Способ получения сорбента для аффинной хроматографии

 

Изобретение относится к получению модифицированной целлюлозы, используемой в качестве сорбента для аффинной хроматографии. Изобретение позволяет уменьшить неспецифическую сорбцию по фагу ФХ174 с 93 до 0,9-1,0%. Это достигается осаждением целлюлозы из эмульсии 1%-ного медно-аммиачного раствора целлюлозы в смеси хлороформа и бензола при объемном соотношении 1:9, содержащей 0,13-0,26 мас.% полиоксиэтиленсорбитанмоноолеата, раствором ледяной уксусной кислоты в ацетоне и обработкой полученных целлюлозных шариков 1,6-ным раствором боргидрида натрия в пиридине в течение 4-8 ч с последующей активацией водным раствором периодата натрия и конъюгацией с белком. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АBTOPCHOMV СВИДЕТЕРЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИФ4

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4188115/31-05 (22) 28.. 01 . 87 (46) 07.10.89. Бюл. У 37 (71) Институт биоорганической химии

AH УЗССР и Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. почетн. акад. Н.Ф.Гамалеи .(72) У.К.Иногамов, А.Е.Гурвич, Ш.К.Касымов, А.С,Садыков, Hf,È.Ñàëèõoâ, Д.А.Эльгорт и В.Т.Скворцов (53) 661.728.8(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Ф 968039, кл. С 08 В 15/06, 1981. (54) CIIOCOB ПОЛУЧЕНИЯ СОРБЕНТА ДЛЯ

АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ (57) Изобретение относится к получению,модифицированной целлюлозы, исИзобретение относится к получению модифицированной целлюлозы, используемой в качестве сорбента для аффинной хроматографии.

Цель изобретения — уменьшение неспецифической сорбции сорбента.

Пример 1. 4, 1 r свежеприготовленного Cu(OH) растворяют в 50 мл

° 257.-ного NH ОН, раствор добавляют к

5 r целлюлозного порошка из линта хлопчатника. Через 20 ч объем смеси доводят тем же раствором аммиака до

500 мп. Раствор осветляют центрифугированием в течение 5 мин при

4000 об/мин,50 мл получеьйого медноаммиачного раствора помещают в сосуд емкостью 500 мл, куда налито 200 мл смеси хлороформа и бензола при объемном соотношении 1:9, содержащей

0,26 мас.7 (0,6 мл с 8=1,08 г/см ) „,з0„, МИ274 А 1 (51) 4 С 08 В 15/06//Ñ 12 N 11/12

2 .пользуемой в качестве сорбента для аффинной хроматографии. Изобретение позволяет уменьшить неспецифическую сорбцию по фагу ФХ174 с 93 до 0,91,0Х. Это достигается осаждением цел- . люлозы из эмульсии 1Х-ного медно-аммиачного раствора целлюлозы в смеси хлороформа и бензола при объемном соотношении 1: 9, содержащей О, 13-0,26 мас. X полиоксиэтиленсорбитанмоноолеата, раствором ледяной уксусной кислоты в ацетоне и обработкой полученных целлюлозных шариков 1,6Х-ным раствором боргидрида натрия в пиридине в течение 4-8 ч с последующей активацией водным раствором периодата натрия и конъюгацией с белком. 1 табл. полиоксиэтиленсорбитанмоноолеата. 2

В сосуд опускают мешалку и эмульгируют в течение 4 мин при 400 об/мин. (Д

Эмульгированную целлюлозу выпускают через нижний патрубок в регенерирую- (Я щий раствор, содержащий 500 мл ацето- {;© на и 50 мл ледяной уксусной кислоты.,,)

Через 8 мин выпавшие шарики отделяют ф „ и промывают десятью объемами воды, Пористые целлюлозные шарики фракционируют на капроновых ситах и отделяют фракции, содержащие целлюлозные частицы размером 70-200 мкм. 1 г пористых целлюлозных шариков помещают в круглодонную колбу емкостью 500 мл, В снабженную обратным холодильником, добавляют 100 мп пиридина, содержащего 1,6 мас.Ж боргидрида натрия и нагревают на водяной бане в течение

