Способ определения сенсибилизации организма вирусом гриппа

Авторы патента:

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для оценки состояния сенсибилизации после вакцинации вирусом гриппа. Цель изобретения - повышение точности и упрощение способа. Людей вакцинируют вирусом гриппа, проводят забор крови в количестве 1 мл, подсчитывают количество лейкоцитов, инкубируют очищенным вирусом гриппа в течение 20 минут при 37°С. Затем кровью заполняют капилляры и повторно инкубируют при 37°С в течение 30 мин. После инкубирования капилляры промывают, подсчитывают число прилипших к стенкам капилляров клеток и при повышении количества прилипших клеток в пробе с антигеном по сравнению с контролен определяют сенсибилизацию организма вирусом гриппа. В сравнении с прототипом увеличивается точность способа в 1,8 раза и способ упрощается за счет исключения процедуры выделения лейкоцитов из проб крови.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)з G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР!

1„

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4313671/14 (22) 06.10.87 (46) 15.03.91. Бюл. hh 10 (71) Ленинградский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток (72) Б.Н. Смирнов, И.И. Торопова. Г.А. Мохова и Т.А. Зонова (53) 615.375(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

f4 919179, кл. А 61 В 10/00, 1980, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ ОРГАНИЗМА ВИРУСОМ ГРИППА (57) Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для оценки состояния сенсибилиэации после вакцинации вирусом гриппа. Цель изобретения вЂ” повыИзобретение относится к иммунологии и может быть использовано для оценки состояния сенсибилиэации и клеточного иммунитета при гриппозной вакцинации и инфекции, Цель изобретения вЂ” упрощение и повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Кровь испытуемого организма собирают во флаконы с гепарином (20 ед. гепарина ма 1 мл крови), подсчитывают количество лейкоцитов в 1 мм крови, кровь разливают по 0,5 мл в силикониэированные пробирки, в одну иэ которых добавляют 0,2 мл (контроль) зэбуференного физиологического раствора (рН 7,4), в другие вЂ” антиген в том же объеме (опыт). Материал иэ пробирок после

20-минутного выдерживэния и ри 37 С переносят в капилляры (3-4 каппиллярэ на каж„„5U„„1635140 А1 шение точности и упрощение способа. Людей вакцинируют вирусом гриппа, проводят забор крови в количестве 1 мл, подсчитывают количество лейкоцитов, инкубируют очищенным вирусом гриппа в течение 20 минут при 37ОС. Затем кровью заполняют капилляры и повторно инкубируют при 37 С в течение 30 мин. После инкубировамия капилляры промывают, подсчитывают число прилипших к стенкам капилляров клеток и при повышении количества прилипших клеток в пробе с антигеном по сравнению с контролем определяют сенсибилиэацию организма вирусом гриппа. В сравнении с прототипом увеличивается точность способа в

1,8 раза и способ упрощается за счет исключения процедуры выделения лейкоцитов иэ проб крови.

Фи дую пробу), капилляры ставят в штатив, по следний помещают в горизонтальном положении в термостэт при 37 С на 30 мин. Для постановки реакции используют стекля нные градуированные капилляры и штативы, предназначенные для определения скорости оседания эритроцитов по микрометоду

Панченкова. При этом капилляры заполняют кровью до метки 50. После инкубирования содержимое капилляров сливают в отдельные пробирки, капилляры дважды промывают равным объемом физиологиче.ского раствора, сливая его в те же пробирки, и производят подсчет лейкоциты. Затем вычисляют число прилипших лейкоцитов (ПЛТ) к каждому капилляру (в7ь) по формуле

П = 100, где П -количество поили лшил лейкоцитов, ;.

А-исходное количество лейкоцитов в1 мм;

В вЂ” количесTв<> нышедня>, лейкоцитов 13

1 мм, При расчете BIIOO>>l поправ<и, учи> 1,>на;> разведение кров>л раст>)ором аптигена и ф>1зиологическим раствором при промывке i B пилляров, llèÔðonoé м,>>ериал по прилипаеллост>) леси oli!lro!3 (П!7) >30 1<а>,ILOL пробе (3 -4 капилляра) обраба>ынаlof; атистически с вычислением M+ rrl, Если ПЛ i>oil влиянием антиге>>а по сравнению с контролем повышается достоверно (P < 0,05), то

РЕЗУЛЬтат РЕаКЦИИСЧИт >10t Пг,с>>1<нтв)»,III!Il, свидетельству>ош>1>1 0 >>а<> l > r,»>ïпоз>10; сенсибилизации орга>>изма

Past>0cTb (в g) Itp!>)It>t>B!-. r 3 лни коцитов межд 1«>r>t t)r>лс>r> (lii . 1» бе-: тИГЕНа) И ОПЫ>ОМ (ПрОба 0с:> с>>ГЕ>1<»1) используют в качес>ве ил>те>1)а>11 >10>0 показателя напряженное>и клеточ>>ого иммунитета и сенсибилизаци>>организма.

