Защитная среда для хранения молочнокислых бактерий

 

Изобретение относится к микобиологической промышленности, а именно к разработке защитной среды для сохранения активности кислотообразования молочнокислых бактерий, и может быть использовано при производстве бактериальных препаратов. Изобретение обеспечивает сохранение активности кислотообразования молочнокислых бактерий в лиофшгазированном виде (до 2-х лет) и удешевление среды. Защитная среда для хранения молочнокислых бактерий содержит водный экстракт травяной муки, кормовой витамин , кальций углекислый и обезжиренное молоко. 2 табл. § сл

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СО1.1ИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1 (19) (11) сю4С 12 Н 1/20

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

:В

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4005734/28-13 (22) 03.01.86 (46) 30.07.88. Бюл. У 28 (71) Научно-производственное объединение "Фермент" (72) В.Ю. Грибаускене, М.-Ж,М. Ямоитене и Б.М. Тунайтите (53) 577.15(088.8) (56) Новые исследования в производстве чистых культур молочнокислых бактерий. Обзорная информация. Сер. Цельномолочная промышленность У 4, 1975, М.: ЦНИИТЭИминмясомолпром СССР, с. 22-30.

Сергеева И,Я. н др. Влияние глубокого замораживания н лиофилизации на некоторые свойства молочнокнслых стрептококков,-Сб. Биология микроорганизмов и их использование в народном хозяйстве. Иркутск, 1976, с.83-89..(54) ЗАЩИТНАЯ СРЕДА ДЛЯ ХРАНЕНИЯ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ (57) Изобретение относится к микобиологической промышленности, а именно к разработке защитной среды для сохранения активности кислотообраэования молочнокислых бактерий, и может быть использовано при производстве бактериальных препаратов. Изобретение обеспечивает сохранение активности кислотообразования молочнокислых бактерий в лиофилизированном виде (до 2-х лет) и удешевление среды. Защитная среда для хранения молочнокислых бактерий содержит водный экстракт травяной муки, кормовой витамин В©, кальций углекислый и обезжиренное молоко. 2 табл.

l4l3131

Изобретение относится к микробиологической промьппленности, а именно к разработке защитной среды для сохранения активности кислотообра5 зования молочнокислых бактерий, и может быть использовано при производстве бактериальных препаратов.

Целью изобретения является обеспечение сохранения активности кисло- 10 тообраэования молочнокислых бактерий при хранении в лиофилизированном виде и удешевление среды.

Экстракт травяной муки, полученный иэ расчета содержания исходной 15 травяной муки 25-35 г/л, характери зуется следующими показателями:

Количество сухих веществ,% 6,9-9,7

Общий азот,% от 20 сухого вещества 0,47-0,б7

Зола,% от сухого вещества 0,93-1,31 и служит источником азотного питания .Молочнокислых батерий, а также обо.: гащает среду минеральными веществами !и проявляет стимулирующее действие

;иа сохранение активности кислотооб разования молочнокислых бактерий н ходе их хранения в лиофилизирован- 30 ном виде.

Кормовой витамин В, является источником В,, а также пуриновых и пиримидиновых оснонаний и оказывает . стимулирующее влияние на сохранение морфолого-культуральных и физиологи-! веских признаков молочнокислых бактерий, в частности на сохранение ак тивности кислотообразования.

Кальций углекислый является как стабилизатором рН, так и стимулятором процесса кислотообразования молочнокислых бактерий в ходе хранения их в лифолиэированном виде.

Назначение обезжиренного молока в составе представленной защитной среды определяется в обогащении ее углеводами, кальцием, витамином А, рибофлавином и другими представителями комплекса витамина Вп, а также проявляется в качестве наполнителя.

Пример l . Готовят защитную среду при следующем соотношении КоМ понентов, г/л:

Травяная мука 25,0

Кормовой витамин В,@ 1,5

Кальций углекислый 1,5

Обезжиренное молоко До l л

25 r травяной муки в гранулах заливают 250 см водопроводной воды (в соотношении 1:IO), ставят в термастат при 30 С на lб ч для экстрако ции. Затем смесь стерлизуют при 115 С. в течение 30 мин, после чего фильтруют через складчатый бумажный фильтр и к полученному фильтрату в количестве 130 см добавляют 1,5 r кормового витамин В, и 1,5 г кальция углекислого, рН доводят до 7,0 раствором едкого натра и еще раз стерилизуют при о

115 С н течение 30 мин. Полученный объем доводят стерильным обезжиренным молоком до 1 л.

Обезжиренное молоко получают путем центрифугирования 20 мин при

3000 об/мин. Стерилизацию обезжиренного молока производят 3 дня текучим паром при 100 С по 20 мин.

