Способ выявления нервных волокон и сосудов микроциркуляторного русла

 

СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ НЕРВНЫХ .ВОЛОКОН И СОСУДОВ МИКРОЦИРКУЛЯТОРНОГО РУСЛА путем фиксации ткани в 10-12%/ СЕп. ном формалине, приготовлеиия гистологических срезов, окраски и азотнокислом серебре, восстановления в растворах формалина, обр аботки в аммиачном серебре и повторно в растворах формалина, отличающийся тем, что, с целью повышения контрастности окраски, срезы перед окраской в 5-10%-ном растворе азотно-кислого серебра обрабатывают в 1-5%ном растворе диметилсульфоксида, а восстановление ведут в водных растворах формалина в следующих соотношениях для сосудов и нервных волокон 1:1 и 1:2 соответственно с последующей повторной обработкой в 0,25-1% (О ном растворе формалина.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (l9) (11) (51}4 С 01,N 1/28э ° А 61 В 10/00 7 зе )

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 8,, Н, АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ чнру „

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3623076/28-13 (22) 13.07.83 (46) 07.08.85. Бюл. У. 29 (72) Ю.Н.Майборода и Ю.Н.Мокин (71) Ставропольский государственный медицинский институт (53) 615.445(088.8) (56) Куприянов Б.В. Пути микроциркуляции. Кишинев ° : Картя Молдовеняске, 1969, с. 14-16.

Рассказова E.È. Методы импрегнации нейроплазмы разных периферических нервных волокон и окончаний. Вопросы психиатрии,М.: Медицина, 1956, с.349-353. (54)(57) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ НЕРВНЫХ В0ЛОКОН И СОСУДОВ МИКРОЦИРКУЛЯТОРНОГО

РУСЛА путем фиксации ткани в 10-12Хном формалине, приготовления гистологических срезов, окраски и азотнокислом серебре, восстановления в растворах формалина, обработки в аммиачном серебре и повторно в растворах формалина, отличающийся тем, что, с целью повышения контрастности окраски., срезы перед окраской в 5-10Х-ном растворе азотно-кислого серебра обрабатывают в 1-5Хном растворе диметилсульфоксида, а восстановление ведут в водных растворах формалина в следующих соотношениях для сосудов и нервных волокон.1:1 и 1:2 соответственно с последующей повторной обработкой в 0,25-1Хном растворе формалина.

1 1171

Изобретение относится к области медицины, в частности в морфологии, и предназначено для изучения микроскопических структурных компонентов нервных волокон и сосудов мик- роциркуляторного русла внутренних органов.

Целью изобретения является повышение контрастности окраски.

Способ осуществляют следующим 10 образом.

Изучаемые органы, например язык, поджелудочная железа, кожа, внепеченочные желчные протоки, малый сальник,подлежащие гистологической обра

15 ботке с целью выявления нервных структур, вначале фиксируют в течение 7-10 дн. в 12Х-ном растворе формалина с рН 7,2-7,4.Для выявления микрососудов материал рекомендуется фиксировать в течение 20-25 дн. в 10Хном растворе формалина с рН в пределах 6,3-6 5. Укаэанные .параметры фиксации выработаны опытным путем. Нарушение их резко ухудшает вноследующем, 25 качество выявляемых структур в препаратах. После фиксации материал промывают сначала в проточной, а затем в дистиллированной воде для отмывки избытка формалина из тканей органов. З0

Для последующего выявления нервных структур материал следует промывать только в нескольких порциях дистилированной воды. Приготовленные на замораживающем микротоме гистологические срезы в количестве 3-4 помещают на 1?-15 мин. в 1-5Х-ный раствор диметилсульфоксида, приготовленного на дистилированной воде. Диметилсульфоксид в более низкой концентрации, 40 чем 1Х, медленно проникает в ткани и, соответственно, замедляет процесс диффузного проникновения красящего реактива, Более высокая концентрация (свыше 5Х), а также увеличение 4$ веремени инкубации приводят в даль нейшем к деформации материала вследствие гидратации ткани и сморщиванию срезов. Из диметилсульфоксида срезы, предварительно осушив фильтро- 50 вальной бумагой, переносят на 15-30 мин. в 5Х-ный раствор азотно-кислого серебра. Преимущество использования 5Х-ного раствора азотно-кислого серебра заключается в том, что Я эта концентрация оптимально обеспечивает выявление нервных структур и микрососудов. Превышение этой