Антигены ьчлр >сов i pi tf>rfa I 0 to«B I з;.>1),1 нее. Вирусы гриппа раз>1>10>ка>01»а рг>:)нл>

ВаЮщИХСя КурИНЫХ ЭМбрИОНаХ, СОораННспо вируссодержащую аллантоисну>0 жидкость очищают и концентриру>оr методом ультрацентрифугирования B Iрадиенте пло)ности сахарозы. инактивируют формалином, освобождаютот микробной флоры и бактериальHblx прод>/KTQB ультрнфнль 17) .>цс><1> i "с с - с каскад миллипоровых >с>ел>бр>3 >, ° - пул >руЮт И СОХРаНЯЮт ПРИ 1-4"С. ПОДОбн;ья 1.;С:,.ЛОГИя ПрИГОтОВЛЕНИя ВИруо»ОГО К>> ...,.>, с:. соответствует технологии п;.< l;i ),:,>с:., >..> инактивированной гри lr303IIULl н,)лци>31., При добавлени>л к вирусной сус>>ензии стабилизатора B виде cbtBopoTO!I>otс чело веческого альбумина (конеч >>ая > он>>е>>тра ция 0,2® содержание антиге>>а выражае) н гемагглютиниру>ощ>лк единицах (l АГ) без добавления вЂ” B микрограммах белка, определяемого по ."пури. Возможно применение в качестве антигена гриппозной инактивированной вакцины Принят, и ilB тод изготовления вирусного материала r;3рантирует его чистоту, стандарг>>ость, стерильность и возмо>кность д>>игельл>о>о ранения. Степень очистки вирусного материала по белку вЂ” не менее 987;.

Антигенный материала по вышеуказанной технологии получа>от из штаммов нируса гриппа A(PR)8/34 (Н1М1); А(Киегэ)59/79H (H1N1); А(Чили) 7/83/R2 (H1N2); А(Ленинград) 385!80Я (НЗМ2), А(Ф>>липпил>ы)59/1 (H3N2); Х-79 (H3N2), А(ГЛиссисипи)1/85 (H3N2), а также из влруса болезни Ньюкасл (вакцинный штамм Н) и вируса парагриппа

1 типа Сендай Е-109, Пример 1. Добровольца (серологический N. 97) вакцинируют вирусом гриппа

А(Новошахтинск)3/86/15 (11N1). кандида>о> . Ii >вые > риппозные вакцины, интраназал»,>о н дозе 0,5 мл (биг)логическая актив»ос) t 70 ЭИД 50/0,2 мл). Производят ревак>Зина><и о 3>и>.1 же виоусом и в той же

5 до е. Гитрн> ltl Ltråìàcfrtêët>ítíoB в сывороп 0 л:3>1)н 1 определяют по реакции тормо)кснин >с м 1>г)>>оти>эаиии с тем же виругом в

IIr ход>>ом периоде, т.е. чере.-. 74 дней после иа><ц>>нац>)и и 14 дней после ресакцинации, 10 Состояние сенсибилизации организма вирусом гриппа определяют в исходном пер;>оде (до вакцинации) на трегий и четыр»,))itLàrI,IL> p>II> посrto вакцинации и 14 дней

Ii0cBlB ренак>3>1>>а>Зли. F3 ка«ее гне ан) >лге>>а

3 ) I C l i 0 rl i 3 у >< > Т > i t > " 1 11 Г>11 >) 0 Н а Н >1 Ь с с . B t l p у С r p Ll > iiir /",ii1Bi )»,,,3 l<.> Г а> Г>><<Э>»<с>й фОрыуЛОй i i I I 1, i.,.r! t nt l С. Н, Н >,,i>С> .:It 1ii«>>с>С,у LITBM

