Способ качественного определения 4-оксикумарина
СПОСОБ КАЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ 4-ОКСИКУМАРИНА путем растворения анализируемой пробы с последующей и индикацией в УФ-области, отличающийся тем, что, с целью повьшения селективности и чувствительности определения и сокращения его продолжительности, растворение проводят в смеси этилового спирта и этиленгликоля при их объемном соотношении 1:2-3 соответственно, полученньм раствор обрабатьшают Лоследовательно 40%-ным раствором формальдегида и 65%-ной азотной кислотой и индикацию проводят по флуоресценции (Л полученного раствора.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (51)4 G 01 N 21/64
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ, с лг
Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
4М
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3774630/23-04 (22) 04.06.84 (46) 30.09.85. Бюл. У 36 (72) О.А. Григорьев, А.А. Хабаров и С.Н. Кобелев (71) Курский государственный медицинский институт (53) 543.42.062(088.8) (56) Георгиевский В.П. и др. физикохимические методы анализа биологически активных соединений растительного происхождения. — Ашхабад: Ылым, 1976, с. 45.
Там же, с. 139-144.
„,Я0„„1182 48 А (54) (57) СПОСОБ КАЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ 4-ОКСИКУМАРИНА путем растворения анализируемой пробы с последующей
r индикацией в Уф-области, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повьппения селективности и чувствительности определения и сокращения его продолжительности, растворение проводят в смеси этилового спирта и этиленгликоля при их объемном соотношении 1:2-3 соответственно, полученный раствор обрабатывают Последовательно 40Х-ным раствором формальдегида и 657.-ной азотной кислотой и индикацию проводят по флуоресценции полученного раствора.
1182348
Т а б л и ц а 1
Ярко-голубая
10-20
20-25
Диметилформамид
Ярко-голубая
Диоксан
Бледно-голубая
25-30
30-40
30-40
35-45
35-40
Бутиловый спирт
Изобутиловый спирт
Изоамиловый спирт
Иетиловый спирт
Ярко-фиолетовая
Этиловый спирт
Флуоресценции нет
Уксусная кислота
Уксусный ангидрид
Ксилол
Изобретение относится к фармацев тической химии и аналитической химии пестицидов, а именно к способам определения 4-оксикумарина, и может быть применено для качественного обнаружения этого соединения как в чистом виде, так и в виде. примеси в различном материале при фармацевтических, токсикологических и санитарных исследованиях. 1О
Целью изобретения является повышение селективности и чувствительности определения и сокращение его продолжительности путем применения флуоресцентной реакции. 15
Пример 1. Качественное определение 4-оксикумарина в субстанции. . К 1-2 мг исследуемого порошковидного образца прибавляют 2 мл этилового спирта, взбалтывают до растворения 20 препарата и прибавляют 3 мл 407.-ного формальдегида (формалина) и 0.,1 мл концентрированной азотной кислоты.
В ультрафиолетовом свете со светофильтром УФС-3 или УФС-6 наблюдают 25 яркую фиолетовую флуоресценцию.
Пример 2. Обнаружение примеси 4-оксикумарина в лекарственных препаратах и пестицидах кумаринового ряда. 30
5-10 мг исследуемого образца растворяют в 2 мл этилового спирта и прибавляют 4 мл этиленгликоля, пере мешивают. К полученному раствору прибавляют 3 мл 407.-ного формальдегида (формалина) и 0,1 мл концентрированной азотной кислоты. Если в ультрафиолетовом свете со светофильтром
УФС-3 или УФС-Ь наблюдается фиолетовая флуоресценция, то это свидетельствует о наличии в образце примеси
4-оксикумарина.
Подобной реакции не дают и не мешают определению другие органические и неорганические соединения, а также органические соединения, близкие по структуре к 4-оксикумарину: кумарин, 7-оксикумарин, 6-метилкумарин, герниарин, зоокумарин, фепромарон, неодикумарин, синкумар, псорален, ксантотоксин, ксантотоксол, бергаптен, келлин, салициловая кислота, бензойная кислота и пр.
Данные по влиянию различных растворителей на длительность и характер флуоресценции 4-оксикумарина (С =
25 мкг/мл) после обработки 40Хным раствором формальдегида и концентрированной азотной кислотой представлены в табл.1.
1182348
Лрдолжение табл.!
Гексан
Глицерин
Этилацетат
Ацетон
Слабо-фиолетовая
15-20
30-35
10-15
Этиленгликоль
Та блица 3
Количество
96,6Х-ного этилового спирта, мл
Длительность флуоресценции, с
Количество этиленгликоля мл
50-60
Таблица 2
50-60.60-65
70-80
Концентрация этилового спирта, Х
85-95
40
30
45
60
70
55-65
60-70
60-7.0
96,6
Влияние концентрации этилового спирта и соотношения этилового спирта (96,6Х) и этиленгликоля на длительность флуоресценции 4-оксикумарина (С = 25 мкг/мл) после обработки
40Х вЂ” ным раствором формальдегида и концентрированной азотной кислотой представлено в табл.2 и 3.