Пример 2. Готовят защитную среду следующего состава, г/л:

Травяная мука 30,0 (или

150 r водного экстракта травяной муки)

Кормовой витамин В, 2,0

Кальций углекислый 2,0

Обезжиренное молоко До 1 л

Приготовление среды проводят аналогично примеру 1.

Пример 3. Готовят защитную среду при следующем соотношении компонентов, г/л:

Травяная мука 35,0 (или

170 r водного экстракта травяной муки)

Кормовой нитами В, 2,5

Кальций углекислый 2,5

Обезжиренное молоко До I л

Приготовление эащитноый среды проводят аналогично примеру

Пример 4. Готовят защитную среду при следующем соотношении ком понентон, г/л:

Травяная мука 20,0

Кормовой нитамин В, 1,0

Кальций углекислый 2,0

Обезжиренное молоко До 1 л

Приготовление защитной среды проводят аналогично примеру 1., Пример 5. Готовят защитную среду при следующем соотношении компонентов, г/л:

Травяная мука 40,0

Кормовой витамин В< 3,0

KRJ1h цнй QI IIP.KHcJIbn1 3, 0

1413131

Обезжиренное молоко До 1 л Приготовление защитной среды проводят аналогично примеру 1.

Количественные данные в пределах и за пределами соотношения компонентов защитной среды, следующие:

Кислотообраэование, ммоль/л

Пример

91+2,2

99+2,5

99+2,?

90+2,1

102+2,8

3а пределами соотношения компонентов (пример 4) активность кислотооб- 20 разования на много меньше активности примера 2, а данные активности примера 5 близки к данным примера 1, поэтому нецелесообразно применение защитной среды с повышенной концентра- 25 цией компонентов.

Пример 6, Изучение активности кислотообразования молочнокислых бактерий в ходе их хранения °

Известную среду и оптимальный ва- 30 риант среды эасеивают клетками молочнокислых стрептококков и палочек из расчета 3 ° 10 клеток в 1 см .-Полученную суспензию по 0,3 см помещают в ампулы и лиофилизируют. .5

Активность кислотообразования определяют после инкубирования культур в обезжиренном молоке в течение Э, 12, 16, 20 и 24 ч. Температуру культивирования для стрептококков поддер- 40. о живают при 37 С, для палочек — при

30 С.

Кислотообразование определяют по следующем методике.

5 см культуральной жидкости тит- 45 руют 0„1 и раствором БаОН в присутст- вии фенолфталеина (контроль — незасеянная среда). Полученное число умножают на 20, что выражает кислотность в градусах Тернера.

Оживление лиофилизированных культур проводят следующим способом. Со3 держимое ампулы заливают 0,3 см защитной среды, выдерживают 12-16 ч при соответствующей температуре (ЗОС для палочек и 37 С для стрпетококков), о, 55 затем засевают пробирки со стерильным обезжиренным молоком из расчета 0,5%.

Изучают изменение активности кислотообраэовання 16 штаммов молочно.— кислых стрептококков и 4 штаммов молочнокислых палочек в ходе хранения их в лиофилиэированном виде с известной средой (табл. 1) и предлагаемой средой (табл. 2).

Активность определяют в исходной культуре непосредственно после лиофилизации, а также в ходе хранения, в. частности после 6 мес, 1 г. и 2 лет хранения.

Как видно из табл. 1 активность кислотообразования большинства штаммов молочнокислых стрпетококков непосредственно после лиофилизации с известной средой колеблется в преде- лах погрешности по сравнению с активностью исходной культуры, а в некоторых случаях на 1,1,0-106,3Х превышает контрольную активность.

Однако активность кислотообразования молочнокислых палочек на много ниже активности кокков и состав.— ляет 87,1-91,3% от активности исходной культуры. Изучение активности в ходе хранения после 6 мес,:1 r. H

2 лет показывает, что активность кислотообразования резко падает как стрептококков, так и палочек при хранении в лиофилиэированном виде с известной средой (табл.2) и после

2 лет хранения составляет 61,2-71,4% от активности исходной культуры.

Как видно из табл. 2,активность кислотообразования большинства штаммов как стрептококков, так и палочек превышает активность исходной культуры.

Активность некоторых штаммов, например Streptococcus kactis Св составляет 102,5-110,0% от исходной активности, Str. cactis С - 100,0113,5% от исходной активности, Ьас1оЪа

cillus plantarum L> — 102,2-106,7Х от исходной активности культуры.

