Способ определения пирогенности препаратов для инъекций

 

Изобретение относится к технике определения пирогенности воды и растворов для инъекций. Цель изобретения - ускорение, повышение чувствительности при расширении диапазона исследуемых объектов. Определение проводят по величине интегральной интенсивности собственной флюоресценции анализируемой пробы в пределах длин волн от 310 до 400 нм. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСН ИХ

РЕСПУБЛИН (51) 4 G 01 Н 21/64

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ Н0МНТЕТ

ПЮ ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОЧНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4390381/40-25 (22) 09.03.88 (46) 07.11.89. Бюл. В 41 (72) П.Ф.Хвещук и А.А Ерошевский (53) 543.42(088.8) (56) Авторское свидетелвство СССР

Ф 913255, кл. С 01 0 33/48, 1980.

Авторское свидетельство СССР

Ф 663380, кл. С 01 Н 33/18Ä 1979.

1.- -Изобретение относится к технике определения пирогенности воды и растворов для инъекций и может. быть использовано в Фармацевтической промышленности, а также в аптеках при контроле качества лекарственных средств.

Цель изобретения — расширение круга анализируемых объектов, повышение чувствительности определения за счет исключения влияния на результаты анализа источника происхождения цнрогенов и ускорение анализа.

В качестве источника пирогенов используют отечественные стандарты пирогенности (продигиозан и пирогенал), липополисахарнды, выделенные из S. oranienburg, S. amberst, $. typhy 4446, S. typhy 0901, $. abortiwo-equina, S. Sonne 6747, S. Flexneri 4 н пирогенообразующнй микроорганизм $. marcescens(.

„„SU„„1520407 А 1

2 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПИРОГЕННОСТИ, ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ИНЪЕКЦИЙ

{57) Изобретение относится к технике определения пирогенности воды и растворов для инъекций. Цела изобрете".. ния — ускорение, повышение чувствительности при расширении диапазона исследуемых объектов. Определение проводят по величине интегральной интенсивности собственной флюоресценции . анализируемой пробы в пределах длин волн 310-400 нм. 1 табл.

Первоначально изучают спектры флюоресценций указанных пирогенов при длине волны возбуждения 260 нм. Ис" следуемые растворы пирогенов готовят на апирогенной дистиллированной воде и отдельно иа апирогенных инъекционных растворах: 0 9Х-ном растворе натрия хлорида и 5Х-ном растворе глюкозы.

Спектры фвворесденции всех изученных пирогенов характеризуются широки- ми полосами в пределах 310 — 400 нм с одним максимумом, находящимся в зависимости от вида пирогена и его концентрации в пределах 236 — 340 нм.

Интенсивность фтцооресценции во всех случаях прямо пропорциональна концентрации пирогенов.

Таким образом, на примере десяти различных пирогенов выявлено, что явление фшооресценции в пределах 310— 400 нм является общим свойством бак1520407 териальных пирогенон, выделенных из разных культур микроорганизмов, а интенсивность флюоресценции может служит мерой содержания пирогенов в. испытуемой воде или растворе.

Пример. Испытуемую дистилли" рованную воду (раствор для инъекций) помещают в кювету с толщиной слоя жидкости 1 см с помощью спектрофлюориметра ИПФ-4 с термостатируемой ячейкой записывают спектр фгпооресценции в пределах длин волн 310

400 нм. Длину волн возбуждения устаIнавливают 260 нм, чувствительность усилителя — 10,0, щель монохроматора возбуждения - 20 нм, щель монохроматора эмиссии — 10 нм, скоростьсканирования — 60 нм/мин. Затем, используя микропроцессор МПФ, находят интегральную интенсивность флюоресценции.

Параллельно проводят контрольный опыт с заведомо апирогенной дистиплированной водой (раствор для инъекций) .

Дистиллированную воду (раствор для инъекций) считают нирогенной,. если величина интегральной интеисивности флюоресценции испытуемого образца превышает величину интегральной интенсивности флюресценции контрольного образца более чем в 3 раза.

Необходимость вычисления интегральной интенсканости фпюоресцеиции B пределах длин BOIH 316

400 нм обусловлена тем, что фпюоресценция пироге нов характеризуется широкими полосами в уха;

1. эанном диапазоне. Причем s зази" симости от происхождения бактериальных ирогенов и их концентрации в испытуемом растворе местонахождение максимума флюоресценции может изменяться. Поэтому оценка пирогеиности анализируемого образца но величине флюоресценции прн какой-либо фиксированной длине волны приводит к значительной ошибке. В то же время использование интегральной интенсивности позволяет определять содержание пирогенов. не зависимо от их про" исхождения и концентрации.

Ускорение способа обусловлен.; исключением одной иэ стадий анализа, а именно приготовлением и введением реактива — родамина 6R, что приводит к сокращению продолжительности анализа с 20 до 5 мин., т.е. в 4 раза.

Данные анализа растворов продиги озана различной концентрации предс-.: тавлены в таблице.

Как видно из таблицы, с помощью предлагаемого способа можно с достаточной точностью определить продигиоэан в водном растворе в концентрации более чем в 3000 раз ниже концентра-, ции, вызыванлщей пирогенную реакцию (минимальная концентрация продигиоэана, вызывающая пирогенную реакцию, составляет 5 10 г/мл). Чувствительность предлагаемого способа по нродигиоэану не превышает 1 6 10 г/мл, по пирогеналу — 1,0 10 г/мн, что в

10-100 раэ вьппе, чем у известного.

Таким образом, предлагаемый способ определения пирогенности воды и растворов для инъекций чувствительнее известного в 10-100 раз, быстрее в 4 раза, точнее и дает возможность расширить диапазон исследуемых объектов, позволяя правильно оценить пирогенность не только дистиллированной воды, но и растворов для инъекций.

Формула из обретения

Способ определения пирогенности препаратов для инъекций, включающий облучение пробы возбуждающим излучением, регистрацию интенсивности

Флюоресценцни и определение пирогенности воды, о тл ич ающи йс я тем, что, с целью расширения круга анализируемых объектов, повышения чувствительности определения за счет исключения влияния ча результаты анализа источника происхождения пирогенов и уско рения анализа, определение пирогенности проводят но величине интегральной интенсивности собственной флюоресценции бактериальных пирогенов в интервале длин волн 310 — 400 нм. I 520407

Концентрация продигиозана г/мл

Интегральная интенсивность флюоресценции

Концентрация продигиозана г/мл

Инт е гр ал ьн ая интенсивность флюоресценции

Составитель О. Бадтиева

Техред Л. Олийнык Корректор Л. Патай

Редактор Н.Лазаренко

Заказ 6749/44 Тираж 789 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина„10!

8,0 10

4,0 10

1,6 10

8,0 10

1,6,10

8,0 10

37349

26683

10092

7302

5523

4583

1,6 10

8,0 10 3

1,6 -10 "

8,0 .10

1,6 10

3982

3713

3604

2347

2070