Полимерный реагент для ковалентной иммобилизации биологически активных соединений, содержащих свободные аминогруппы

 

Изобретение относится к полимерному реагенту для ковалентной иммобилизации биологически активных соединений (БАС) и может быть использовано с биоорганической химии и биотехнологии для получения препаратов ковалентно иммобилизованных аминов, аминокислот, пептидов, белков и ферментов. Изобретение позволяет проводить ковалентную иммобилизацию БАС с эффективностью 70-90% при сохранении их функциональной активности до 90-100% за счет структуры полимерного реагента.

где x=50-70 мол.%; y=28-46 мол.%; k=2-10 мол.%. 1 табл. Изобретение относится к химии полимеров, а именно к полимерному реагенту для ковалентной иммобилизации биологически активных соединений, и может быть использовано в биоорганической химии и биотехнологии для получения препаратов ковалентно иммобилизированных аминов, аминокислот, пептидов, белков и ферментов. Целью изобретения является создание полимерного реагента для высокоэффективной ковалентной иммобилизации биологически активных соединений. Пример 1. Получение полимерного реагента. Смесь 12 г N-винилпирролидона, 3,25 г диметакрилата тридекаэтиленгликоля (ТГМ-13) и 0,28 г п-натрофенилового эфира ε -аминокапроновой кислоты (НФА) растворяют в 100 мл смеси этилового спирта и этиленгликоля, взятых в объемном соотношении 3:7. К раствору добавляют 0,3 г динитрила азобисизомасляной кислоты, вакуумируют и полимеризуют смесь при 80^oC в течение 4 ч. Образующийся сополимер измельчают на ситах диаметром отверстий 1-1,5 мм, промывают этиловым спиртом, перемешивая взвесь частиц в течение 15-20 мин, после чего промывают полимерный реагент водой, ацетоном и высушивают. Состав полимерного реагента устанавливают по количеству отщепляющегося при обработке аммиаком п-нитрофенола (молярная доля звеньев п-нитрофенильного остатка), по количественному анализу состава сополимеров на азот (содержание винилпирролидоновых звеньев) и количеству карбоксильных групп, определяемому титрованием щелочью после гидролиза полимера серной кислотой в пиридине (молярная доля сшивателя). Для данного примера эти назначения отвечают значениям x, y и k в составе полимерного реагента, равным 70, 28 и 2 мол. соответственно. Иммобилизация биологически активного соединения. Навеску высушенного полимерного реагента (1 г) инкубируют при комнатной температуре в 20 мл раствора сывороточного альбумина (CA) в бикарбонатном буфере (pH 8,5) в течение 24 ч. Препарат иммобилизованного белка промывают до полного удаления п-нитрофенола, количество связанного белка определяют по связыванию конго красного. Исходное количество белка в растворе 97,5 мг, иммобилизованного 82,8 мг; эффективность иммобилизации 83,5% Данные по примерам 2-10 приведены в таблице. Как следует из приведенной таблицы, полимерные реагенты предлагаемой структуры позволяет проводить ковалентную иммобилизацию биологически активных соединений с высокой эффективностью и с сохранением их биологической активности (например, высокой ферментативной активности трипсина).

Формула изобретения

Полимерный реагент формулы где х 50 70 мол. y 28 46 мол. k 2 10 мол. для ковалентной иммобилизации биологически активных соединений, содержащих свободные аминогруппы.

РИСУНКИ

Рисунок 1