4 ч. После этого сорбент отделяют

Лр ецнфическая ция агуя, Ло an

74,2 ну, ик

50-250 1 6

94 0,9

0,5 320

1:9 0,26

2 (сравинтельный)

3 (сравнительный)

4 (сравнительный)

5 (сранннтельный)

6 (сравнит ельный)

7 (сравнительный) 0,8 280

85 1,3

to-500 1,6

f:8 0,26

20-350 1,6

31о

85 19

1:10 0,26 вг 14

20 300

50-250 0>7

1:9 0,26 во

2,0 304 о,в

50 250

1!9 0,26

1,5 315

90 2,0

50-250

2,О

t 9 0,26

50-250 2,2!

О 307

90 10

1:9 0,26, 8 (сравннтельный)

10 (срав интельный)

11 (сраннитель; ный)

12

200-1000

too-ã5î

3,0 260

3ОО

30 2,0

90 1,0

1,5

t 6

t!9 0,05

1:9 О, 13

0,8 300

85 1 ° О

50-250 2,0

1:9 0>40

0,9 280

0,5 320

60 1,О

94 0>9

1;6

1,6

20-!00

50-250

1:9 0,50

t:9 0,26

3 151297 фильтрованием на воронке Бюхнера, отмывают сначала ацетоном, а затем дистиллированной водой до исчезновения следов ацетона. 5

Полученные пористые целлюлозные шарики активируют окислением в 0,015 молярном растворе NaIO в течение

18 ч в темноте с последующей промывкой водой. 10

Активированные пористые целлюлозные шарики обрабатывают 0,1 молярным карбонат-бикарбонатным буферным раствором с рН 9,2, затем добавляют предварительно отдиализованный против бу-15 фера белок (гамма-глобулин лошади), перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре и инкубируют сутки о при 4 С. Полученный нммуносорбент отмывают поочередно 0,01 молярным раст-20 вором НС1 в 0,15 молярном растворе

NaC1 и в О, 1 молярном борио-боратном . буфере с рН 8,6, а затем определяют количество присоединившегося белка по окрашиванию бромфеноловым синим.

Результаты представлены в таблице.

Примеры 2-15 выполнены аналогично примеру 1, но при других соотношениях

4 4 хлороформ: бенэол, концентрациях голиоюсиэтиленсорбитанмоноолеата и боргидрида натрия и продолжительностях обработки на водяной бане °

Условия получения и свойства сорбента представлены в таблице.

Формула изобретения

Способ получения сорбента для аффинной хроматографии, включающий осаж дение целлюлозы из эмульсии 13-ного медно-аммиачного раствора целлюлозы в смеси хлороформа и бензола, содержащей 0,13-0,26 мас,X полиоксиэтиленсорбитанмоноолеата, с последующими активацией водным раствором периодата натрия и конъюгацией с белком, о т— лич ающий ся тем, что, сцелью уменьшения неспецифической сорбции сорбента, используют смесь хлороформа и бензола в объемном соотношении 1:9, осаждение целлюлозы проводят раствором уксусной кислоты в ацетоне и перед активацией выделенную целлюлозу обрабатывают 1,67-ным раствором боргндрида натрия в пиридине в течение 4-8 ч.

1512974

Продолжение таблицы

Пример

Объемн соотно венке хлороформ:

:бек9 Ол

50-250

0,5 320

1>9 0,26

1>6

95 0,9

1:9 0,26

20-300

1,6

35 3,0

6,0 260

95 0>9

50-250

0>5 3 12

1>9 0,26

«В соответствии с нэвестным способом неспецифическая сорбцня сорбента составляет 93I °

Составитель А.Селин

Редактор И > Горная Техред А.Кравчук Корректор М.Самборская

Заказ 6037/24 Тираж 411 . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям н открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

13 !

4 (сраенительный)

15 (сравнителв" ный) Концентраши полкоксиэтиленсорбк танмоноолеата, масЛ