Способ получения 7-замещенных 9 @ -метоксимитозана

 

2 А3

„SU„„1 (5в 4 С 07 0 487/04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

81 4 н3 С=

N-H

ГОСХДа стВЕННЫй НОМИтЕт СССЕ

AO ДЕЛАЫ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТИРЫТИЙ (21) 3753304/23-04 ,(62) 3607001/23-04 (22) 21.06.84 (23) 03,06.83 (31) 385149 (32) 04.06.82 (33) US (46) 15.09.86. Бюл. У 34 (71) Рристоль-Иейерз Компани (US) (72) Долатрай Иоханлал Виас (СА), Таку: си Канеко (3P) и Терренс Вильям Дойле (СА) (53) 547.759.3.07(088.8} (56) Р, Amer. Chem. Soc., 84, 3185-87 (1962) . (54) (57) 1, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 7-ЗИП,»

ЩЕННЫХ 9ö -ИЕТОКСИИИТОЗАНА общей формулы 1..

О

О ll сн ос w., СН

СН

3 где А - группа общей формулы. где R - водород или К(СИ )

К водород, СНъ или 1 руины общих формул

N-(. Hg ц си

8-; g

1 д, СН, R - метил или.R вместе с Rз и атомом азота, к которому оии присоединены, образуют пирролидин или пилеридкн, о т л и ч а ю щ к и с я тем, что на раствор метомицина С в органическом растворителе, таком как диметнлформамид, действуют 1,0-1,5 молярньви количеством гидрида натрия с последующей обработкой образовавщейся аннонной формы метомицина С злектрофильным реагентом, выбранньм из иминозфира, галометиленимииийгалогеиида или имнногалогенидной соли

258327 2

Полученный чистый раствор обозначают раствором А.

В. Раствор 1 ммоль митомицина С в 5 мл ДМФ добавляют к суспенэии

5 1,5 ммоль гидрида натрия в 3 мл ДМФ.

Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 20 мин и охлаждают дс {-40)-(-50) С перед добавлением вышеприготовленного раствора А, о

Раствор выдерживают при -40 С в течение 1 ч, затем ему дают нагреться до комнатной температуры, после чего а течение -6-18 ч разводят хлористым метиленом и фильтруют. Твердый остаток, полученный после выпаривания фильтрата, хроматографируют на силикагеле с выделением амидино-защищенного соединения, -укаэанного в названии примера.

С. Амидино-защитную группу предыдущего промежуточного соединения удаляют с получением незамещенного амидинового соединения, укаэанного в названии примера.

Пример 2. сн,о -ън, СН3

Ф-H

А. К раствору 1 мИ изопропилформимидат гидрохлорида в 2 мп ДИФ мед35 ленио добавляют 21 мИ диизопронил зтнламина в атмосфере азота при 0 С. о

K полученному раствору при 0 С добав.ляют метилиодид, Полученный раствор

40 обозначают как раствор В.

В. Используя вместо раствора А раствор В, повторяют пример 1 В с получением соединения, указанного в названии примера.

Пример 3.

comH2

СН3

СН

-NH

50, ЯН

А. К раствору 1 мМ изопропилформимидат гидрохлорида в 2 мл диметилформамида (ДМФ) медленно добавляют

2,1мМдиизопропил этиламина при 0 Ñ 55 в атмосфере азота. К полученномураствору по каплям добавляют р -триметилсилилэтип хлорформат при 0 С, 1

Изобретение относится к получейию новых производных митозана, а именно

7-эамещенных 9Е-метоксимитозаиа об щей формулы, где А — группа формулы где К, — водород или -N(CH )

К вЂ” водород, СН> или группы общих формул

R> — метил или R вместе с К и атомом азота, к которому они присоединены, образуют пирролидин или пиперидин, обладающих противоопухоле-. вой активностью.