>.О<;03)жаЛН С Го> .аГГЛ>с тИН На вЂ” 2560

У./i). ) ЛЛ ЕРГ)13Ь >1.>! C:.Bt ) il! )3 >К1ЕВСсЙ ВЕ., >Н 11;,:r;.,« Н К: . тГ>С -Нт.ЛКОаГУЛЯНта ГЕi i >Н Н д<)З 0 Ед.lt>нц/ >r> 1 ",;. !ii;.,>I3;.,Г:.Ссдсрж:>С> Е ЛЕйКоцИтОВ 7, > . 1 >»1, л>с> 1).>ь;,я лейл пцитарные меланже3 /-,-Нука у .с< I уЮ КИСЛОГу дЛя ЛИЭИСа ,)>.) ...ip0iIi тон с; > амеру I орлев-3 Кровьраэли«а>03 fto 0, > м» н две силикон>>эированные про;н>рки. В одну itpot.)vp>от 0,2 мл

::«.,, ãi .н; i »» 3 1 13, )руl у> >(кол>ipo ь) вЂ” 0,2 мл .,>)с<7;03 ен;10 с> ф 131>о<>оги»еского раствора 3 (-, i,4»ioc)3>; пе,)емеыиванич и инкубиро; .»,ii < 3,,iIi i1f;i >,i / Г. Содоржлltlt lf> КаждОй

)0i)!p: L запоя;>rt>0T 4 капилляра до метки

< Пс>>1 >яр> I Стаая r В lilTBTtlB, ПОСЛЕдНИй

1 "О>лощс) с) i 13 3 <)7)иэоllтаЛЬНОМ ПОЛОЖЕНИИ В ,)" ii.рм0ст;>3 на 30 ми> прл 37"С. После инкуб>щии сод с> с< .л>ос каждого капилляра слив»or . >>дельну з пробирку, дважды

Itpr3,,:;r;3 oг физиологическим pdcTBopoM, 1>абс>РОЯ r>0слеДний ДО i >01Kи 50 il сливаЯ B

40 )у >ке пробирку, В пробирке определяют коf»l IecrB0лейкоцитов B 1 мм, используя лей3 коцитарные меланжеоы. 3;ь-ную уксусную

;3>слоту и камеру Горяева, Далее рассчитыг)лю> 1ро>,с:> rip iil >rltLILI> лейкоцитов по

45 у:.: зан>>ой >i>pi.3уле для каждого капилляра в >:.»! ip лг, и опыте,. После статистической обрабо) ки материала с вычислением М + ITI

ii дссгонepi

r;B ан)иге>>а и с антигеном определяют на50 пря>кенность клеточного иммунитета и сенсибилизации организма вирусом гриппа путем вь>читал>ия $ 1Л в контроле йз ПЛ

r or3ыте.

В исходно>1 периоде, т,е до вакцина55 17ии. добавление антигенов вируса гриппа не г>ри>)ело к изменениям ПЛ. Напротив уже к третьему дню и особенно к четырнадцатому дн>0 после вакцинации наблюдали эначитсльное повышение ПЛ Повышение ПЛ составило 2>) „, по сравнению с контролем

1635140

Формула изобретения

Составитель В.Литовченко

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор Л.Пилипенко

Редактор А.Ревин

Заказ 754 Тираж 412 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул Гагарина, 101

После ревакцинэции ПЛ также несколько повысилось до 30 в сравнении с контролем. Титр антигемагглютининов увеличился в 4 раза через 2 недели после вакцинации (положительная сероконверсия) и не изме- 5 нился после ревакцинации.

Результаты опыта подтверждают, что после иммунизации живой гриппозной вакциной развивается состояние сенсибилизации организма к вирусу гриппа. апре- 10 деляемое предлагаемым способом, основанным на реакции повышения прилипаемости лейкоцитов.

В сравнении с прототипом увеличивается точность определения сенсибилизации 15 организма вирусом гриппа при использовании предлагаемого способа.

Так, коэффициент вариации по прототипу почти в 2 раза превышает аналогичный по предлагаемому способу (47 против 20

25ф,), т.е. точность увеличива тся в 1,8 раза.

По сравнению с прототипом наблюдается и упрощение способа эа счет исключения про- :. цедуры выделения лейкоцитов иэ исследуемой крови.

