Патент ссср 158660

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАН ИЕ

Класс 30h, 6

ИЗОЬРЕТКНИ Н ! К АВТО РС КОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ № 158660

МПK А 61k

УпК

Заявлено 02.11.1961. (¹ 695617/31) ГОСХДМСТВЕННЫИ

КОМИТЕТ ПО ДЕЛАМ

ИЗОБРЕТЕНИИ И ОТКРЫТИИ

СССР

Опубликовано 12.Х1.1963. Бюллетень ¹ 22

Под;гггсная группа !" 189 . ч "1. -", „Фя

4гЕйг

П. М. Пашинин f - ЙМ1,-., Д

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИСЪ|ВОРОТОК O; ...

К С- и Сх-РЕАКТИВНЫМ БЕЛКАМ

Известен способ получения антисыворотки к

С-реактивному белку и применение ее для QEIределения С-реактивного белка в крови больного.

Предлагаемый способ позволяет увеличить выход антисыворотки, а также обеспечивает получение антисыворотки к Сх-реактивному белку.

По описываемому способу в качестве исходного материала для получения С-реактивного белка использ !От абдог!ииальные !! Пг!евральные жидкости больных и серозные жидкости трупов.

Для получения антисыворотки к Сх-реактивному белку иммунизируют морских свинок

Сх-реактивным белком, полученным из сыворотки кроликов после воспроизведения у пих воспалительной реакции путем введения тифопаратифодизентерийной вакцины или бульонной культуры пневмококков.

Процесс получения специфических преципитирующих антисывороток к С- и Сх-реактивным белкам состоит из следугощих трех этапов: получения соматического Сх-полисахарида пневмококков, С- или Сх-реактивного белка (антигена) и антисыворотки к С- или

Сх-реактивному белку.

Соматический Сх-полисахарид получают из пневмококков II типа в К-форме. На каждые

3 — 4 л основного хоттингеровского бульона, разведенного в соотношении 1: 4, с содержанием 05",о глюкозы и 05 /, пептона при

pH 7,6 засева!от 10 л!л культ i pbl EIElpE3:iEo!,0Eiков. Посевы выде1ржива!от при температуре

37 С в течение 16 — 18 час. После проверки чистоты роста бульонную культуру фильтруют, центрифугируют, надосадочную жидкость сливают, а осадок 2 раза промывают физиологическим раствором и, 13 свою очередь, также центрифугируют. Отмь!тый осадок суспендиру!от в физиологическом растворе !! Ioбавляют 100".;,-ный раствор дезоксихолата натрия в 0,1Х МаОН с конечной концентрациеи 0,1 ",,,.

К лизату добавляют 2",о-ную уксусную кислоту (1 !!.г на 100 л!.г лизата) и подогрева!от на кипящей водяной бане 10 — 15 !гггн. Охлажденный лизат центрифугируют, из надосадочной жидкости, осаждают пневмококковый

Сх-полисахарид 96 ;, этиловым спиртом, очищают добавлением хлористого кальция для удаления нуклеиновых кислот EE повторно осаждают этиловым спиртом.

Высушенный соматический Сх-полисахарид — белый аморфньш порошок, плохо растворимый в воде и физпологическо» растворе, с отрицательными реакциями на белок. Выход 15 — 20 !!.г из 1 .г бульонной культуры.

Для получения С-реактивного белка абдомиHà7bHûå и плевральные жидкости больных например, плевральньш эксудат от больных лимфогрануломатозом, асцитическая жидкость от больных циррозами печени или от больных со злокачественными новообразованиями) или

¹ 158бб0

Предмет изобретения

Составитель С. В. Пыжев

Рс..актор Б. А. Шнейдерман Texpeä А. А. Дудрявинкая Корректор T. С. Дрожжина

Подп. к печ. 24>Х11 — 1963 г. <1>ормат бум. 60: 90 7а Обьем 023 изд. л.

Заказ 2732(9 Тираж 400 Цена 4 коп.

