Способ определения концентрации лактата

 

Изобретение относится к исследованию материалов при помощи электрических средств. Способ основан на .электролизе исследуемого раствора, в который введен медиатор, при 20- 25 С с введенным в него цитохромом В, в фосфатном буферном растворе рН которого 7,0(-7,5. С целью увеличения чувствительности способа электролиз проводят в присутствии лактатдегидрогеназы и восстановленного никотинамидадениндинуклеотида в концентрациях , соответствующих предельному току . Это приводит к циклическому превращению лактата в биоферментной системе при участии медиатора, что приводит к увеличению тока ферментного электрода и соответственно к увеличению чувствительности способа. I табл. с о (П

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЯ 1АЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУ БЛИН

„„SU„„1242 (51) 4 G 01 N 27/30, 27/46

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМЮ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3727803/24-25 (22) 29 ° 02 ° 84 (46) 07.07.86. Бюл. № 25 (71) Институт биохимии АН ЛитССР (72) Ю. Ю. Кулис и P. А. Виджюнайте (53) 543.257(088.8) (56) Methods of Enzymatic Апа1унез, ed by Н. U. Bergmeyer assisted by.

К. Gawehn, Academic Press. Inc. New

7ог1с, London, 1974, v 3, р. 1483-1489

Патент США ¹ 4129479, кл. G 01 N 27/46, опублик. 1981. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ

ЛАКТАТА (57) Изобретение относится к исследованию материалов при помощи электрических средств ° Способ основан на.электролизе исследуемого раствора, в который введен медиатор, при 2025 С с введенным в него цитохромом В, с в фосфатном буферном растворе рН которого 7,0 7,5. С целью увеличения чувствительности способа электролиз проводят в присутствии лактатдегидрогеназы и восстановленного никотинамидадениндинуклеотица в концентрациях, соответствующих предельному току. Это приводит к циклическому превращению лактата в биоферментной системе при участии медиатора, что приводит к увеличению тока ферментного электрода и соответственно к увеличению чувствительности способа.

1 табл.

1242803

1<онцентрация

НАДИ, мМ

Величина тока нА

0,25

13,5

0,5

16,1

17,6

0,75

18,0

2,0

5 93

ЛДГ

Фоpìónàиэîбpетения

Пример 1. Электролиэ исследуемого раствор« проводят в присутствии цитохрома В, концентрация которого 60 ед/мл, НАД зависимой лакСоставитель И. Рогаль

Х едактор А. Шишкина Техред И.Яонкало 1 ор1.ектор М. Шароши

".-.аказ 369:/40 Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб, p. 4/5

Гроизводственно-полиграфическое предприятие, -,, Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к области исследования материалов с помощью электрических средств путем измерения тока ферментных реакций при злект ролизе и может быть использовано при определении концентрации лактата в крови„ микробиологических и биологических растворах.

Цель изобретения — увеличение чувствительности способа определения концентрации латката.

Эти превращения иллюстрируются следующей схемой: цитохром В

Jt + Fe — —.— 3- l1 Ре

П + НАДН Л + НАД электрохимически

Q .. 3 .

Fe — e — - Fe где Л -- лактат; П вЂ” пируват; ЛДГ—

НАД зависимая лактатдегидрогенаэа.

Для осущес"â.ëåíèÿ способа применяют ферментный электрод, анод которого изготовляют из стеклоуглерода с нанесенным на него цитохромом ф ф, и лак гатдегидрогеназой, покрытый диалиэной мембраной, а катод — из с „:-зебра, покрытого AgC3.. татдегидрогенаэы, концентрация которой 60 ед/мч, 5 АМ лактата в 0,1 М фосфатном бункере, Олрецеление зависимости величины тока от концентрации НАДН вецут при рН 7,5, 7=25 С, ОБ относительно Ад/АРС1, Зависимость величины тока от концентрации НАНН приведена в таблице.

Иэ таблицы видно, что наибольшая

15 величина тока (предельный1, т.е.

18 нА, наблюдается при концентрации

1 мМ, а при дальнейшем увеличении концентрации НАДИ величина тока снижается„

Предлагаемое изобретение позволяет увеличить чувствительность определения лактата и снизить его предел обн«ружения.

Спссб опрецеле ия концентрации лактата включающий злектролиз исслецуемсго раствора при 20-25 С с

30 введением в него цитохромом В в фосфатном буферном растворе рН 7,07„5, содержащем меди«тор, измерение тока„ по ксторому определяют концентрацию лактата, о т л и ч а ю— шийся тем, -- то, с целью увеличения чувствительности способа, электролиэ проводят в присутствии лактатдсгидрогенаэы, взятой в количестве 10-120 ед/мл, и восстановленного никотинамидадениндинуклеотида

4О в концентрации 0,5-1,0 мМ с последующим измерением тока относительно

Ад/Я.С1 электрода„