Штамм бактерий viвriо сноlеrас еlтоr-продуцент умеренного фага п серотипа у1 гетероиммунной категории

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при лабораторной диагностик ке холеры. Целы изобретения - новый штамм V.cholerae eltor, несущий фаг У1 гетероимнунной категории. Штамм 611 получен из ВОДЫ-открытого водоема, депонирован под номером КМ-17 (611). При культивировании в бульоне Мартена (рН 7,6 ± 0,2) при 37 ± в течение 20 ± 2 ч штамм 611 продуцирует умеренный фаг 611 ранее неизвестной У1 гетероиммунной категории. При лизогенизации реципиентного штамма Vibrio cho- lerae eltot ME-7 фаг 611 создает специфический иммунитет. Клетки, лизогенные по фагу 611, устойчивы к гомоиммунным фагам У1 категории и чувствительны к гетероиммунным фагам, фагам 1-У категорий. с S (Л

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA (21) 4138780/28-13 (22) 27 ° 10 ° 86 (46) 15.04 ° 88. Бюл. Р 14 (71) Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" (72) П.И.Анисимов, Н.М.Остроумова, В,П.Мороз, И,В.Грачева, Д.Л.Шмеркевич, Н.С.Гончарова и Л.8 ° Óñïåíñêàÿ (53) 576.851.315:(088.8) . (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ VIBRIO CHOLERAE

ELTOR — ПРОДУПЕНТ УМЕРЕННОГО ФАГА

П СЕРОТИПА У1 ГЕТЕРОИММУННОЙ КАТЕГОРИИ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при лабораторной диагности-.

„„SU„„1 88423 А 1 (ц 4 С 12 N 1/20- //(С 12 N I/20, С 12 R 1:63) ке холеры. Цель.:изобретения — новый штамм Ч.cholerae.elisor, несущий фаг

У1 гетероиммунной.категории. Штамм

61 1 получен из воды. открытого водоема, депонирован под номером КМ-17 (611).

При культивировании в бульоне Мартена (рН 7,6 «+ 0,2) при 37 + +1 С в течение

20 + 2 ч штамм 611 продуцирует умеренный фаг 611 ранее неизвестной У1 гетероиммунной категории. При лизогенизации реципиентного штамма Vibrio cho1егае е1йой МЕ-7 фаг 611 создает специфический иммунитет, Клетки, лизогенные по фагу 611, устойчивы к гомоиммунным фагам У1 категории и чувствительны к гетероиммунным фагам, фагам 1-У категорий.

1 13884

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при лабораторной диагностике холеры.

Цель изобретения — новый штамм

Vibrio cholerae eltor, несущий фаг

У1 гетероиммунной категории.

Штамм Vibrio cholerae eltor депонирован в коллекции микроорганизмов

Института "Микроб" под номером KM-17 (611). Штамм получен из воды открытого водоема.

Культурально-морфологические признаки. Подвижные, слегка изогнутые палочки 1,4-2,9 мкм в длину и 0,30,6 мкм в ширину с одним полярно расположенным жгутиком. Спор и капсул не образует. Грамотрицательны.

На твердых питательных средах (агар Мартеча, агар Хоттингара рН

7,6+0,2) образует через 18 ч вырао щивания при 37+1 С круглые,.диаметром 3,0+0,6 мм, полупрозрачные колонии с голубоватым оттенком, ровным 25 краем, слегка уплотненным центром.

На жидких питательных средах (бульон Мартена, 1% пентонная вода, бульон Хоттингера рН 7,8+0,2) через

6 ч выращивания при 37+1 С образуют 30 равномерную муть и нежную пленку на поверхности, Физиологические признаки.

Тест на оксидазу положителен, Разлагает до кислоты без газа маннозу, глюкозу, сахарозу, маннит, не разлагает 1-арабинозу, инозит, лактозу, ферментирует и окисляет глюкозу в среде Хью-Лейфсона. Ферментирует крахмал и желатину, не образует 40 дигидролазу аргинина, образует декарбоксилаэы лизина и орнитина.

Не растет при повышенной (7-10 ) концентрации хлорида натрия. Гемолизирует эритроциты барана по Грейгу. 45

Серологические свойства.

Агглютинируется до титра холерными сыворотками 0 и Огава, не агглютинируется холерными сыворотками PO u

Инаба.

Штамм способен спонтанно продуцировать умеренный фаг 611 У1 гетероиммунной категории, который мезирует холерные вибрионы, лизогенные по фагам 1-У категорий, и при мезогенизации чувствительной культуры холерных вибрионов создает у нее иммунитет (резистентность) только к фйгам своей иммунной категории и не создает имму23 2 нитета к фагам 1-У иммунных категорий.

Фаг 611 используют при получении специфической тест †культу MV, — 7/611, применяемой для прямого фаготипирования холерных вибрионов классического и эльтор биовара при проведении эпидемиологического анализа.

Умеренный фаг 611 по электронномикроскопической структуре относится к У морфологической группе, по серологическим свойствам принадлежит к

П серотипу холерных фагов. На газоне индикаторного штамма Vibrio cholerae

eltor 692 образует типичные колонии с плотным центром, окруженным узкой зоной неполного лизиса, 2,5+0,5 мм в диаметре. .Размножают штамм Vibrio cholerae

eltor КМ-17 (611) на бу. bove и агаре

Мартена рН 7,6+0,2, хранят в лиофильном состоянии.

Пример. Для получения специфической тест-культуры МЕ-7/611 готовят фильтрат (фильтрацией через бактериологические фильтры Ф-5) бульоно, ной культуры 18 ч роста при 37 С штамма 611 и в количестве 1 мл соединяют с 0,2 мл бульонной культуры

3 ч роста индикаторного штамма 692 и 5,0 мл 0,7Х à"apa Мартена, пере мешивают и .выливают на 27. агаровую пластинку в чашке Петри, дают застыть.и инкубируют 18 ч при 37 С. При просмотре чашек отбирают одну типичную негативную колонию фага. Уколом платиновой иглы в центр колонии фага переносят в 10 пробирок с 1,0 мл бульона. Туда же добавляют индикаторный штаям 692 и 0,7Х агар, как указано выше. Содержимое каждой пробирки

BbIJIHBaIot. на отдельную,агаровую пласо тинку и инкубируют 18 ч при 37 С, после чего в каждую чашку добавляют по 10 мл бульона и шпателем перемешивают с верхним агаровым слоем, жидкую часть переносят во флакон и фильтруют, как указано выше. Получен8 ный концентрированный фаг 611 (10

10 корпускул в l мл) в количестве

i,0 мл соединяют с 0,2 мл реципиентного штамма NK-7. добавляют 0,7Х агар и выливают на агаровую пластинку. о

Через 18 ч инкубирования при 37 С на поверхности рециниентного штамма обнаруживают негативные колонии модифицированного фага 611, иэ центра которых высевают клоны, лиэогенные по фагу 611 (ME — 7/611), 1388423

Составитель Г.Смирнова

Техред А.Кравчук

Редактор Н.Киштулинец

Корректор Л.Пилипенко

Заказ 1549/28

Тираж 520

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Применение лизогенного клона

МЕ-7/611 в качестве тест-культуры при фаготипировании холерных вибрионов:повышает t качество эпидемиологических расследований при холере формула изобретения

Штамм бактерий Vibrio choler

eltor KM-17 (611) - продуцент умеренного фага П серотипа У1 гетероиммунной категории.