Целью изобретения является поиск новых соединений митомицинового ряда; обладающих высокой прот-. воопухолевой активностью, а также используемых в качестве промежуточных продуктов в синтезе других соединений, обладающих этой активностью.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример

ОИН вЂ” м

HNCH3 СН

ЗН

0,5 И раствор И,N-диметилхлорметилениминий хлорида получают путем добавления по каплям 1,57 r оксалилхлорида (12,5 ммоль) при 0 С к раствору 915 мг (12,5 ммоль) ДМФ в 25 мл хлороформа и перемешивают 30 мйн

;-осокин

ОСИ

ЗН

3 при комнатной температуре. Отдельно раствор 334 мг (1 ммоль) митомицина

С в 5мл ДМФ добавляют к суспензии

36 мг (1,5 ммоль) гидрида натрия в

3 мл ДИФ. Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение

20 мин и охлаждают до (-40)-(-50) С., после чего добавляют описанньй раствор И,N-диметилхлорметилениминий хлорида (3 мл, 1,5 ммоль). После

10 мин перемешивания при -40 С к раствору добавляют 18 мг (О, 75 ммоль) гидрида натрия. Раствор выдерживают о при -40 С в течение 1 ч и затем разводят хлористым метиленом и фильтру-. ют. Остаток, полученный после выпаривания фильтрата, подвергают тонкослойной хроматографии на силикагеле (10% СН 0Н в СН Cl в качестве элюента).

Экстракция основной зеленой полосы дает 78 мг (43X по отношению к возвращенному митомицину С) аморфного твердого вещества. Зкстракция фиолетовой полосы дает 150 мг митомицина С.

It р и м е р 4. 7(1-Метил-2-(Н)-пиридинилиден)-амино-90-метоксимитоэан

1 0 roc0%H2 осн, ЛН

1258327 4

Пример 5. 7-((Метиламинометиле) -амин о1 -9a -мето кс ймито э ан

12 мг (0,5 ммоль) гидрида натрия в атмосфере азота добавляют к раствору 167 мг (0,5 ммоль) митомицина С в 2 мл гексаметилфосфорамида..К раствору добавляют 19 мг (0,25 ммоль)

К-метилформимидоил хловида, перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин и затем добавляют

6 мг (0,25 ммоль) гидрида натрия и

9,5 мг (О, 13 ммоль) И-метилформамидоил хлорида. После 6-12 ч неремешивания раствор разводят этилацетатом и фильтруют. Выпаривание растворителя с последующей хроматографической очисткой остатка дает соединение, указанное в названии примера.

П р и и е р 6. 7- j(1-Пирролидииилметилен)-амино -9ц-метоксимнтоэан

0, 0 4

Н гЗ Осн

К смеси 242 мг (0,725 ммоль) митоиицииа С и 43,5 мг (1,81 ммоль) 40 гидркда натрия добавляют 4 мл ДМФ, После 15 мин перемешивания при ком ; иатиой температуре добавляют.370 мг (1,45 ммоль) 2-хлор-1-метилпиридиний иодида. Раствор перемешивают 1,5 ч, 45 разводят этилацетатом (ft ОАс) и фильтруют. Остаток, полученный после выпаривания фильтрата, хроматографируют ТСХ на силикагеле, используя

5%-ный метанол в хлористом метилене 50 в качестве злюента. Второстепенный продукт (12 мг) представляет собой соединение XIX. Основной продукт (75 мг) очищает TCX на силикагеле, используя .10Х-ный метанол в хлорис- 55 том метилене, с получением 6 мг (2X) соединения, указанного в названии примера.

0,5 M раствор пирролидинил хлорметилениминий хлорида получают добавлением по каплям 3,17 г (25 ммоль оксалилхлорида при 0 C к раствору о

2,48 г (25 ммоль) 1-формилпирролидена в 50 мл хлороформа с последующим перемешиванием при комнатной темпера туре в течение 30 мин. Отдельно к раствору 334 мг (1 ммоль) митомицина .С в 3 мл 1-формилпирролидена в атмосфере азота добавляют 24 мг (1 ммоль) гидрида натрия. После