ЦНИИПИ Государственного комитета по делам изобретений и открытий СССР

Москва, Центр, пр. Серова, д. 4

Типография, пр. Сапунова, 2 серозные жидкости трупов собирают в стерильную посуду и . ранят при температуре C. Содср>канне С-реактивного белка определяют с помощью реакции преципитации, для чего берут соматический Сх-полисахарид, разведенный в отношении 1: 10 000, а rëII контроля — - физиологические растворы.

Жидкость пригодна для использования при возникновении через 10 — 15 яяггн, четкого кольца преципитата при отсутствии такового и контроле, что свидетельствует о содер>канин

С-реактивного белка»е менее 0,1 угг, л,г.

Исходную жидкость дефибринируют, разводят наполовину водой и производят фракционирование, для чего насыщают вначале до

50 сульфатом аммония, отстаивают, осадок отбрасывают, фильтрат насыщают сульфатом аммония до 75%, отстаивают, фильтруют через всасывающий бумажный фильтр в воронках Бюхнера.

Осадок собирают, растворяют .в дистиллированной воде и пропускагот через стерилизующие фильтры. Стерильный прозрачный янтарного цвета раствор переливают в простерилизованный целлофановый мешок.

Диализ производят против 0,01 Я>-ного оаствора хлористого кальция. По окончании диализа через 2 — 3 суток С-реактивный белок вместе с липоидами осаждается из раствора.

Для собирания осадка жидкость центрифугируют. Липоиды удаляют, воздействуя хлороформом а цитратный раствор осадка.

Освобо>кденный от липоидов цитратный раствор С-реактивного белка вторично диализируют для удаления цитрата натрия. С-реактивный белок осаждают из раствора соматичсским Сх-полисахаридом (конечпая концентрация последнего в растворе 0,2 мг7лл), осадок отделяют центрифугированием, промываIoT физиологическим раствором и растворяют в 0,1 М цитрате натрия.

Полученный С-реактивный белок является антигеном для получения высокоспецифнческих иммунных сывороток.

Для получения антисывороток к С-реактивному белку кроликов иммунизируют С-реактивным белком, вводя ежедневно I10 1,ил раствора, содержащего 4 — 5 лгг белка, в течение 3 дней с последующим перерывом на четыре дня.

Длитсльг.ость нчмунизации 3 — 4 недели.

Лнтиген, кроме этого, вводят одновременно одкожно со стимуляторами, усиливающими продукцию антител. С этой целью смесь 1 г ланолина, 1 г вазелинового масла, 10 ли г убитых туберкулезных палочек и 10 яг г

С-реактивного белка, растворенного в 2 лг1

0,85%-ной NaC1, вводят однократно в начале иммунизации в область живота в две точки по 1 лг.г. Через 9 дней после пммунизацг(и животных îоескровливают, сыворотку титруют и проверяют ее спецнфичность.

Исходным материалом для получения

Сх-реактивного белка служит сыворотка кроликов, у которых воспроизводят воспалительную реакцию введениеч тетравакцины.

Накопление в сыворотке Сх-реактивного белка проверяют реакцией преципитацин или реакцией связывания комплемента с помощью раствора соматического Сх-полнсахарида пневмококков.

Получение Сх-реактивного белка аналогично получению С-реактивного белка. Полученным белком иммунизируют морских свинок по

ВЬШ1ЕПРИВЕДЕННОй СХЕМЕ, НО В ПОЛОВИННЫХ дозах.!. Способ получения антисынороток к С- и

Сх-рсактивныч белкам путем иммунизации реактивным белком, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода готового продукта, используют реактивный белок, полученный из абдоминальных и плевральных жидкостей больных и серозных жидкостей трупов.

2. Способ по и. 1, отличающийся тем, что для получения антисыворотки к Сх-реактивному белку имчунизируюг морских свинок

Сх-реактивным белком, полученным из сыворотки кроликов после воспроизведения у них воспалительной реакции путем подкожного введc! IHB тифопаратифо1èçåíòåðèéíîé вакцины нли бульонной культуры пневмококков.