Способ определения вида грамотрицательных микроорганизмов

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для диагностики инфекционных заболеваний. Цель изобретения - повышение точности и ускорение способа. Исследуемые культуры высевают на питательные среды, содержащие один из субстратов, в отношении которого определяют ферментативную активность, в частности среды с углеводами, аминокислотами, среды для определения образования сероводорода и индола. Параллельно делают посевы на контрольные среды (не содержащие субстраты). После инкубирования посевов определяют изменение цвета сред и индикаторов. Для определения утилизации аминокислот лизина, орнитина и аргинина к посевам добавляют реактив Несслера. При утилизации аминокислот образуется осадок, в контроле осадок отсутствует. Время проведения анализа 18 - 24 ч, ложно положительные результаты исключаются.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1 (19) (И) (51) 5 С 12 Q 1/04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К A ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4417347/30-13 (22) 28.04.88 (46) 23.01,90. Бюл. М 3 (71) Центральный институт усовершенствования врачей (72). Т.Б.Сафонова, Л.А.Тараненко, Е.А.Ведьмина и В.P Ñîáoëåâ (53) 576.8.093.1 (088.8) (56) Энтеробактерии. Руководство для врачей./Под ред. В.И.Покровского, И.: Иедицина, 1985, с. 31-55. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИДА ГРАИОТРИЦАТЕЛЬНЬ!Х ИИКРООРГАНИЗИОВ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для диагностики инфекционных заболеваний. Цель изобретения повышение точности и ускорение спосоИзобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для диагностики инфекционных заболеваний.

Цель изобретения — повышение точности и ускорение способа.

Способ осуществляют следующим образомм.

Способность утили зироват ь углеводы определяют посевом исследуемых культур на среды Гисса,способность образовывать

H S и индол на среде Клиглера. Показания этих тестов учитывают через

24 ч по изменению окраски индикатора в этих средах.

Определение утилизации аминокислот осуществляют следующим образом. Готовят реактив Несслера: берут 10 мл

ba. Исследуемые культуры высевают на. питательные среды, содержащие один из субстратов, в отношении которого определяют ферментативную активность, в частности среды с углеводами, аминокислотами, среды для определения образования сероводорода и индола.

Параллельно делают посевы на контроль. ные среды (не содержащие субстраты).

После инкубирования посевов определяют изменение цвета сред и индикаторов.

Для определения утилизации аминокислот лизина, орнитина и аргинина к посевам добавляют реактив Несслера .

При утилизации аминокислот образуется осадок, в контроле осадок отсутствует.

Время проведения анализа 18-24 ч, ложно положительные результаты исключаются. воды, 1 r иодистой ртути, растирают в ступке с небольшим количеством воды, переносят в темный стеклянный флакон, ступку ополаскивают водой и сливают в тот же флакон,куда добавляют 0,5 г иодис,того калия. В оставшейся воде растворяют 2 г гидроксид натрия, и после охлаждения раствор щелочи выливают во флакон. Дают отстояться осадку в течение нескольких часов. Надосадочную жидкость сливают и хранят в темном флаконе с притертой пробкой. Сре3 ды готовят известным методом: с амино. кислотами и без аминокислот (контрольные), Посев испытуемых культур проводят известным методом, культуры инкубируют 18-24 ч в термостате при 37 С.

1537690

Реактив Несслера в объеме 0,150,25 мл добавляют в каждую пробирку под слой вазелинового масла.

Реакцию считают поло>нительной, если сразу после добавления реактива в опытную пробирку образуется объемный белый осадок в случае продукции микроорганизмами декарбоксилаэы орнитина или лизина, и большое количество белого или желто-коричневого осадка при продукции аргининдигидролазы. Появление легкой опалесценции расценивается как отрицательный результат. 15

B контрольной пробирке после добавления реактива происходит изменение цвета индикатора беэ образования осадка.

Пример 1. Выявление вида культуры рода Klebsiella pneumoniae.

Определение исследуемой культуры начинают с посева в две пробирки со средой Гисса, содержащей глюкозу и лактоэу, в пробирку со средой Клигле. 25 ра, на которой определяют образование H S и индола, а также на среду с аминокислотой. Первая пробирка среда с.лизином (опытная), вторая пробирка - среда без лизина (контроль- 0 ная). Исходный цвет сред — светло-зеленый. Пробирки заливают стерильным ваэелиновым маслом для создания анаэробных условий.

Посевы ставят в термостат и инкУ бируют при 37 С 24 ч. Изменение окраски индикатора на средах Гисса свидетельствует о способности микроорганизма утилизировать глюкозу и лактозу. Отсутствие почернения среды

Клиглера и отсутствие изменения индикаторной бумажки,на индол свидетельствует о неспособности исследуемой культуры образовывать сероводород и индол. Через 24 ч инкубации в контрольной пробирке (среда без лизина) происходит изменение цвета среды из зеленого в желтый, а цвет опытной пробирки (среда с лизином) приобретает желтый цвет с зеленоватым оттен50 ком. Такое изменение цвета не позволяет четко интерпретировать резуль" таты. В пробирки добавляют реактив

Йесслера в количестве 0,15 мл под вазелиновое масло. В опытной пробирке сразу появляется объемный белый осадок. В контрольной пробирке при добавлении 0,15 мл реактива образование осадка не наблюдается.

Пример 2. Выявление вида микроорганизма Pseudomonas aeruginosa,, Определение начинают с посева исследуемой культуры в две пробирки со средой Гисса, содержащей глюкозу и лактозу, в пробирку со средой Клиглера, на которой определяют образование Н S и индЬла,а также на две пробирки - опытную и контрольную, соответственно с аргинином и без аргинина. Пробирки с аминокислотами заливают вазелиновым маслом, и все посевы инкубируют в термостате при

37 С 18-24 ч.

Изменение окраски индикатора на среде с глюкозой говорит о способности культуры утилизовать глюкозу..

Неизмененная окраска среды с лактозой, отсутствие почернения среды

Клиглера и изменения индикаторной бумажки на индол свидетельствуют об отрицательных реакциях. Через 1824 ч инкубации с аминокислотами происходит изменение цвета посева в опытной пробирке (среда с аргинином) в сине-зеленый, а s контрольной (среда без аргинина) — в зелено-синий, что не дает возможность интерпретировать полученные результаты.

Добавляют в пробирки с аминокислотами по 0,25 мл реактива Несслера под масло. В опытной пробирке сразу образуется желтовато-коричневый осадок, в контрольной осадка не наблюдается.

Использование способа позволяет повысить точность определения вида микроорганизма за счет модификации определения утилизации аминокислот.

По сравнению с известным способом ускоряется определение на 2-3 сут.

Формула и э о б р е т е н и я

Способ определения вида грамотрицательных микроорганизмов путем посева исследуемых культур на питательные среды, предназначенные для определения утилизации углеводов и аминокислот, образования индола и сероводорода, с последующим инкубированием посевов и определением вида микроорганизма пс совокупности биохимических свойств, о т л и.ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, утилизацию аминокислот лизина, орнитина и аргинина

Составитель Г.Смирнова

Техред М.Дидык

Редактор H.Ðoãóëè÷

Корректор О.Кравцова

Заказ 145 Тираж 474 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Ужгород, ул. Гагарина, 101

6 определяют по образованию осадка пос= выросшей культурой реактива Несслеле добавления в питательную среду с ра.