690 2 концентрации ведет к неоправданным расходам кристаллического серебра, В целях получения препаратов для изучения интраорганных микрососудов срезы из азотно-ксилого серебра проводят через ряд ванночек с 1-2Хным раствором кислого формалина, приготовленного на ссмеси свежей водопроводной и дистиллированной воды в соотношении 1:1. Для выявления нервных компонентов срезы проводят через ванночки с 0,5-1 -ным раствором кислого формалина на смеси отстоявшейся водопроводной и свежеприготовленной кипяченой воды в соотношении 1:2. Допустимый предел рН растворов для обоих случаев должен быть 6,0-6,3. Превьппение концентрации указанных формалиновых растворов приводит к избыточному осаждению формалина на гистологических срезах, что затрудняет микроскопическое исследование препаратов. Применение свежекипяченой и отстоявшейся водопроводной воды продиктовано необходимостью уменьшения .концентрации хлоридов и карбонатов кальция, препятствующих связыванию ионов серебра белковыми структурами нервной ткани. В дальнейшем срезы переносят на 1-2 мин в раствор аммиачного

i сЕребра, в котором аммиака должно быть на 1-2 капли больше с целью подавления окрашивания элементов стромы. Из аммиачного серебра срезы помещают в 0,5-1Х-ный раствор нейтрального формалина, приготовленнного на водопроводной воде комнатной температуры, до приобретения ими соломенного оттенка. Данный раствор применяют в том случае, если необходимо дифференцировать в исследуемых тканях микроциркуляторное русло, поскольку. стенки сосудов обладают слаI бой аргирофилией. Для окончательной . дифференцировки нервных структур используют 0,25-0,5Х-ный раствор нейтрального формалина на свежей кипяченой воде. Увеличение концентрации формалина в обоих случаях приводит к гомогенному закрашиванию тканей. Фиксация окрашенных срезов осуществляется в аммиачной воде, приготовленной из расчета 1 ч аммиачного спирта,25%-ной концентрации и 4 ч. дистиллированной воды, в течение 1 ч. Затем срезы промывают в дистиллированной воде в течез 117 ние 12 ч. со сменой воды 1-2 раза.

Обезвоживание в спиртах, карбол-ксилоле, ксилоле, заключение в бальзам производится известным способом.

Пример 1. Выявление нервного аппарата языка °

Подлежещие гистологической обработке кусочки языка с целью выявления нервных структур фиксируют в течение 10 дн, в 12Х-ном растворе форма- lo лина с рН 7,2-7,4, После фиксации материал промывают в течение 2 ч. в нескольких порциях дистиллированной воды. Затем . приготавливают на замораживающем мик- ротоме гистологические срезы языка и в количестве 3-4 помещают на 12 мин в 1Х-ный раствор диметилсульфоксида, приготовленного на дистиллированной воде. Из диметилсульфоксида срезы, 20 предварительно осушив фильтровальной бумагой, переносят на 15 мин в 5Х-ный раствор азотно-кислого серебра. После азотно-кислого серебра срезы проводят через ванночки с 0,5Х-ным раствором кислого формалина на смеси отстоявшейся водопроводной и и свежеприготовленной кипяченой воды в соотношении 1:2. Срезы иэ формалиновой ванночки переносят на 1-2 мин в раствор аммиачного серебра, в котором аммиака должно быть на 1-2 капли больше. Для окончательной дифференцировки нервных структур срезы помещают в 0,25Х-ный раствор нейтрального формалина. пРиготовлен3S ного на свежей кипяченой воде до приобретения ими светло-табачного оттенка. Фиксация срезов осуществляется в аммиачной воде, приготовленной иэ расчета 1 ч. аммиачного

40 спирта 25Х-ной концентрации на 4 ч. дистиллированной воды на 1 ч. Затем срезы промывают в дистиллированной воде в течение 12 ч со

4 сменой. воды 1-2 раза. Обезвоживание в спиртах, карболксилола, ксилоле, заключение з бальзам производят по общепринятой методике.

Пример 2 ° Выявление нервного аппарата кожи.

Подлежащие гистологической обработке кусочки кожи с целью выявления структур фиксируют в течение 10 дн. в 12Х-ном растворе фор- И малина с рН 7,2-7,4. После фиксации материал промывают в течение 2 ч в нескольких порциях дистиллирован1690 4 ной воды. Затем приготавливают на замораживающем микротоме гистологические срезы кохи и в количестве

3-4 помещают на 15 мин в 5Х-ный раствор диметилсульфоксида, приго товленного на дистиллированной воде. Из диметилсульфоксиде срезы, предварительно осушив фильтровальной бумагой, переносят на 30 мин в 10Х-ный раствор азотно-кислого серебра. После азотно-кислого серебра срезы проводят через ванночки с 1Х-ным раствором кислого формалина на смеси отстоявшейся водопроводной и свежеприготовленной кипяченой воды в соотношении 1:2.