20 мин перемешивания при комнатной температуре раствор охлаждают до

"(-40)-(-50) С и добавляют 1 мл (0,5 ммоль) полученного выше раствора иминиевой соли. У этой смеси до" бавляют по очереди с интервалами по

10 мин каждый 12 иг (0,5 ммоль) гидрида натрия, 0,5 мл (0,25 ммоль) раствора иминиевой соли, 6 мг (0,25 ммоль) гидрида натрия, 0,25 мл

S 1258327 б (0,125 ммоль) раствора иминиевой со". алюминием. Колонку элюируют сначала ли, 3 мг (О, 125 ммоль) гидрида нат- хлористым метиленом, а затем рия н О, 125 мл (0,063 ммоль) раство- 2%-ным (об/об) метанолом в хлористом ра иминиевой соли. После 30 мин метилене. Получают зеленую фракцию, о перемешивания при -30 С смесь нагре- состоящую из целевого продукта, ковают до комнатной температуры. Затем торый далее очищают хроматографией ее разводят этилацетатом и неоргани- на алюмичин с использованием хлорисческую соль отфильтровывают. Остаток, того метилена, содержащего 10Х полученный после выпаривания раство- (об/об) метанола, выход 20 мг (5Х), рителя, хроматографируют с помощью rÎ Найдено, Х С 52,68; Н 6,21; тонкослойной хроматографии на силика- И 18, 15 геле, используя 10%-ный метанол в С о Н7 1 .О, 1-1 /4 Е О хлористом метилене. Экстракция зеле- Вычислено, Х: С 53,03; Н 6,34; ной полосы дает 120 мг (15% выход) И 18 55 соединения, указанного в названии 15 П р и и е р 9. 7- ((1,3-Диметил-. примера. тетрагидропиримидинилиден)) -аминоИ р и и е р 7 ° 7-|,N-Метил->""(«- -9д-метоксимитоэан тиламино)-метил) -амино-94-метоксимитозан

О осин, Жн, О

Н Н2 ОС Н осн, 25

Щ

:.ИН осин

OCHg

МЯ

Повторяют пример 5, заменяя митомиции С 9g-метокси-7-(Н-метиламнно) митозаном в том же молекулярном коли-Зч честве.

Пример 8, 7-(1,3-Диметил-2-имидаэолинижщен)-9rr,-метоксимитозан

0,34 r (1 ммоль) митомицина С растворяют в 5 мл 1 3-диметил-2У

-имидазолидона и к раствору добавляют О, 1 г гидрида натрия (50% в масле, 2,08 ммоль) при комнатной температуре. Смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 20 мин и затем

5Î охлаждают на ледяной солевой ванне о до -15 С. При этой температуре смесь выдерживают 10 мин, а затеи к ней добавляют 0,65 г (2 ммоль) 2-хлор 1,3-диметил-4,5-дигидро-(3Н)-имидаэолиминий хлорида. После этого смесь снова выдерживают при -15 С в течео ние 1 ч и затем разводят этилацетатом.и хроматографируют на колонке с

1идрид натрия {50%-ная дисперсия в масле) в количестве 200 мг (4,2 ммоль) добавляют в атмосфере азота к раствору 680 мг (2 ммоль) митомицина в 8 ма 1,3-диметил-3,4,.

5,6-тетрагидро (1Н, ЗН)-2-ниримиди . иана. Смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 20 мин и охлаждают до -25 С. Затем к ней доо бавляют 0,73 г {4 ммоль) 2-хлор-1,3-gaxemn-2, 3, 4, 5-т етрагидропиримидиний хлорида после чего смесь вь1пер« о живаят при -25 С в течение 3 ч. 3атем ее разводят этилацетатом и 2 мл метанола и без дальнейшей обработки наносят на хроиатографическую колонку с сухим алюминием и элюируют сначала хлористым метиленом, а затем2Х-ной (об/об) смесью метанол/хлористый метилен с получением целевого продукта 0,35 r (39,5%) т. mr.

138-140 С.

