Способ определения антибактериальной активности пестицина 1 jersinia реsтis
„„SU„„64 611
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСГжЛИН
Al щ) С 12 Q 1/04
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
IlO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPblTH$94
ПРИ ГКНТ СССР (21) 4397002/13 (22) 23 ° 03.88 (46) 23,04.91. Бюл.11г 15 (71) Научно-исследовательский противочумный институт Кавказа и Закавказья (72) В.И.Зацепин (53) 576.8.093.1(088.8) (56) Новосельцев Н.Н. О бактериоциногенности, P.pestis. — Генетика, биохимия и иммунохимия особоопасных инфекций, вып.1. Изд.во Ростовского университета, с.24-30., (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИБАКТЕРИАЛЪНОИ АКТИВНОСТИ ПЕСТИЦИНА
YERSINf А РББTIS (57) Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано
",при исследовании бактериоциногенной
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при . исследовании бактериоциногенной ингибирующей активности культур чумного микроба.
Цель изобретения — повышение точности способа.
Определение неспецифической ингибирующей активности.
Пример.i, В пробирку контрольной пробы с 4 мл жидкой питательной среды вносят бактерии индикаторного штамма в объеме 0,1 мл из предварительно приготовленной,бактериаль| ной суспензии суточной культуры в, физиологическом растворе с концентра2 ингибирующей активности культур чумного микроба. Цель изобретения— повышение точности способа. Исследуемую культуру выращивают, центрифугируют и полученный супернатант разделяют на две пробы. Одну пробу прогревают, другая проба — интактная.
Супернатанты вносят в пробирки с жидкой питательной средой в объемном соотношении (1:3)-(1 4), а затем засевают индикаторнуютест-культуру. Посевы инкубируют и определяют оптическую плотность, на основании которой вычисляют общую (интактный супернатант) и неспецифическую (прогретый суперна, тант) ингибирургщие активности. Спе- а цифическая антибактериальная активность песшицина 1 представляет собой разность между общей и неспецифичес кой активностями. цией 4 ° I OSM.к./мл. В пробиркуг опыт ной пробы с 3 мл жидкой питательной среды вносят 1 мл инактивированного супернатанта пестициногенного штамма чумного микроба 1?, затем вносят такое же, как и в контрольную пробу, количество бактерий индикаторного штамма Y. pseudotuberculosis IIi По-севы контрольной и опытной проб инкубируют в термостате при 37 С в течение 18-20 ч, а затем нефелометрически определяют показатель роста бактерий индикаторного штамма в еди1 ницах оптической плотности (В).
В „=0,196(опыт) . Вк=0,264(контроль) .
При этом ингибиру щая активность И
16436!1 равна 25,8X. Неспецифическая ингибирующая активность инактивированного супернатанта пестициогенного штамма чумного микроба 17 равна 25,8 ..
Пример 2. В,пробирку контрольной пробы с 4,5 мл жидкой питательной среды вносят бактерии индикаторного штамма в объеме 0,1 мл из предварительно приготовленной бактериальной суспензии суточной культуры в физиологическом растворе с концентрацией 4,5 ° 10 м.к./мл. В пробирку опытной пробы с 3,5 мл жидкой питательной среды вносят 1 мл интактного супернатанта апестициногенного штамма чумного микроба К=1, затем вносят такое же, как и в контрольную просу, количество бактерий индикаторного штамма. Посевы контрольной и опытной проб инкубируют в термостате при
37 С в течение 18-20 ч, а затемнефелометрически определяют показатель роста бактерий индикаторного штамма в единицах оптической плотности (О).
Don =0,200, 1) =0,262, И=23, 7Х .
Неспецифическая ингибирующая активность интактного супернатанта апестициногенного штамма чумного микроба
К-1 равна 23,7 .
Пример 3, В пробирку контрольной пробы с 5 мл жидкой питательной среды вносят бактерии индикаторного штамма в объеме 0,1 мл из предварительно приготовленной бактериальной суспензии суточной культуры в физиологическом растворе с концентрацией
5 ° 10 м.к./мл. В пробирку опытной пробы с 4 мл жидкой питательной среды вносят 1 мл инактивированного супер- 40 натанта пестициногенного штамма чумного микроба ЕВ НИИЭГ, затем вносят такое же, как и в контрольную пробу, количество бактерий индикаторного штамма. Посевы контрольной и опытной 45 проб инкубируют в термостате при
37 С в течение 18-20 ч, а затем нефелометричежи определяют показатель роста бактерий индикаторного штамма в единицах оптической плотности (0).
