Способ оценки противоишемического действия биологически активных веществ

 

Изобретение относится к медицине , а именно к способу оценки противоишемического действия биологически активных веществ, и может быть использовано для определения механизмов действия кардиопротекторов. Целью изобретения является повьшение достоверности оценки. Сердце экспериментального животного подключают к специальному устройству для перфузии изолированного органа, вводят в коронарное русло исследуемое вещество, пережимают аорту для создания ишемии миокарда на заданный промежуток времени , производят восстановление сократительной активности миокарда при реперфузии и измерение его сократительной активности после ишемического повреждения по отнощенню к контролю , причем остановку сердца производят введением в коронарное русло 15-25 ммоль раствора калия. о (Л 00 о со :о ел У1

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН гг9г <г» с5гг 4 А 61 В 5 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3855105/28-14 (22) 04.02.85 (46) 15.05.87. Бюл. гФ 18 (71) Институт хирургии им.А.В.Вишневского и Научно-исследовательский институт по биологическим испытаниям химических соединений (72) N.P ° Мукумов, г0.С. Ляхович, С.А. Исаева, Е.А. Годин и В.Ф.Портной (53) 615.015(088.8) (56) Лапкина Т.И. и др. Эндогенный и экзогенный формальдегид при острой ишемии органов. — Бюлл. экспер.биологии и медицины, 1982, Ф 2, с.38-40. (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ПРОТИВОИШЕИИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ

ВЕЩЕСТВ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки противоишемического действия биологически активных веществ, и может быть использовано для определения механизмов действия кардиопротекторов. Целью изобретения является повышение достоверности оценки. Сердце экспериментального животного подключают к специальному устройству для перфузии изолированного органа, вводят в коронарное русло исследуемое вещество, пережимают аорту для создания ишемии миокарда на заданный промежуток времени, производят восстановление сократительной активности миокарда при реперфузии и измерение его сократительной активности после ишемического повреждения по отношению к контролю, причем остановку сердца производят введением в коронарное русло

15-25 ммоль раствора калия.

1 13099

Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки противоишемического действия биологически активных веществ, и может быть использовано для определения механизмов действия кардиопротекторов, оценки эффективности кардиоплегии.

Целью изобретения является повышение достоверности оценки.

Способ осуществляют следующим об- 19 разом.

Животному производят вскрытие грудной клетки, иссечение сердца из организма и подключения его к специальному устройству для перфузии изо- 15 лированного сердца. Далее вводят в коронарное русло исследуемое вещество, пережимают аорту для создания ишемии миокарда на заданный промежуток времени, производят восстановле- 20 ние сократительной активности миокарда при реперфузии и измерение его сократительной активности после ишемического повреждения по отношению к контролю, причем остановку сердца производят введением в коронарное русло 15-25 ммоль раствора калия, 1 после пережатия аорты кровь в полости левого желудочка заменяют обескислороженной жидкостью, затем из -30 сердца выделяют папиллярную мышцу или трабекулу, определяют максимальное изометрическое усилие, развиваемое ею при нескольких значениях частоты сокращений, и на основании рас- 35 чета сократительной активности миокарда усваивают ритм сокращений R, по формуле судят о противоишемическом действии биологически активного вещества „ и 40 ,7(1пА, — Q ) (Г; — Q — )

Б 1

=1 ;; п

;> (ХпА — )

11 1"- где А„ — максимальное изометрическое 45 усилие при частоте F;; — номер измерения;

n — количество измерений.

Кроме того, в качестве обескислороженной жидкости используют дезокси- 50 генированную кровь или высокомолекулярную жидкость, например вазелиновое масло.

Способ подтверждается следующими

:примерами. 55

Пример 1. Оценка противоишемического действия папаверина на миокард.

55 2

Производят декапитацию экспериментального животного, вскрывают грудную клетку, вводят в аорту канюлю и производят перфузию раствором Тироде в течение 5 мин при 36-37 С с парциальо ным давлением кислорода в растворе

600-700 мм рт.ст. при перфузионном давлении 65-70 мм рт.ст. Затем производят перфузию раствором Тироде с

20 мИ КС1 и 10 г/мл папаверина в о течение 5 мин при 36-37 С с парциальным давлением кислорода в растворе

600-700 мм рт.ст. при перфуэионном давлении 65-70 мм рт.ст. Затем в желудочек вводили 2 канюли и произво-дили замену оксигенированнога раствора внутри желудочка на неоксигенированный раствор Тироде с парциальным давлением кислорода 5-10 ммрт.ст.

