Способ количественного определения иммунных комплексов в крови

Авторы патента:

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

Изобретение относится к иммунологии . Цель изобретения - повьппение точности. Определяют содержание иммунных комплексов в сьшоротке крови. Инкубируют исследуемую пробу с реагентом , содержащим субкомпонент комплемента Cj-. Отделяют связавшиеся комштемент и фиксирующие иммунные комплексы и определяют их количества. В исходной сьшоротке определяют уровень не фиксирующих комплемент иммунных комплексов и общий уровень иммунных комплексов. По их разнице делают вывод о содержании иммунных комплексов, фиксирующих комплемент. Способ позволяет определить действительный уровень циркулирующих иммунных комплексов в крови. . (

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„27005 д1 (51) 4 С 01 И 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ:.3,, гц

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3925669/28-14 (22) 10.07.85 (46) 30.07.87. Бюл. Р 28 (71) Всесоюзный кардиологический научный центр AMH СССР и Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии (72) С.Г. Осипов, В.Н. Титов, Г.И. Недугова и И.В. Рубцов (53) 615.373(088.8) (56) Патент США У 4138213, 1979. (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУННЫХ КОМПЛЕКСОВ В КРОВИ (57) Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения вЂ” повьппение

В точности. Определяют содержание иммунных комплексов в сыворотке крови.

Инкубируют исследуемую пробу с реагентом, содержащим субкомпонент комплемента C> . Отделяют связавшиеся комплемент и фиксирующие иммунные комплексы и определяют их количества. В исходной сыворотке определяют уровень не фиксирующих комплемент иммунных комплексов и общий уровень иммунных комплексов. По их разнице делают вывод о содержании иммунных комплексов, фиксирующих комплемент. Способ позволяет определить действительный уровень циркулирующих иммунных комплексов в крови.

1327005

?5 и

Изобретение относится к иммунологии, точнее к методам определения количества циркулирующих в крови иммунных комплексов (ЦНК).

Цель изобретения вЂ” повышение точности путем одновременного определения фиксирующих и не фиксирующих комплемент иммунных комплексов (ИК) в крови.

Способ осуществляется следующим образом.

Количественно определяют иммунные комплексы в сыворотке крови, включающие инкубацию исследуемой пробы с реагентом, содержащим субкомпонент комплемента С, отделяют связавшиеся комплемент фиксирующие иммунные комплексы и определяют их количества, причем исследуемую пробу инкубируют

С эритроцитами, обработанными глутаровым альдегидом и связанными с субкомплементом С, в сыворотке, полученной после отделения комплементфиксирующих иммунных комплексов, и в исходной сыворотке с помощью лазерной кефелометрии определяют соответственно уровень содержания не фиксирующих комплемент иммунных комплексов и общи" уровень содержания иммунных комплексов, по разности которых делают заклювЂ” чение о содержании иммунных комплекСов, фиксирующих комплемент.

Пример. Эритроциты человека

0(1) группы, Rh+, после тщательного отмывания (до 10 раз) в изотоническом растворе (0,9 ) хлорида натрия суспенэируют в 0,25Х-ном растворе глютаральдегида на том же иэотоническом растворе хлорида натрия, Суспензию инкубируют в течение 3 ч при

37 С и затем вновь отмывают в изотопическом растворе. К одному объему эритроцитов добавляют семь объемов

0,25Х-ного глютаральдегида и 0,01Хного азида натрия в изотоническом растворе. Эритроциты в таком раствоа ре хранятся в течение года при 4 С, Выделение С> проводили с помощью зффинной хроматографйи на иммуносорбенте из CNBr-активированной сефарозы 4В, к которой ковалентно присоединяли I G человека из расчета 30 мг на 1 мл сефарозы (2). На колонку с

5 мп сорбента, уравновешенную 0,01 М фосфатным буфером на О, 15 М хлорида натрия с 0,01 M ЭДТА, наносят 25 мл человеческой плазмы (порциями по 5мл) и элюируют тем же буфером со скоростью 80 мл/ч. Колонку с сорбентом промывают до полного исчезновения белка, после чего проводят элюцию 0,2 M гексаметилендиамином. Элюаты диализуют против 0,3 М хлорида натрия в течение 24 ч при 4ОС. В реакции двойной диффузии в агарозе с анти-С сыИ вороткой фракции исследуют на наличие С . Используемые условия позво19 ляют nonywHTh 1, 2 Mr белка С 1 c KOHцентрацией 200-300 мкг/мл. Полученный

С, хранили при -45 C.

