Питательная среда для глубинного культивирования bacillus suвтilis вкпм в-2595 - продуцента l-амилазы

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР (21) 4494601/13 (22) 19. 09. 88 (46) 30. 04. 91 . Бюл. Р 1 б (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии

Госагропрома СССР (72) Б.А. Устинников, Н„В. Цурикова, Н.Н. Воронцова, Е.А. Двадцатова, Л.И. Волосова и И.Ф. Полякова (53) 663.15(388.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Р 840099, кл. С 12 С 7/04, 1981.

Авторское свидетельство СССР й1 1094297, кл. С 12 N 1/20, 1982.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к питательным средам для культивирования микроорганизмов, и может быть использовано при промышленном получении амилолитических ферментных препаратов путем глубинного культивирования щтамма Bacillus subtilis ВКПМ В-2595 для гидролиза крахмалсодержащнх веществ, Цель изобретения — повыщение активности продуцента и снижение себестоимости амилолитических ферментов.

Изобретение осуществляют следующим образом.

„.SUÄÄ 1645291 А 1 (51)5 С 12 N 1/20, 9/28 //

//(C 12 N 1/20, С 12 R 1:125) «ь..

2 (54) 161ТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ГЛУБИННОГО

КУЛЬТИВИРОВИП1Я BACILLUS SUBTILIS

В1011 1 В-2595 — ПРОДУЦЕНТА OC -А1ЧИЛАЗЫ (57) Изобретение относится к биотехнологии, а именно касается состава питательной среды для культивирования продуцента g-амилаэы Вас. subtilis В-2595, используемой для гидролиза крахмалсодержацего сырья. Цель изобретения — увеличение активности продукта и снижение его себестоимости. Изобретение заключается в том, что в среду вводят в качестве дополнительного источника азота и серы сернокислый амионий, сухие кормовые дрожжи и тиамин при следуюцем соотношении компонентов, мас.Х: кукурузная мука 12-20; (t&4) S04 0,6-1,3; сухие кормовые дрожжи 0,3-0,6; тиамин

0,0033-0,0045; мел 0,2-0,5; мочевина

0,4-0,5; вода до 100. Среда обеспечивает активность О -амипазы до

240 ед/мп. 4 табл.

Продуцент Bacillus subtil is ВКПИ

В-2595 (82) культивируют на среде, содержащей в качестве источника углерода кукурузную муку, в качестве источника азота — мочевииу и дополнительно сухие кормовые дрожжи и сернокислый аммоний, являюцийся одновременно источником серы, а также тиамин,> мел и воду при следующем соотношении компонентов, мас. Х:

Кукурузная мука 12-20

Сернокислый аммоHHft 0,6-1,3

1645291

Сухие кормовые дрожжи с содержанием сырого протеина 40 и СВ—

92Х 0,3-0,06

Ти а он ° 0,0033-0,0045

Иочевина 0,4-0,5

Иел 0,2-0,5

Вода До 100

Прн введении комплекса компонентов (сухих кормовых дрожжей, тиамина и сернокислого аммония) сера, вхоДящая в состав сернокислого аммония, включается в белок, вводимый с кормовыми дрожжами, и стимулирует биосинтез ф, -амипазы с одновременным разрунением оболочки клетки и выделением р -амкпазы в среду, а тиамин обогащает среду биологически активными компонентами, в том числе и серой.

При раздельном введении компонентов активность 06 -амилазы снижается, что видно из табл. 1. 25

Присутствие кормовых дрожжей резко подщелачивает питательную среду, что, в свою очередь, положительно влияет на разрушение (лизис) бактериальных клеток, приводящее к дополнительному выделению эндогенной 0 амилазы, а следовательно, и повышению активности.

Используют гостированные сухие кормовые дрожжи, содержащие сухих веществ 90-92/, протеина — не менее

403.

Активность g,-амилазы определяют стандартным методом.