После этого производили ишемическое повреждение миокарда в течение 30 мин.

Затем сердце помещали в раствор Тироде с парциальным давлением кислорода 600-700 мм рт.ст. при 28-29 С и вырезали папиллярную мышцу, которую закрепляли в установке, перфузируя ее аналогичным раствором.Мьппцу стимулировали: импульсами длительно— стью 5 мс с частотой 0 5 Гц и амплитудой в 1,5-2 раза вьппе пороговой (40 В). Б этом режиме мышцу адаптировали в течение 50-60 мин до установления стабильных сокращений, затем регистрировали максимальное изометрическое усилие. Далее частоту стимуляции меняли от 0,1 до 0,9 Гц с шагом 0,2 Гц, причем переход на новую частоту стимуляции производили после

1 установления стационарного уровня. сокращений. Затем рассчитывают коэффициент регрессии изометрического усилия по частоте по приведенной формуле, который является мерой сократительной активности препарата. Затем коэффициент регрессии R сравнивают с коэффициентом регрессии К„ без ишемии и без испытуемого биологически активного вещества и Р.о — с ишемией, но беэ испытуемого вещества, и по их соотношению определяют степень защиты миокарда испытуемым биологически активным веществом. Предварительно в серии контрольных экспериментов были определены значения R„ =

57 при ишемии, но без применения противоишемических биологически активных веществ, и Кн = 0,23, — беэ ишемии, а после действия папаверина

Составитель А. Лычкова

Техред А.Кравчук

Редактор А. Долинич

Корректор Л. Пилипенко

Заказ 1816/2 Тираж 596

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 13

R = 0,31. При определении их соотношения получили значение коэффициента

77Х. Это означает, что предваритель-; ная перфузия раствором папаверина (10 г/мл) с 20 м11 КС1 перед 30-минутной ишемией защищает миокард крысы на 77Х.

Пример 2 ° Оценка противоишемического действия раствора Тиро.де с 20 мМ КС1 на миокард крысы.

Выделение препарата и изменения проводились аналогично примеру 1.за исключением того, что до пережатия аорты в коронарное русло вводился раствор Тироде с 20 мМ КСl . По формуле было найдено R = 0,34 и при сравнении с контролем было получено, что кардиоплегия раствором Тироде с

20 мМ КС1 перед 30-минутной ишемией защищает миокард крысы на 68Х.

Пример 3. Оценка противоишемического действия дилтиазема.

Вьщеление препарата и измерения проводились аналогично примеру 1 эа исключением того, что до пережатия аорты в коронарное русло вводился раствор дилтиаэема в концентрации 5» х10 г/мл на фоне 20 мМ КСl. По результатам измерений был определен

R = 0,26, что при сравнении с контролем дало основание определить,что кардиоплегия раствором дилтиазема с

20 мМ КС1 перед 30-минутной ишемией защищает миокард крысы на 91Х.

Предложенный способ проверялся в 15 экспериментах на папиллярной

09955 4 мышце и трабекуле крыс. Среднеквадратичный разброс при оценке лекарственных препаратов по способу-прототипу составляет 12-26Х, а при использовании предлагаемого способа — 4-7Х что повышает достоверность результатов в 3 раза.

Формула изобретения

Способ оценки противоишемического действия биологически активных веществ путем определения сократительной активности сердца до и после пе15 режатйя аорты в интактном и предварительно обработанном биологически активным веществом сердце с последующим сопоставлением полученных результатов, отличающийся тем, что, с целью повышения достоверности оценки, перед пережатием аорты производят остановку сердца, а после пережатия заменяют кровь в полостях желудочков обескислороженной жид25 костью, после чего из сердца вьщеляют трабекулу или папиллярную мьппцу, стимулируют и определяют их максимальное изометрическое усилие, а противоишемическое действие биологичес30 ки активного вещества определяют путем сопоставления скорости изменения изометрического усилия в ответ на увеличение частоты стимуляции в трабекулах или папиллярных мьппцах,вьще35 ленных иэ интактного или предварительно обработанного биологически активным веществом сердца.