Длительность флуоресценцииу с 35
45-50
45-50
45-50
50-60
50-60
55-60
55-.60
105-115
100-105
80-90
60-65
В табл. 4 представлено влияние концентрации формальдегида на длительность флуоресценции 4-оксикумарина (С = 25 мкг/мл) в среде этилового спирта и этиленгликоля (.1:2) после обработки формальдегидом и концентрированной азотной кислотой.
В качестве оптимальной выбрана
40Х-ная концентрация, что соответствует процентной концентрации формалина.
1182348
Т а блица 4
Продолжение табл.5
Концентрация формальдегида, %
Длительность флуоресценции, с 5
100-110
90-95
80-85
30
Ц Влияние концентрации азотной кислоты (объем 0 1 мл) на длительность флуоресценции 4-оксикумарина (С =
= 25 мкг/мл) после обработки 40%-ным раствором формальдегида и азотной
20 кислотой представлено в табл. 6.
В качестве оптимальной концентрации азотной кислоты выбрана 65%-ная кислота.
20
Флуоресценции нет
25
Концентрация азот ной кислоты, %
Длительность флуоресценции, с
Таблица 5
Длительность З5 флуоресценции, с
Количество ,смеси растворителей, мл
Количество
40%-ного формальдегида, мл
30
70-75
60-70
5, 45 Влияние запредельных количеств и концентраций реактивов (в сторону увеличения и уменьшения) на флуоресценцию 4-оксикумарина (С = 25 мкг/мл) после обработки 40%-ным формальде50 гидом и азотной кислотой представлено в табл.7. При изменении параметров методики определения снижается длительность флуоресценции, что затрудняет анализ.
90-95
105-1 15
105-115
100-105
100-105
80-90
60-65
10-15
Влияние соотношения количеств смеси растворителей (этанол-этиленгликоль, 1:2) и 40%-ного формальдегида на длительностЬ флуоресценции
4-оксикумарина (С = 25 мкг/мл) после обработки 40%-ным раствором формальдегида и концентрированной азотной кислотой представлено в табл.5.
60-70
75-85
80-90
80-90
100-115
100-105
90-95
85-90
1182348
Таблица 7
Длительность флуоресценции, с
Количество. азотной
Концентрация азотной кислоты, Х
Количество формальдегида, мл
Концентрация формальдегида, X кислоты, мл
40
65
65.30
30
5-10
65
50
0,5
40
40
0,5
40
Продолжение табл 8
Существенные операции
Снятие спектра
Нет
Предлагаемый способ 45
Известный способ
Наблюдение в УФ-свете флуоресценции
Взятие наНет вески препарата
Нет
Растворение препарата
Добавление реактивов
Нет
В табл. 8 представлены сравнительные данные по продолжительности определения 4-оксикумарина известным и у предлагаемым способами.
Таблица 8
Необходимое время, мин
20-25
10-15
10-15
5-10
10-15
20-30
25-35
15-20
10-15
Итого 40 8
Данные об органических соединениях, сходных по строению с 4-оксикумарином, но не дающие подобной реакции и не мешающие определению, представлены в табл.9.
10.1182348
Т а б л и ц а 9
Производные
4-оксикумарина
Кумарины
Фурано- и пиранокумарины
Прочие соединения и группы соединений
Кумарин
Псорален
Зоокумарин
Келлин
7-Оксикумарин
Фепромарон
Салициловая кислота
Ксантотоксин
6-Метилкумарин
Неодикумарин
Синкумар
Метилсалицилат
Ксантотоксол
Бензойная кислота
Бергаптен
Императорин
Герниарин
Ацетилсалициловая кислота
Виснадин
Сульфаниламиды
Барбитураты
Карбокромен
Пеуценидин
Дигидросамидин
Сфондин
Витамины
Алкалоиды
Флавоноиды
Изопимпинелин
Составитель В. Шкилькова
Редактор А. Лежнина Техред А.Бабинец Корректор M. Демчик
Заказ 6095/39
Тираж 896 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035,, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5
Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Таким образом, предлагаемый способ по сравнению с известньы являет- ся более селективным, чувствительным (чувствительность известного способа
10 r, а предлагаемого 0,1 мкг/мл) и значительно менее продолжительным.
Он может использоваться в фармацев- 4
Ф тических и контрольно-аналитических лабораториях для качественного определения 4-оксикумарина в субстанции и примеси его в лекарственных препаратах прОизводных этОГО сОединения 4 (согласно требованиям технической документации), в центральных заводских лабораториях для контроля производства данных препаратов, в сельскохозяйственной химии для определения 4-оксикумарина в ратицидных приманках (зоокумарине) и в санитарно-гигиенических исследованиях для обнаружения следов 4-оксикумарина в воздухе производственных помещений, сельскохозяйственных продуктах, почве и организме отравленных животных.
