Штамм микроскопического гриба @ @ нрв-169- продуцент @ - амилазы

 

Штамм микроскопического гриба Aspergillus oryzae НРБ-169. (коллекция Центрального Музея промышленных микроорганизмов Института ВНИИГенегика , коллекционный номер ЦМПМ F-257) - продуцент б -амилазы.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛ ИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК г л р щ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ, 13

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ CCCP

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ и (21) 3669679/28-13 . (22) 31. 10.. 83 (46) 30. 05.85ь Бюл. В 20. (72) P.Â.Çóåâà, Н.М.Павлова, В.П.Кременцова и С.А.Коновалов (71) Всесоюзный научно-исследовательский биотехнический институт (53) 577. 15(088. 8) (56) Авторское свидетельство СССР з 506618, кл. С 12 N 9/30, 1974.

Авторское свидетельство СССР з 933704, кл. С 12 N 15/00, 1979.

„„SU„„115 579

4(зО С 12 N 9/30, С 12 N 1/14;

С 12 N 15/00; С 12 R 1/69

I (54) IHTAMM ИИКРОСКОПИЧЕСКОГО ГРИБА

ASPERGILLUS 0RYZAE HPB-169-ПРОДУЦЕНТ

aL -АИИЛАЗЫ . (57) Штамм микроскопического гриба

Aspergillus oryzae НРВ-169. (коллекция Центрального Иузея промьзпленных микроорганизмов Института "ВНИИГенетика", коллекционный номер ЦИПМ

F-257) - продуцент Ы-амнлазы.

1 1158

Изобретение. относится к ферментной отрасли микробиологической промышленности и может быть использовано в хлебопекарной, спиртовой, пивоваренной и других отраслях проььшлен. 5 ности.

Существует ряд штаммов-продуцентов амилазы, образункцих комплекс амилолитических ферментов при поверхностном и глубинном культивировании. Это 1О прежде всего грибы иэ рода Aspergillus . штамм Aspergillus oryzae

И-476-76-А, обладающий активностью культуры 400-500 ед/г (АС) по колориметрическому методу (ОСТ 59-3-71). 15

Цель изобретения — получение высокоактивного штамма-продуцента амилазы в условиях глубинного культивирования.

Предлагаемый штамм получен в ре- 20 эультате трех ступенчатого отбора при использовании мутагенов физической и химической природы. На первом этапе селекции в качестве мутагенов использовали 17-ный раствор нитроэо- 25 метилмочевины (НММ), на втором этапе — 17.-ный НММ в комбинации с УФ-лу1 чами (доза 25 -10 эрг/см ) иа третьем этапе — УФ-лучи. Исходным микроорганизмом для индуцирования селек-ЗО . ции служил штамм Aspergillus oryzae.

В результате индуцированной селекции была выделена новая мутантная форма HPB-169, активно.синтетиэирующая 3.-амилаэу.

Штамм имеет следующие характеристики.

1 . .Морфология.

Мицелий с ветвящимися гифами,разделенными на многоядерные клетки.Ширина клеток мицелия вырьируется в пределах 2-6 мк. Конидиеносцы — длинные и короткие, расширяющиеся кверху.

Головки конидиеносцев имеют булавовидную форму диаметром 13,5-15,5 мк.

Конидии — ровные, блестящие, круглые.

2. Культурально-биохимические признаки.

Среда сусло-агар.

Небольшая колония характеризует- 50 ся белым пушистым мицелием с ровными краями, диаметр колоний 2-4 см. При росте среда не окрашивается.

Минеральная агаризованная среда

Чапека. 55

Пушистые белые колонии с неровными краями. Диаметр колоний 2-3 см.

На обратной стороне колонии наблюда579 ется радиальная складчатость. Конидиеносцы с конидиями формируются в большей степени по краю колонии.

Картофельный агар.

Белая пушистая колония с неровными краями. Диаметр колонии 2-3 см.

Складчатость отсутствует.

Морковный агар.

Рост очень интенсивный колонии белые, пушистые. На обратной сторо-, не колонии наблюдается радиальная складчатость. Диаметр колонии 5-7 .сМ.

Синтетическая.агариэованная среда о

Колонии мелкие, пушистые, серого цвета. Диаметр колонии 1-1,5 см.

Складчатость отсутствует.

Рост на молоке.

Растет хорошо, молоко пептониэирует.

Рост на ломтиках картофеля.

Рост очень интенсивный, образует много конидий зеленого цвета.

Желатину не разжимает.

Ассимилирует маннит, сорбит, декстрины, крахмал, глюкозу, галактозу, арабинозу, ксилозу, рамноэу, лактозу, сахарозу потребляет, при росте происходит подщелачивание среды

Температурные границы развития

Азрег. oryzae НРВ-169: при 20 С рост замедленный, при 30 С рост хороший, при 40 С рост слабый, при 50 С рост очень слабый.

Отношение к кислороду: аэроб.

Пример. о -амилаэу получают путем выращивания штамма Asper. oryzae НРВ-169 при глубинном культивировании на среде следующего состава, Ж:

Колбы на 750 мп с готовой питательной средой засевают конидиальной суспензией, Кукурузу выращивают на качалке при 180 об/мин при 30 С в течение 4 сут.

Крахмал картофельный или кукурузный

БВК

КС1

К НРОф кто

MgS0g рН исходной среды

5 0

1,0

0 05

0,10

0,45

О, 05,.

5,2

3 1158579

Актив иост ь - амилазы, определяемая по колориметрическому методу (ГОСТ 2.264.4-74), составляет 4055 ед/мп. тинной

41,6

S;1

Результаты культивирования полученного мутанта представлены в таблице.

49,0

55 ° 1

1О!

Составитель И. Привалова

Редактор Л.Пчелинская Техред И.Асталош . Корректор M.Розман

Заказ 3521/27, Тираш 525 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушекая наб. ° д.4/5

Филиал ППП "Патент", г.ушгород, ул.Проектная, 4

Таким образом, в результате 3-х ступеней селекции получили мутант с .активностью в 2,0-2,5 раза выше активности исходного штамма.

Примечание. Втаблице

:представлены средние данные не менее

3-х повторностей.