Способ определения активности 3-оксибутиратдегидрогеназы в биологических структурах

 

Способ позволяет повысить полноту определения активности 3-окси- ,бутиратдегидрогеназы в мембранах. Определяют рабочую концентрацию детергента лутем снятия кривой зависимости светопоглощення суспензии митохондрий от концентрации детергента и определения последней в точке перегиба кривой в области низких значений поглощения Выделенные митохондрии обрабатывают тритоном Х-100 в рабочей концентрации, составляющей 0,17- 0,23 ммоль, добавляют субстрат и оп - . ределяют продукты реакции, I З .п. ф-лы. i СЛ С со vj to ю

.СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

П11 4 С 12 И 9/02 списочник изовгкт ния

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

С:

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3579621/28-13 (22) 13.04.83 (46) 15.06.87. Бюл, У 22 (71) Всесоюзный научно-исследовательский и технологический институт птицеводства и Институт биохимии им. А.Н,Баха (72) А.Г.Бирюков В.И.Фисинин и К.Ф,Шольц (53) 577.15(088.8) „„SU„„1 17022 A i.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ .З-ОКСИБУТИРАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ.В БИОЛОГИЧЕСКИХ СТРУКТУРАХ (57) Способ позволяет повысить полноту определения активности 3-оксибутиратдегидрогеназы в мембранах. Определяют рабочую концентрацию детергента путем снятия кривой зависимости светопоглощения суспензии митохондрий от концентрации детергента и определения последней в точке перегиба кривой в области низких зиачений поглощения. Выделенные митохондрии обрабатывают тритоном Х-100 в рабочей концентрации, составляющей 0,170,23 ммоль, добавляют субстрат и он -, Ж ределяют продукты реакции, 1 з,п. ф-лы.

131

7022

Изобретение относится к биологической химии, в частности к исследованию и анализу липидзависимых ферментов, располагающихся в мембранах, Цель изобретения — повышение полноты выявления активности 3-оксибутиратдегидрогеназы в биологических структурах и упрощение анализа, Формула изобретения

Для определения рабочей концент" рации тритона Х-100 снимают кривую зависимости светопоглощения,суспензии митохондрий от концентраций детергента. Эта зависимость имеет точки перегиба в области высоких и низких значений поглощения, Концентрация детергента, соответствующая таСоставитель 1О,Кононенко

РедактоР И.СеглЯник ТехРед М.Ходанич КоРРектоР А.ОбРУчаР

Заказ 2394/23 Тираж 499 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений .и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5. Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул, Проектная, 4

Пример. Митохондрии, выделенные из печени крыс весом 250-300 г линии Вистар, в количестве 0,5 мг белка вносят в 3 мл среды, содержащей 25 ммоль трис-НС1 (рй 7,4), 2 ммоль НАД+, 1 мкмоль ротенона, До. бавляют тритон X-100 до рабочей концентрации, равной концентрации детергента в точке перехода мембран в ста- дию солюбилизации, перемешивают и выдерживают 10 мин, Затем растворили его часть доводят до объема 6 мл срецой указанного состава. г ковой s точке перегиба в области низких поглощений, является рабочей.

Реакцию начинают добавлением

20 ммоль 3-оксибутирата к 3 мл полу5 ченной смеси и через 2-10 мин фотометрируют при 340 нм против остальной части раствора, Способ позволяет повысить в 2 раза полноту определения 3-оксибутиратдегидрогеназы, 1, Способ определения активности

3-оксибутиратдегидрогеназы в биологических структурах, включающий выделение митохондрий, нарушение целостности мембран, добавление субстрата и определение продуктов реакции, о т л и ч а ю щ и и с. я тем, что, с целью повышения полноты выявления активности фермента и упрощения анализа, мембраны митохондрий обрабатывают раствором детергента в концентрации, равной концентрации его при переходе мембран в стадию солюбилизации.

2. Способ по п,1, о т л и ч а юшийся тем, что мембраны обрабатывают тритоном Х-100 в концентрации 0,17-0„23 ммоль.