Применение предлагаемой защитной среды для хранения молочнокислых бактерий обеспечивает возможность сохранить активность кислотообразования в лиофилизированном виде до 2 лет, а в некоторых случаях даже увеличивает активность до 104,8Х от -исходной культуры.

При применении известной, среды

1 после хранения молочнокислых бактерий в лиофилизированном виде активность кислотообраэования после 2 лет

1413131

130,0-170,0

1,5- 2,5

1,5- 2,5

Остальное падает до 71,4Х от исходной культуPbl e

Защитная среда для длительного хранения молочнокислых бактерий пред- 5 азначена для хранения производственно-ценных штаммов молоинокислых бактеий, а также при производстве бактеиальных препаратов.

10 я!ормула изобретения !

Защитная среда для хранения молоч1 окислых бактерий, содержащая осноу - обезжиренное молоко, источник ,азота. отличающаяся тем, .15 что с целью обеспечения сохранения ! активности кислотообразования молоч,иокислых бактерий при хранении в ли-! офнлнзированном виде и удешевления среды, она дополнительно содержит кормовой витамин В и кальций углекислый, а в качестве источника азота и одновременно минеральных веществ— водный экстракт травяной муки с содержанием сухих веществ 6,9-9,7Х, общего азота 0,47-0,67Х от сухого вещества и золы 0,93-1,31 от сухого вещества при следующем соотношении исходных компонентов, г/л:

Водный экстракт травяной муки

Кормовой витамин

B„a

Кальций углекислый

Обезжиренное молоко

1413131

I I

1 I

1 1

1 t

1 X

С(I I

I 4 I

1 О I

I X I

1 Е

1

1

E

ttI

Ц

<Ч

Э

Ц о

1 И

Cta

Ю!

СЪ О

СЪ

Ю О

3Г\

СЧ О

О О

Ф Ю!

СЪ О О

СЪ

Ф о со

СЪ

С 4 О!!Ъ

СЧ О

Ю

СЧ О

О

СЧ

+1 о О

СЧ

Ю (Ъ

Ф! о О

СЧ

Ю

+!

СО !

С Ъ

СЧ ф!

Ю О

СЧ

Ф Ю

С Ъ С Ъ

+! +t

СЧ СЧ

Я) 3ГЪ

aCt

CV

41

СЧ О

Ю

Ю

СЧ

41

СЧ со

Ф

С4

4 1

СЧ

ССЪ!

Ю

СЧ

+1 о

Ю

СЧ

+! о О

Ю

С Ъ

4-!

СЧ !

Ю

С Ъ

+!

СЧ О ь

С!

00!

СЪ

С 1 л о

tn л

С 1

С Ъ

00 ь

Ю!

СЪ л

С»

Ю

СЪ

Ю Ю

СЧ л ф

СЪ

tn л о

00

Ю

СЬ л

O л !

1 IH!

Г 3 юь

5 !

1 А

О

1

I

1

1

I

1

I

I О

CV

+! .Ф

С>

Ю

°

С Ъ

И л

Ф

Ц

О

И

Ф

С Ъ

СЧ СЧ

М Ф! б О О

Ю

СЧ

+!

СЧ л

CV

° а

С Ъ

4-! о л О

Ф

СЧ

+1

С> л л

Ф

СЧ

44

СЧ л л

СЧ

+1 !

Ф

С Ъ

+!

СЧ л

Ig ж х ф

lC!

О

cd

Р о

О о

Е

О

+!

СО

С Ъ

4"l

0О

I

I f ! Må

1 ! О

СО ь

3УЪ л

Ю О

О

° с

МЪ л о

Ю О

О !!Ъ

Ю A

С 4 Л л 00 о

Ю о

СЛ

4 Ъ

° Ь

С ) CO о

00 л

tn

1 U

1 М О

СЧ

+!

М

С Ъ

Ф

СЧ

+l !

С!

Ю

СЧ

+!

СЧ л

С4

СЧ м

Ch

CV

+1

D л

Ю

СЧ

+1

СЧ л сО

Ю

СЧ

+!

СО л

Ф л

Ф

СЧ

+1

3 л

O В

СЧ

4.! со л

С ) СЧ

+! +l о о л о

00 о

00

СЬ ь

Ю ь

О сЪ

1О

Ю Ю

С Ъ

С ) Ю о

Ю

О о

°

О\

СЧ

tn

О!

СЧ

00

СО

СЧ о (Ъ

D

Ю

С Ъ

+! О

О

СЧ

Ю л

СЧ СЧ

+! Й !

ГЪ

Ф 00

СЧ

Ф

СсЪ

+! лО

О1 л

СЧ

+1 ь

l

I

1 М!