В,„=О,21О, В„=О,266, И = 21,1Х.
Неспецифическая ингибирующая активность инактивированного супернатанта пестициногенного штамма чумного микроба ЕВ НИИЭГ равна 21,1X„
П р и и е р 4. Определение анти55 бактериальной активности пестицина 1 у супернатантов культур чумного микроба .
В физиологическом растворе готовят суспензию бактерий индикаторного штамма (Yersinia pseudotuberculosis
В 1) с концентрацией 4 10 м.к./мл.
Интактный супернатант.
В пробирку опытной пробы вносят
3 мл жидкой синтетической питательной среды и 1 мл интактного супернатанта штамма чумного микроба Оттен 106, В пробирку контрольной пробы вносят 4 мл этой же питательной среды.
Затем в пробирки опытной и контрольной проб вносят по 0,1 мл указанной суспензии бактерий индикаторного штамма, Посевы опытной и контрольной проб инкубируют при 37 С в течение 18-20ч, после чего нефелометрически определяют показатель роста бактерий индикаторного штамма в единицах оптической плотности (D). ,D(,п=О,0l8, Пк = 0,269, И = 93,3, Таким образом, величина общей ингибирующей активности интактного супернатанта исследуемого штамма чумного микроба равна 93,3Х.
Прогретый супернатант. Параллельно в пробирку опытной пробы вносят 3 мл жидкой синтетической питательной среды и 1 мл прогретого супернатанта (прогревание при
65-70 С в течение 25-30 мин) исследуемого штамма чумного микроба.
В пробирку контрольной пробы вносят 4 мл этой же питательной среды. Затем в пробирки опытной и контрольной прор вносят по О,l мл указанной суспензии бактерий щ дикаторного штамма.
Посевы опытной и контрольной проб инкубируют при 37 С в течение 18-20ч, после чего также определяют показатель роста бактерий индикаторного штамма в единицах оптической плотности и вычисляют ингибирование. оп =0,1-95 D„=- 0,269, И=27,5Х.
Таким образом, величина антибактериальной активности прогретого супернатанта исследуемого штамма чумного микроба составляет 27,5Х (неспецифическая ингибирующая активность).
Антибактериальная (ингибирующая) активность интактного супернатанта (93,3Х) представляет собой суммарную активность, состоящую из специфической и неспецифической антибактериальных активностей.
164361) Составитель А.Завадская
ТехРед М.Моргентал КоРРектоР О.КРавцова
Р еда кто р Н ° Ро гулич
Заказ )22) Тираж 368 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент". г.ужгород, ул. Гагарина,101
Действительную величину специфи" ческой антибактериальной активности пестицина 1 определяют вычитая из значения суммарной ингнбирующей (ан-.
5 тибактериадьной) активности интактного супернатанта (93,3X) величину неспецифической ингибирующей (антибактериальной) активности прогретого супернатанта (27,5Ж), 10
Таким образом, величина специфической антибактериальной активности пестицина 1 интактного супернатанта исследуемого штамма чумного микроба составляет 65,8Х. 15
Таким образом, способ определения антибактериальной активности пестици" на 1 чумного микроба в отличие от известного позволяет отдифференцировать ее от неспецифической антибактери- 20 альной активности и дать ей количественную характеристику.
Формула изобретенияСпособ определения антибактериальной активности пестицина 1 Yersinia
pes ti s путем параллельного посева интактного и прогретого супернатантов исследуемой пестициногенной культуры чумного микроба в питательные среды с последующим внесением суспензий тест-культуры Yersinia pseudotuberculosis )) 1, инкубированием посевов и учетом ингибирования роста тест-культуры,, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности способа, посев осуществляют в жидкую питательную среду при обьемном соотношении супернатант: питательная среда ():3)-(1:4), учет ингибирования роста тест-культуры проводят по оптической плотности посевов и .антнбактериальную активность пестицина 1 определяют по общей и неспецифической ингибирующим активностям.