Срезы из формалиновой ванночки переносят на 1-2 мин в раствор аммиачного серебра, в котором аммиака должно быть на 1-2 капли больше.

Для окончательной дифференцировки нервных структур срезы помещают в

0,5 -ный раствор нейтрального формалина, приготовленного на свежей кипяченой воде до приобретения ими светло-табачного оттенка. Фиксация срезов осуществляется в аммиачной воде, приготовленной иэ расчета

1 ч, аммиачного спирта 25Х-ной концентрации и 4 ч. дистиллированной воды на 1 ч. Затеи срезы промыва ют в дистиллированной воде в течение 12 ч со сменой воды 1-2 раза.

Обезвоживание в спиртах, карболксилоле, ксилоле, заключение в бальзам по общепринятой методике.

Пример 3. Выявление внутриорганных сосудов микроциркуляторного русла в языке.

Подлежещие гистологической обработке кусочки языка с целью выявления микрососудов фиксируют в течение 25 дн. в 10Х-ном расворе формалина с рН 6,3-6,5. После фиксации кусочки языка промывают сначала в водопроводной,а затем в дистиллированной воде в течение 3-4 ч. Приготовленные на эаморахивающем микротоме гистологические срезы языка в количестве 10-15 помещают на 15 мин в 1Х-ный раствор диметисульфоксида, приготовленного.на дистиллированной воде. Из диметилсульфоксида срезы предварительно осушив фильтровальной бумагой, переносят на 15 мин в 5Х-ный раствор азотно-кислого серебра. После азотно-кислого серебра срезы проводят через ряд

1171690

Составитель Т.Журавкина

Техред С.йовжий Корректор. А.Тяско

Редактор Л.Зайцева

Заказ 4854/36 Тираж 897 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул, Проектная, 4 ванночек с 1Х-ным раствором кислого формалина, приготовленного на свежей водопроводной и дистиллированной воде в соотношении 1:1. Затем срезы переносят на 1-2 мин в раствор аммиачного серебра. Иэ аммиачного серебра срезы помещают в 0,5%-ный раствор нейтрального формалина, приготовленного на водопроводной воде комнатной температуры до приобретения ими соломенного оттенка. Фиксация срезов осуществляется в аммиачной . воде из расчета 1 ч. 25Хного спирта и 4 ч. дистиллированной

I воды в течение 1 ч. Затем срезы промывают в дистиллированной. воде в течение 12 ч.

Обезвоживание в спиртах, карболксилоле, .ксилоле,заключение в бальзам по общепринятой методике.

П р.и м е р 4. Выявление внутриорганных сосудов микроциркуляторного русла в коже.

Подлежащие гистологической обработке кусочки кожй с целью выявления микрососудов фиксируют в течение 25 дн. в 10Х-ном растворе формалина с рН 6,3-6,5. После фиксации, кусочки кожи промывают сначала в водопроводной, ° а затем в дистиллированной воде в течение 3-4 ч. Приготовленные на замораживающем микротоме гистологические срезы кожи в количестве 10-15 помещают на 12 мин в 5Х-ный раствор диметилсульфоксида, приготовленного на дистилли-, рованной воде. Из диметилсульфоксида срезы, предварительно осушив фильтровальной бумагой, переносят на 30 мин. в 10Х-ный раствор азотно-кислого серебра. После азотно-кис5 лого серебра срезы проводят через ряд ванночек с 2Х-ным раствором кислого формалина, приготовленного из свежей водопроводной и дистиллированной воды в соотношении 1:1.3а1О тем срезы переносят на 1-2 мин в раствор аммиачного серебра., Из аммиачного серебра срезы помещают в 1Х-ный раствор нейтрального. формалина, приготовленно1 го на водопроводной воде комнатной температуры до приобретения ими соломенного оттенка. Фиксация срезов осуществляется в аммиачной воде иэ расчета f ч. 25Х-ного

2О аммиачного спирта и 4 ч. дистиллированной воды в течение 1 ч. Затем срезы промывают в дистиллированной воде в течение 12 ч. Обезвоживание в.спиртах, карболксилоле, 2 ксилоле, заключение в бальзам по общепринятой методике.

Полезность и эффективность предлагаемого способа эакл1очается в количестве выявляемых нервных и сосудистых структур на единицу площади среза, экономии азотно-кислого серебра. Впервые предлагаемым способом можно выявить интреорганные компоненты нервных

35 структур и сосудов микроциркуляторного русла в различных по своей морфологической природе органах и тканях.