Найдено, Х: С 54,78; Н 6, 18;

Я 18,21

С Н ИО НО

Вычислено, Х: С 54,65; Н 6,33;

Я 1821

Пример 10. 7-(Тетраметилдиаминометилен)-амино-96-метоксимитозан

1258327 8

425 мг (1,42 ммоль) митомицина С перемешивают с 503-ной дисперсией в масле гидркда натрия (85,3 мг) и к смеси добавляют 4 мл диметилформамида, перемешивают при комнатной температуре в атмосфере аргона-в течение

10 мюн и затем охлаждают до -35 С.

Добавляют 289 мг (2,13 ммоль) тетраметилхлорформамидиний хлорида и оставляют нагреваться до 5 С в течение

2 ч. Затем к смеси добавляют наколотый сухой лед для остановки реакции и растворитель отгоняют при пониженном давлении. Остаток хроматографируют на колонке с алюминием (100 г), используя 3Х-ный (об/об) метанол в хлористом метилене и качестве элюента. Это вещество далее очищает

TCX на алюминии (5Х-ный (об/об) метанол в хлористом метилене) с получением двух Фракций весом 17 мг и

76 мг. Вторую фракцию кристаллизуют из смеси ацетон - эфир с получением целевого продукта, т.пл. 193-195 С, выход 12Х.

Найдено, Х: С 54,92; Н 6,53;

Я 19,29

Сто Нтз, Иь 0

Вычислено, Х: С 55,54; Н 6,53;

N 19,43

Пример 11. 7-(1«Пиперидинилметилен)-амико-9ц-метоксимитозан

45 о .сн осюн, 0СН, I I

СН Ж NH

0,5 И раствор пиперидинилхлормети лениминий хлорида получают путемдобавления по каплям 380 мг (3 ммоль оксалилхлоркда н 6 мл хлороформа, содержащего 0,34 г (3 ммоль) 1-формилпиперидина. Отдельно к раствору

334 мг (1 ммоль) митомицина С в 3 ил

1-формилпиперидина в атмосфере азота добавляют гндрид натрия (50K-ная дисперсия в масле) в количестве

96 мг (2 ммоль). После 15 мин переме мышей весом 20 г каждая, а потерю веса до 2 г не считали черезмерной, 50

Результаты выражали. s процентах от-, ) ношения T/C (treated control),, которое представляет собой отношение времени выживания группы, обработанной препаратом, ко времени вьзкивания контрольной группы, обработанной физиологическим раствором, которое быто принято эа 100Х. Животные, коч горым вводили физиологический раствор, обычно погибали не позднее 9(СН )ф о г0СОЪН С=Я

I (СНт)К осн

СН ь ЯН шивания при комнатной температуре раствор охлаждают до -25 С к добавляют 4 мл (2 ммоль) раствора имннкевой соли, приготовленного, как описано выше. Реакционную смесь выдержко вают при -25 С в течение 1 ч и затем охлаждают добавлением сухого льда.

После добавления метанола (1 мп) полученную смесь абсорбируют нейтральнььт алюминием, который затем наносят на колонку с алюминием (30 г). Колонку элюируют сначала хлористым метиле« ном, а затем — ЗХ-ным (об/об) метано" лом в хлористом метилене с получением

360 мг (84X) соединения, укаэанном о з названии примера, т.пл. 68-70 С.

Найдено, Х: С 55,57; Н 6,21

N 15,91

С„Н, Н,О,. 1-1/4 Н,О

Вычислено, Х: С 55,80; Н 6,58;

К 15,49

Противоопухолевая активность по. отношению к Р-388 Инга Лейкемии.

В таблице представлены результаты

25 лабораторных исследований на CqF< мышах-самках, которым внутркбрюшкнно имплантировали опухолевый прививочный материал, содержащий 10 асцитных клеток P-388 curine лейкемии, и которым вводили различные дозы тестируемого соединения указанной формулы I или митомнцина С. Группа из шести мышей получала одну дозу сое динения в 1-й день после заражения.