Г 3

С! о о о о о о о о о о о о о

С! о о о о о о о

Ю о

С!

Ю о о

I Ъ

1 с

I I

1 A

Ю

СЧ

+1

С 1

СЧ

+!

К)

О1

Ф

СЧ

4! О

tn

° Ь

СЧ

+!

00 с 1 tn

Ю

СЧ CV

+! 4t

О О

01 00

О

Ю

СЧ

Н О

О!

Ю

СЧ н

К)

О л

Ф

СЧ

+!

Ch л

Ю

СЧ

4! О

ОЪ!

Ю

СЧ

Ю

00! с

Ф

С4

Ф!

Ю

Ф

СЧ

+I

Ю

СЧ

Ф! О Ь о

u u

1

1.

1

I

0 л и

О ф

° 4

В

U о

U о и

Р

0! н и л

d!

td

Ч-!

1w и

СП

li 1 il

i .О

1 X

1 Е

I

1

I I

1 Ж I

1 Ж 1

I С11

td 11 —

U O

О! X

1 И X

1 I

Г Т ф

Ц ! 1

I !С

Ф ф

1 Х

I С(! и О

«1й 5

Л СО с"1 О

O Э Э Ф Ю

СЧ СЧ СЧ СЧ CV

Н +! +! +! 4-!

4 Ф СО Cta O

00 00 ОЪ Cta 0Ъ!!Ъ С! О

Ф а ° 4ь Ю

СЧ СЧ СЧ Ch

+! +1 Н

О Л О

Л СО СО О

С4 О

» л!

О

00 (Г!

СЧ

С 4

4-!

Ю О

Р л (Ч

+! о О

С 4

Ch .!

СЧ О!

СЧ

Ю л (»4 и (Ч и о

"О

1Г! л

М л л ь

00 о л

С \!

». о о

C) л

00 л л

00!! еь

Й ь (Ч

+!

СЧ !

» о

М

+I

0 л л

СЧ

+I (4 л!

СЧ

tI

СЧ О л

М

+!

Т л

СЧ

+\

00 О о

° \ о

0Q ь л

СО (4 л л

СЧ л (С!

CO!

» л л

1 ! о о о о

С 4

+I

C)

М

+! (»4

М

+i

СЧ

CI ь

Ch о л!

» (Д\

C) л

С!1

О\ л

0D л

Ф л

М

+I

СО (Ч л (»4

4-!

CO (Г! (Ч

4-!

lA

С)1

М

+\ !

М

+!

СЧ л

СЧ

+!

С "!

О1 о ь о о о о о о ш л

СЧ

4I

Vl

М

+I о

О\

О1 л

С 4

tI

М л

СЧ

+!

00 сь л

М

+1 !

Я1 л

М

+!

CV

О1 о и

1

1 д 1 (I

a ) о

Ю III (1 у

« а 1: а о !

2! и

) в

«й

2 (— 4! ю 1

Ф

Ф А

1413131!

4 (d

3 л л

° л

О (d

С4 и1 и

Э

6 !

Н (d

Q и! л

СЧ

00 л

СЧ

1!

C) !

d и-1

° л

О (d о4

1413131

СЧ

Cf к

D л

ОЪ

С Ъ а

N о сч о а о о о

° 1

С Ъ

О л л

M

N о

° 1 ь о а!

ОЪ

С!Ъ а

СЧ

О

ССЪ о

ОЪ а л

00 а!

СЪ

О!

Ф

° 1

N м

СЧ

О\ л

СЧ

° 3! !

О

С4Ъ л

СЧ N

+I 4 I л о

00 01

Ю

С!Ъ

+!

О 3 л

+!

0О

Ch а

С )

+!

0О

СЧ л

С Ъ

+!

СЧ

СЧ

+!

О

ОЪ л л (Ч ф!

00

° 1

С Ъ

М

О

Ch л

Сч

+!

Ю

Ch л

С

+! б

Ch а

+I

Ю

С1Ъ

+!

О ф !

I ! .СО л

«h

С! а

Ch а л

О1

ССЪ

D е

Ос

Ю л

О о о а

СО

О1

Щ а л о о о о о л

О\

ССЪ 00

С Ъ С4)

О Ch

N о

С»

1 о а

С1Ъ

+I о

О! о л

С1Ъ ф!

00 иЪ а.3! б

С4Ъ л а

N СЧ

+! +I

ОЪ О

00 Ch

С1Ъ л

+! О

Ch!

СЪ л

+I

0О О а

СЧ

Ф!

Ф

Ch л л

3.!

С Ъ а

СЧ

+!

