидролиза казеина. Активность ингибитора достигает в культуральной жидкости максимального значения через 16 ч культивирования и составляет 33 ед/мл или 657, Актиномицеты фиолетовой группы образуют ингибитор трипсина иа описанной среде эа 48-76 ч культивирования. В качестве посевного матеСоставитель Г. Смирнова

Рвдактор Н. Яцола Техред 0."Вайрпиина Корректор! А.ОбручарЗаказ 9520/22 Тираи 52! Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

l l3035, Москва, Ж-35, Рауаская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", .г.уигород, ул.Проектная, 4 риала используют культуру,выращенную на среде, содеркащей крахмал, кукуруз-ный экстракт и дроккевый автолизат, Ингибирующая активность достигает 50- 70Х

Использование штамма 36-8 позволяет получать ингибитор трипсина в иьоз 4 более короткие сроки (за 1б-l8 ч) вместо 48 — 72 ч с использова— нием в качестве. посевной и ферментациоиной сред одной среды что упрощает технологию полу— чениа