Способ определения сенсибилизации организма вирусом гриппа. включающий иммунизацию, забор крови в две пробы, подсчет количества лейкоцитов, инкубацию проб с антигеном с последующим учетом реакции в капиллярах, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и упрощения способа эа счет исключения этапа выделения лейкоцитов, в качестве антигена используют очищенный вирус гриппа с последующим подсчетом числа прилипших к стенкам капилляра лейкоцитов и при повышении числа прилипших лейкоцитов в пробе с антигеном по сравнению с пробой беэ антигена определяют наличие сенсибилиэации организма к вирусу гриппа.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии

Способ определения активности протеолитических ферментов // 1631433

Изобретение относится к энзимологии и может быть использовано для определения протеолитической активности ферментных препаратов в клинической биохимии

Способ дифференциальной диагностики ограниченной и системной форм склеродермии у детей // 1631432

Способ отделения трипаносом от форменных элементов крови // 1631431

Изобретение относится к экспериментальной ветеринарии, в частности к способам выделения трипаносом из крови инвазированных животных для приготовления биологических препаратов

Способ диагностики саркоидоза // 1631430

Изобретение относится к медицине, может быть использовано для диагностики саркоидоза внутригрудных лимфатических узлов и легких в случаях сомнительного диагноза

Способ определения индивидуальной чувствительности к иммуномодулирующим препаратам больных с нейроаллергическим синдромом нейроинфекционного происхождения // 1631429

Изобретение относится к области медицины , преимущественно к невропатологии, и может быть использовано для лечения больных подострыми и хроническими формами церебральных нейроинфекций

Способ прогноза течения острой пневмании // 1629850

Изобретение относится к медицине , а именно к пульмонологии, и может быть использовано при лечении больных острой пневмонией

Способ определения индивидуальной чувствительности больных бронхиальной астмой к тималину // 1629849

Изобретение относится к медицине , в частности к аллергологии

Способ определения иммунологической реактивности организма // 1629848

Изобретение относится к медицине и может найти применение в диагностике спефицического клеточного иммунитета при острых и хронических заболеваниях инфекциошго-аллергического или аутоиммунногогенеза.Цель изобретения - повышение точности за счет определения рецепторного аппарата лимфоцитов и фагоцитов

Способ прогнозирования течения послеоперационных гнойно- воспалительных осложнений // 1629847

Изобретение относится к медицине в частности к хирургии и иммунологии , и может быть использовано для , прогнозирования послеоперационных осложнений

Способ диагностики ранних отклонений в иммунном статусе новорожденных детей // 2101707

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для диагностики ранних отклонений в иммунном статусе новорожденных

Способ выявления высокоаффинных поли- и моноклональных антител к водонерастворимым гаптенам // 2102080

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к методам иммунохимического определения гаптенов (ксенобиотиков) в образцах биологического происхождения и объектах окружающей среды, и может быть использовано для выявления высокоаффинных поли- и моноклональных антител к водонерастворимым гаптенам

Иммуногенная композиция против боррелиоза лайма, способ иммунизации млекопитающего против боррелиоза лайма, способ получения белка pc borrelia burgdorferi, диагностический агент для обнаружения b.burgdorferi и способ обнаружения антител к b.burgdorferi // 2102081

Изобретение относится к предотвращению болезни Лайма у млекопитающих

Устройства для автоматического проведения иммуноанализа за несколько последовательных этапов по меньшей мере одного биологического вещества из множества биологических образцов, способ и реактив для применения указанных устройств // 2102758

Изобретение относится к устройству для автоматического проведения иммуноанализа за несколько последовательных этапов по меньшей мере, одного биологического вещества из множества биологических образцов, а также к способу и реактивам для использования указанного прибора

Способ обнаружения или количественного определения аналита в образце // 2102759

Изобретение относится к анализам и, в частности к катализируемому осаждению репортера через активированный конъюгат для усиления детектируемого сигнала, вследствие чего улучшается детекция и/или количество аналита в образце

Способ обнаружения или количественного определения аналита в образце // 2102759

Способ определения биологически активных веществ в жидкостях и устройство для его осуществления // 2102760

Изобретение относится к области медицины, медицинской техники, ветеринарии, экологии и может быть использовано для определения биологически активных веществ в любых биологических жидкостях, окружающей среде, пищевых продуктах, в частности в диагностике вирусных, бактериальных, паразитарных и соматических заболеваний, а также для контроля эффективности лечения

Способ диагностики спаечной болезни брюшины у детей // 2103689

Изобретение относится к медицине, а именно к детской хирургии и клинической иммунологии, и может быть использовано для диагностики спаечной болезни брюшины у детей, оперированных по поводу острого аппендицита

Способ определения функциональной активности лейкоцитов при беременности // 2103690

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и может быть использовано для оценки состояния иммунной системы беременной женщины

Способ диагностики хронического простатита // 2103691

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для диагностики хронического простатита