Перед исследованием сывороток на наличие иммунных комплексов ex tempore проводят конъюгирование С с тест1с эритроцитами (э ритроциты, обработанные глютаральдегидом) . Для этого эритроциты тщательно отмывают в иэотоническом растворе и к одному объему осадка эритроцитов добавляют двадцать объемов раствора С (к 50 мкл

1 осадка добавляют 1 мл раствора С

0,2 мг/мл). Суспенэию тщательно встряхивают и инкубируют 2 ч при 37 С.После инкубации эритроциты отмывают от избытка С и к осадку эритроцитов, нагруженйых С,„ добавляю пять объемов исследуемой сыворотки пациента {50 мкм + 250 мкл сыворотки).

Сыворотку с конъюгатом С эритроцит инкубируют 30 мин при 37 С с периодическим потряхиванием каждые 57 ж н. После инкубации эритроциты осаждают центрифугированием (2500 об./мин) в течение 10 MHFI надосадочную сыворотку отбирают для определения уровня ЦИК, не связавшихся с С ° ° В

Ц( сыворотке, не инкубированной с конъюгатом С> -эритроцит, определяют уровень всех ЦИК, а в сыворотке, проинкубированной с конъюгатом, определяют уровень не фиксирующих комплемент

ЦИК.

Определение проводят следующим об- разом. К 25 мкл сыворотки добавляют

1 мл 3,57.-ного раствора полиэтиленгликоля (ММ 6000) на изотоническом растворе NaC1, смесь инкубируют при встряхивании в течение часа при комнатной температуре. В образцах измеряют степень светорассеяния на лазерном нефелометре "Behring Institute" (кюветы объемом 1 мл, Д = 638 нм).

Концентрацию ИК высчитывают по калибровочной кривой, полученной при измерении степени светорассеяния агрегированного т -глобулина вЂ” искусственного аналога ИК, 27005

Формула изобретения

Составитель В. Фролова

Техред И.Попович

Корректор Л.Патай

Редактор М. Петрова

Заказ 3382/40 Тираж 776

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 з 13

Применение нового реагента позволяет выделить ИК, фиксирующие комплемент, и обеспечить определение действительного уровня ЦИК (как фиксиру.ющих, так и не фиксирующих комплемент) .

Способ количественного определения иммунных комплексов в крови, включающий инкубацию исследуемой пробы с субкомпонентом комплемента С „, фиксированного на эритроцитах, и осаждение комплементфиксирующих иммунных комплексов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности путем одновременного определения фиксирукпщх и не фиксирующих компле5 мент иммунных комплексов дополниЭ тельно определяют содержание иммунных комплексов в сыворотке до инкубации с субкомпонентом комплемента С и после осаждения комплементфиксируХ ющих иммунных комплексов, по разнице содержания между ними определяют количество комплементфиксирующих иммунных комплексов, а по величине содержания иммунных комплексов после осаждения комплементфиксирующих иммунных комплексов определяют количество не фиксирующих комплемент иммунных комплексов.