МЪ

CO л

СЧ

Ф!

СЧ

О1 л а

СЧ и

Ch!

» а

+! !

О

00 л

С Ъ

И О

Ch а

С»Ъ

34

СЧ

D а о

С!

СЪ

° ° а сч о о о л о о л о о о л о о о о ь

О а

О

Ю ь л мЪ

Оъ л л л

Ch иЪ

° Ь

CO ь ь о

СЧ О а а

С1Ъ С4Ъ

+I +!

00 !О

CO ОЪ!

СЪ л

Сч

+!

СО

ССЪ а

СЧ

4!

Ch

Ch со

Сч

4I О

Ch о а

Я о

41

Ф

4!

СЧ о!

СЧ

00

ОЪ

МЪ л

СЧ и

00 л

СЧ

+! О

О а

С Ъ

3! О

00 а

С 4 +!

00 а

СЧ

Ф! О

00 а

С4Ъ

+1

CO

Ю а

Ch л со а ° л!!Ъ

О ОЪ!

СЪ а л

О л ь ь

Ch а л

СЧ

СЧ о о а а

СЧ С1Ъ

+! +! о сч

«5 ОЪ

Оъ л

+I

ССЪ

О\

00 а

Сч

4I О

«О

Ch а

СЧ

44 ь

ССЪ

° 1

С4Ъ

+1

Ю

In

° \

СЧ

tI

Ch л л

СЧ

+! О

О! л л

СЧ

3!

С 4

+!

СЧ

Ch а

С Ъ и

00 л

С Ъ

+!

О\ л

С1Ъ

+1 О

С Ъ

+I !

СЪ

С»Ъ ф!

ИЪ

Ю

О о ь о о о с о

О

D о

D ь о о о - о о о

О

О

D ь

С! о о о

° 1

СЧ

+I

ССЪ л

СЧ

+I

Ch л

+I О

С1Ъ

° 1

СЧ

+I О

Ch!!Ъ л

СЧ

+! о

00 .а ° а

N N

4! +! О

СО Ch

О1

° \

СЧ

+I О

00 л л

С»4

ОЪ л л

+!

Ю

О л л

СЧ

+I о

00 а

Сч

34

Cf l 10

О

Х О йt и

С4Ъ

+I

Ch!

44 с

o o и сГ и и

cd

О

О о

О и

Oi

Ф

1

1

1

1

1 I

Ch

Сч

34 и и

1 1

N

I I

Ф 0

t3 =t f

1 (М

I 3 I

1 Ф 1 М

30 1 1

oI I

4I

Ф I f I

1 I

Р I I 1 !

О 3 I I

О1 133

o3 vl

f» I Ф 1

О Z

I I I

Vt I

3С 3 Ф 3 10

1 l» 3 3»

01 vt O

ОЗЛ 1

О

E» . I 3

Й

I Id t

3 Ф 1 Фй I

g 3

l g l

I .8 à ——

О

5 l

I I

3 Ф I 10

I 3 I

v l O

О Z

3 И I Е

I I

1 4 I 1

I О I

1 Р I

I 3 I

1 10

3 3» 1 4 1

I W I

I 3« I 3

I Г 3

I CC I

1 Id !» I ! ж1

0I е

С! м С4

o o o o

13 („"

С 4

О (4 л сЧ

С« ( л

Р) ь

С Ъ л

СЧ

+!

«О

С4

- « л

СЧ

+! (О

00 л

СЧ м (Ч

K („" о

kf о

СЧ

4.!

00 м

Ф 4 !

С0 ь л

О

00 л

С!1

СЧ

СЧ ь! ,л (С«

Д ! (1

+I

«Г!

0О

С!1 сЧ

+I

С«

С«

С« )

Ф! сЧ

0 л

С4

+I

СО

+I

СЧ

СЬ

О л

О

О л

01

О л

О

О

С

+!

СЧ

С 1 л (« )

4!

О

СЬ м

+I

СЧ (41

4 Ф

5 1 I (0

Ol Вф

I и 3

3 l !

00 л

С! (1 л

О! л

О ь

СЧ л

С«1

+!

О

0ь сО л

СЧ

+I сЧ

00 (:(\ л

СЧ h ъО

<. 1 О л

СЧ

+1 б (Д\ (1

Ф1

О

l l

О ь о

О о

О о о

С«

С« ((СЧ ф(Ю

00 л

С

+!

О

Я1

С 1 л

С 4

+!

О\ р

I o

I 3C

I а ! f" о

I М ! р

3!

u I O !ц

I 1

В

1 11

1413131

° (Я л (« \ С4

+! +! с 4

0 00