В каждую серию экспериментов включали группу из 10 мышей, которым вво- дили физиологический раствор. Груп" пы, обработанные мктойицкком С; представляли собой положительный контроль. В каждой группе мышей в течение 30 дн отмечали время выживания в днях и регистрировали число выживших особей. Мышей взвешивалк перед введением препарата и повторно — на 6-й день. Изменение веса было принято в качестве меры токсич|ности. вещества. В эксперимент брали

Подавление Р-388 Nurine Лейкемии

Соединение Иаксимальный эффект, X

Иинимально эффективная доза

Среднее изменение веса мг/кг

150(144)

267(267)

206(263)

119(313) 6,4(4,8)

3,2(4,8)

3,2(4,8)

3,2(3,2) -1,6-2,3

-2,3-1,7

-1, 7-1, 7

+2, 2+2, 2

-2,8+О,б

43,2

3,2

331(319) 25, 6 (3, 2) П р и м е ч а н и е: Цифры в круглых скобках представляют собой значения, полученные при введении митомицина С в качестве положительного контроля.

9 12583 ro дня. Таким образом может быть вычислена относительная активность соединений по изобретению s сравнении . с митомицином С. Иинимальным эффектом считали 12Х Т/С. Иинимально эфпо примеру

Т/С Доза

Предлагаемые соединения исследовали на противоопухолевую активность, заражая мышей В 16 меланомой корич-. невой. Эксперименты проводилн на

DFf мьапах, которым внутрибрвшинно инокулировали опухолевый имплантант на протяжении 60 дн. Для каждой группы иэ 10 мышей определяли время выживания. У контрольных животных, 46 ииокулированных так же, как опытные животные и:инъецированные. растворителем беэ препарата, время выживания . составляло 21 дн. Для определения

45 максимально и минимально эффективных доз каждого соединения испольэовали соотношение Т/С (7). За минимально эффективную принимали такую дозу, которая вызывала 125Х Т/С эффект

Для каждой дозы опытным животным

50 внутрйбрюшинно вводили тестируемое соединение на 1,5 и 9-й день. Среднее изменение веса в день, отмечен ное при максимально и минимально эффективных дозах, испольэовалн в качестве меры токсичности. Потеря веса в 2 г для мыши весом 20 г не .считалась черезмерной.

27 10 фективной является доза, вызывающая минимальный эффект (125X Т/С). Кроме того, в таблице дано среднее значение веса на мышь при максималь-но и.минимально эффективных дозах.

Соединения по примерам 10 и 9 исследовали на противоонухолевую активность по отношению к В 16 Nuriae меланоме при подкожном введении опухолевого иналаитанта и внутривенном введении препарата. График введения препарата и время выживания (исследования проводилн 40 дн) определяли по известной методике. На

1Z-A день измеряли изменение веса.

Иаксимально эффективная доза соединения f мг/кг вызывала эффект 156Х (Т/С) и прирост веса 1,5 r. В группах по 6 животных при этой дозе выживали 3 мыши в течение всех 40дн.

Иннимально эффективная доза состави" ла 0,25 мг/кг, прн которой на 12-й день изменение веса равнялось 1,0 г, Для соединения примера 9 максимально эффективная доза составила 8 мг/кг при эффекте 177Х Т/С и изменении веса 0,6, минимально эффективная доза — 4 мг/кг при изменении веса 0,8.

В этом же эксперименте максимально эффективная доза митомицина С составляет 3 мг/кг при эффекте 195Х Т/С и изменении веса 0,5, минимально эфСоставитель И.Бочарова

Техред М.Ходанич Корректор. А.Обручар

Редактор М.Келемеш

Тирах 379 Подписное

ВНИИПИ Государственного коми ета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раужская наб., д. 4/5

Заказ 5043/60

Производственно-полиграфическое предприятие, r.Ухгород, ул.Проектная, 4

ll 12э8327 )2 фективную дозу митомицина С не опре- противоопуколеввю активность, выявделяли. ленную в экспериментах на хивотнык, Таким образом, данные подтверхда- а такхе понихенную токсичность в ют для полученных соединений высокую сравнении с митомицином С»