Способ получения даунорубицин-гидрохлорида

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к производству антибиотиков. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта и упрощение способа. Ферментационный бульон, полученный при выращивании культуры-продуцента STREPTOMYCES SPP., экстрагируют несмешивающимся с водой растворителем. Полученный экстракт выпаривают и осаждают целевой продукт. Очистку проводят путем хроматографии на силикагеле и элюируют смесью хлороформа и метанола, взятых в соотношении 80:20 - 90:10, с добавлением 0,2-2 об.% муравьиной кислоты. Выход целевого продукта 59,7-62% от содержания антибиотика в ферментационном бульоне.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ÄÄSUÄÄ 1547711 (51) 5 С 12 P 19/56

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н flATEMTY

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21). 4203039/30-13 (22) 31.07.87 (46) 28.02.90. Бюл, Ф 8 (71) Биогал Дьедьсердьяр (HU) (72) Янош Балинт, Жужанна Эмри, Йожеф Фазекаш, Аттила Якаб и Дьердь

Тот (HU) (53) 615 ° 779,93(088,8) (56) Felia Microbiology, 22, 1977, р ° 275-285, I (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДАУНОРУБИЦИНГИДРОХЛОРИДА (57) Изобретение относится к микробиологическойой промышленности, в час тности к производству антибиотиков.

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к производству антибиотиков.

Цель изобретения — повышение выхода целевого продукта и упрощение способа.

Пример 1, К 500 л ферментативного бульона (содержание активного вещества 40 у/мл ) при комнатной температуре добавляют 10 л 27о-ной щавелевой кислоты. Ферментативный бульон перемешивают в течение 45 мин, затем смешивают с 17. фильтрующего перлита и вновь перемешивают в тече«6«е 30 мин. Затем мицелий отфильтровывают. Для получения антибиотика из мицелия его выщелачивают .100 л 27о-ной щавелевой кислоты в течение 30 мин при перемешивании, а затем фильтруют, Очищенные фильтраты (530 л) с помощью 407-ного натроврго щелока

Цель изобретения — повышение выхода, целевого продукта и упрощение способа. Ферментационный бульон, полученный при выращивании культуры-проду-, цента Stroptomyces spp., экстрагируют несмешивающимся с водой растворителем, Полученный экстракт выпаривают и осаждают целевой продукт, Очистку проводят путем хроматографии на си-, ликагеле и элюируют смесью хлороформа и метанола, взятых в соотношении

80:20 — 90:10 с добавлением 0,22 об.7 муравьиной кислоты. Выход целевого продукта 59,7-627 от содержания антибиотика в ферментационном бульоне, доводят до величины рН 8,0-8,4, а затем дважды экстрагируют по 200 л и-бутанола. Фазу и-бутанола промывают 100 л беэионной воды, с помощью соляной кислоты величину рН доводят до 5,)-5,5 и выпаривают в вакууме при 45 С, К концентрату от выпаривао ния (4,5 л) добавляют 90 мл воды, свободной от ионов. Затем с помощью

6 н этанольной соляной кислоты величину рН устанавливают на 1,2-1,4, Смесь выпаривают при 45 С на 3/4 ее объема, а затем кристаллизуют при

5 С в течение 24 ч. Сырой даунорубицин-гидрохлорид (21 г, действующее вещество 607) отфильтровывают, промывают 11 бутанолом и сушат в вакууме при 27 С, Маточный раствор вновь выпаривают на 3/4 его объема и вновь о кристаллизуют при 5 С до образования кристаллов. Через 24 ч остальные 7 r

1547711 продукта (действующее вещество 587) отделяют, промыв ают вышеописанным образом и сушат.

Очищенные фракции сырого продукта (28 г) очищают методом колоночной хроматографии. Для этого 5 л силикагеля с величиной частиц 0,06-0,2 мм

1 суспендируют в хлороформе и помещают в колонну (диамет, высота=1:20), .Продукт-сырец: растворяют в 125 мп метанола и .помещают в колонну. Затем в качестве элюента в;колонну подают приготовленную в соотношении 81:18:1 .смесь из хлороформа, метанола и муравьиной кислоты (скорость 800 мл/ч).

Фракции улавливают по 800 мл и исследуют методом тонкослойной хроматоrpaфии. Содержащие даунорубицин фракции, показывающие только пятно, очищают (12 л) и испаряют в вакууме при

35 С на 1/100 из объема. Концентрат выделяют при 5 С в течение 24 ч. Затем кристаллы даунорубицин †гидрохлорида отфильтровывают, промывают хлоро-25 формом и сушат в вакууме при 25 С.

Получают 12,5 r продукта, что в пере- счете на общее содержание действующего вещества ферментного бульона составляет 627 выхода.

Пример 2. 500 л ферментного бульона - экстра гир уют при в еличине рН

8-8, 4 (устанавливается 50%-ной натро-. вой щелочью), 400 л и-бутанола без предварительного отфильтровывания мицелия, Фазы отделяют друг от друга, и. органическую фазу промывают половинным объемом воды без ионов, Промытую органическую фазу обрабатывают по примеру 1. Выход и параметры ана- 40 логичны примеру 1.

Пример 3, 500 л ферментационного бульона, который получен при применении штамма Streptomyces sp. 69 (содержание биологически активного 45 вещества 43 мкг/мл), обрабатывают согласно примеру 1, Получают 22,5 r дауномицин-гидрохлорида красного цвета с содержанием биологически активного вещества 59%. Из маточного раствора можно получить дополнительные 7,5 г 597-ного сырого продукта.

Объединенный сырой продукт (30 г) описанным в примере 1 обра зо м очиI щают на силикагеле с помощью колоночной хроматографии ° В качестве элюирующего средства используют смесь из хлороформа, метанола и муравьиной кислоты (27) в объемном соотношении

80:20:2. Выход 13,0 r (60,57 антибиотика от содержания в ферментационном бульоне) .

Пример 4. 500 л ферментационного бульона, как в примере 3, обрабатывают описанным в примере 1 образом, Получают 20,0 г сырого дауномицин-гидрохлорида (содержание биологически активного вещества 607) и из маточного раствора получают дополнительно 8 r (содержание биологически активного вещества 587), Объеди-. ненный в количестве 28 г сырой продукт очищают описанным в примере 1 образом с помощью колоночной хроматографии, Элюирующее средство — смесь хлороформа, метанола и муравьиной кислоты (0,27.) в соотношении 90:10:

0,2. Выход 12,8 г (59,7% от содержа-. ния в ферментационном бульоне) °

Использование способа позволяет упростить технологию и повысить выход целевого продукта (по прототипу выход 0,5 г, что составляет 337. от содержания в ферментационном бульоне), Формула и з о б р е т е н и я

Способ получения даунорубицингидрохлорида путем экстракции ферментационного бульона культуры-продуцента Streptomyces sp. не смешивающимся с водой растворителем, выпаривания экстракта с последующим осаждением целевого продукта и его очисткой путем хроматографии на силикагеле и элюции органическими растворителями, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и упрощения способа, элю— цию проводят смесью хлороформа и метанола, взятых в соотношении 8090:10-20, в присутствии 0,2-2 об, муравьиной кислоты.