Способ определения гемагглютининов

 

СОЮЗ ССВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5D 4 А 6) К 39/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3798318/28-14 (22) 09.10.84 (46) 07.09.86. Бюл. ¹ 33 (72) А.А.Иванов и М.И.Бойко (53) 615.373(088.8) (56) Лабораторные методы исследования в неинфекци=;:пой иммунологии. M.: Медицина, 1967.

„„SU„„1255138 А 1 (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕММАГГЛ10ТИНИНОВ путем разведения исследуемой сыворотки в растворе натриевой соли с последующим добавлением эритроцитов барана и определением титра геммагглютининов, о 1 л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощения способа, сыворотку разводят в изотоническом растворе лимонно-кислого натрия.

12551

Составитель Г. Крюкова

Техред Л.Сердюкова Корректор А,Зимокосов

Редактор С. Патрушева

Заказ 4738/4

Тираж 660 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к биологии и медицине, конкретно к способам определения антител-геммагглютининов, широко применяемым иммунологами как в экспериментальной работе,так ч в кими- 5 ческой практике. Опреление антител-геммагглютинов в сыворотке крови людей и экспериментальных животных является широко распространенным диагностическим приемом. Определение уровня гете- «0 рофильных антител к эритроцитам барана рекомендовано ВОЗ в качестве одного из тестов оценки активности B-клеток системы иммунитета. Кроме того, этот показатель является диагности- «З ческим при инфекционном мононуклеозе.

Цель изобретения — повышение чувствительности и упрощение способа.

Пример 1. В ряд лунок микротитратора вносят по 0,05 мл изотонич- 20 ного раствора лимонно-кислого натрия (5 -ный раствор лимонно-кислого трехзамещенного натрия). Затем в первую лунку вносят петлей микротитратора

0,05 мл исследуемой неинактивированной сыворотки и переносят по 0,05 мл смеси сыворотки с изотоничным раствором из каждой предыдущей лунки в последующую, чем достигается ряд двукратных разведений сыворотки. В контроль- 30 ный ряд лунок заливают только изотоничный раствор лимонно-кислого натрия.

Затем во все лунки вносят по 0,025 мл

2 .-ной взвеси эритроцитов барана, отмытых троекратно физиологическим рас- З5 твором хлористого натрия, Инкубацию проводят 1 ч при 37 С и 18 ч при 4 С.

Учет осуществляют визуально. Титром геммагглютининов считают наибольшее разведение сыворотки при котором 40 еще обнаруживается агглютинирующий эффект.

П р и и е р 2. Морских свинок, самцов, массой тела 350-450 r иммунизируют внутрибрюшинно эритроцитами ба38 2 рана (l мл — 50 суспензии). На 7 и

14 сут после иммунизации от животных получают кровь, в сыворотке которой определяют уровень антител — геммаг-. глютининов и для сравнения путем постановки в растворе хлористого натрия. На 7 сут уровень антител (log .2 итра) составил в 5Х-ном лимонно-кислом натрии 8,6+0,53, а в 0,85 -ном хлористом натрии — 7,8+0,66. На 14 сут после иммунизации уровни антител составили в 5Х-ном лимонно-кислом натрии 10+0,72, а в 0,85 .-ном хлористом натрии — 8+0,71. При этом в обоих случаях при сравнении в попарносвязанных вариантах достигнуто повышение чувствительности, выразившееся в увеличении титра антител на 7 сут в

2+0,39 раза, на 14 — 4,3+1,06 раза.

Пример 3. Золотистых хомячков, самок, массой тела 100-120 г иммунизируют внутрибрюшинно эритроцитами барана (0,2 мл — 50 суспензии). На 7 и 14 сут после иммунизации от животных получают кровь, в сыворотке которой определяют уровень антител-геммагглютининов и для сравнения путем постановки в растворе хлористого натрия. На 7 сутки после иммунизации уровень антител (log титра) составил в 5Х-ном лимонно-кислом натрии 10,6+0,3, а в 0,85Х-ном хлористом натрии — 9,4+0,18. На 14 сут после иммунизации уровень антител в

5 -ном лимонно-кислом натрии составил 8,3+0,53, а в 0,85Х-ном хлористом натрии 6,7+0,36. При этом в обоих случаях достигнуто повышение чувствительности способа обнаружения антител: на 7 сут в 2,5+0,18 раза, на

14 — в 3,8+1,24 раза.

Таким образом, предложенный способ позволяет повысить чувствительность способа и упростить известный способ, поскольку исключает ряд операций.