Изобретение относится к микробиологии

Способ анализа антигенов // 1323960

Изобретение относится к способам анализа антигенов, предназначено для диагностики инфекционных заболеваний, стандартизации вирусных препаратов, контроля загрязнения окружающей среды и для научных исследований (серотинирование выявляемых штаммов, изучение структуры антигенных детерминант)

Способ определения специфичности иммунных комплексов // 1323959

Изобретение относится к медицине и предназначено для определения иммунных комплексов определенной специфичности

Способ определения антигенной активности вируса паротита // 1320754

Изобретение относится к вирусологии

Способ определения катехоламинов в плазме крови и способ получения флюоресцентно меченого катехоламина // 1305603

Изобретение относится к биохимии , касается способа определения и получения меченых соединений и предназначено для иммунофлюоресцентного определения катехоламинов

Способ определения ристомицина сульфата // 1302199

Изобретение относится к фармацевтическому анализу, а именно к анализу гликопептидного антибиотика, ристомицина сульфата, используемого в клинической практике для лечения септических инфекций, устойчивых к другим антибиотикам

Способ определения активности комплемента // 1298194

Изобретение относится к биологии , предназначено для изучения комплемента в эксперименте ив клинике при необходимости многократных исследований и в тех случаях когда забор крови труден из-за малых размеров подопытных животных или из-за тяжелого состояния больных

Способ определения липопротеинов низкой плотности в сыворотке крови // 1296019

Изобретение относится к способу и реактивудля определения липопротеинов низкой плотности (ЛНП), целью является ускорение способа

Способ прогнозирования развития инфекционных заболеваний у новорожденных в неонатальном периоде // 1291880

Изобретение относится к неонатологии и позволяет осуществить доклиническую диагностику

Способ определения антигенов и антител // 1291155

Изобретение относится к иммунологии и предназначено для одновременного определения 2-х антигенов

Способ диагностики ранних отклонений в иммунном статусе новорожденных детей // 2101707

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для диагностики ранних отклонений в иммунном статусе новорожденных

Способ выявления высокоаффинных поли- и моноклональных антител к водонерастворимым гаптенам // 2102080

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к методам иммунохимического определения гаптенов (ксенобиотиков) в образцах биологического происхождения и объектах окружающей среды, и может быть использовано для выявления высокоаффинных поли- и моноклональных антител к водонерастворимым гаптенам

Иммуногенная композиция против боррелиоза лайма, способ иммунизации млекопитающего против боррелиоза лайма, способ получения белка pc borrelia burgdorferi, диагностический агент для обнаружения b.burgdorferi и способ обнаружения антител к b.burgdorferi // 2102081

Изобретение относится к предотвращению болезни Лайма у млекопитающих

Устройства для автоматического проведения иммуноанализа за несколько последовательных этапов по меньшей мере одного биологического вещества из множества биологических образцов, способ и реактив для применения указанных устройств // 2102758

Изобретение относится к устройству для автоматического проведения иммуноанализа за несколько последовательных этапов по меньшей мере, одного биологического вещества из множества биологических образцов, а также к способу и реактивам для использования указанного прибора

Способ обнаружения или количественного определения аналита в образце // 2102759

Изобретение относится к анализам и, в частности к катализируемому осаждению репортера через активированный конъюгат для усиления детектируемого сигнала, вследствие чего улучшается детекция и/или количество аналита в образце

Способ обнаружения или количественного определения аналита в образце // 2102759

Способ определения биологически активных веществ в жидкостях и устройство для его осуществления // 2102760

Изобретение относится к области медицины, медицинской техники, ветеринарии, экологии и может быть использовано для определения биологически активных веществ в любых биологических жидкостях, окружающей среде, пищевых продуктах, в частности в диагностике вирусных, бактериальных, паразитарных и соматических заболеваний, а также для контроля эффективности лечения

Способ диагностики спаечной болезни брюшины у детей // 2103689

Изобретение относится к медицине, а именно к детской хирургии и клинической иммунологии, и может быть использовано для диагностики спаечной болезни брюшины у детей, оперированных по поводу острого аппендицита

Способ определения функциональной активности лейкоцитов при беременности // 2103690

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и может быть использовано для оценки состояния иммунной системы беременной женщины

Способ диагностики хронического простатита // 2103691

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для диагностики хронического простатита