В табл. 2 приведены сравнительные данные активности g-амнлазы, синтезируемой Bacillus .subtilis-82 и известными ытаммами.

Изобретение иллюстрируется примерамии.

Пример 1, Культуру В.subtilis — 82 вырацивают глубинным спосоо бом в течение 60 ч при 35 С на качалке (220 об/мин) на ферментационной среде слецуюцего состава, мас. .:

Кукурузная мука 14,0

Сернокислый аммоний 0,6

Мочевина 0,4

Кормовые дрожжи 0,3

Тиамин 0,0033

Иел 0,5

Вода До 100

Контролем служит ферментационная среда следующего состава, мас.%:

Кукурузная мука 6,0 (ИН4)г нР04 0,9

Иел 0,2

Мочевина 0,15

Барда Остальное

Полученные при этом активности ф;амилазы составляют соответственно

150,0 и 60,0 ед/ип.

Пример 2. Культивирование продуцента осуцествляют глубинным способом в течение 72 ч при 35 0 на качалке (220 об/мин) на среде следующего состава, мас. %:

Кукурузная мука 20 (КН4)гяо 1,3

Мочевина 0,5

Кормовые дрожжи 0,6

Мел 0 5

Тиамин 0,004

Вода До 100

Активностью -амилазы составляет

240 ед/ил.

Пример 3. В. subtilis-82 выращивают глубинным способом в течение 72 ч при температуре 35 С на качалке на питательной среде следующего состава, мас„ :

Кукурузная мука 14,0 (Н4)гБО4 1,3

Тиамин 0,0045

Мочевина 0.45

Кормовые дрожки 0,5

Иел 0 35

Вода До 100

Активность фермента составляет

170 ед/мл.

Таким образом, реализация изобретения позволяет повысить активность gC амилазы аа счет использования новой питательной среды, В табл„ 3 и 4 приведен состав среды по изобретению и известной питательной среды и активность g,-а1Иилазы при выращивании, Bacillus subtilis-82 на этих средах.

Таким образом, питательная среда обеспечивает повынение ф -амилазной активности, что ведет к увеличению выхода, снижению себестоимости фермента. формула изобретения

Питательная среда для глубинного культивирования Bacillus subtilis

ВКПИ В-2595 — продуцента 06-амилазы, содержащая кукурузную муку, мел мо6

Кукурузная мука 12-20

Сернокисльп» аммоний 0,6-1,3

Сухие кормовые дрожжи 0,3-0,6

Ти амин 0,0033-0,0045

Иел 0 ° 2-0 5

Иочевина 0,4-0 5

Вода До 100

1645291 чевннуи воду,о т л н ч а ю щ а я с я тем, что, с целью увеличения активности продуцента и снижения себестоимости продукта, среда дополнительно

5 содержит сухие кормовые дрожжи, сернокислый амиони»» и тиамин при следующем соотноыении компонентов. мас. Ж:

Таблица 1!

Иел

ТиаВоАктивКукурузная

НоСухие кормовые чевида ность

OC-a wrлазы, ед/мл на дрож+ +

+ +

Та блица 2

Название штамма

Лктивность

g -а»»ила зы по ме- по стантоду

Вера дар тному методу

Bacillus subtilis-82 3120,0

Bacillus subtilis-65 553,5

Васillus subtilis

ВНИИ генетика — 42 2625,0

240,0

42,6

125,0

П р и м е ч а н и е. Среда — предложенная.

Таблица 3

Компоненты питательной среды

Содержание компонентов

Известный

Предпагаемый состав

2 3 g 4

1 5 1 ) 2

25 6 12

20

1,3, 0,9

1,5

0,5

0,6

0,7

0,006

0,6

0,6

0,4

0,0035

0,4

0,45

0,6

0,0045

0,5

0 5

0,1

О, 001

0,1

0,3

0,3

0,0033

0,2

0,4

0,2 0 5

0,15 0,2

Кукурузная мука

Сернокислый аммоний

Сухие кормовые дрожжи

Тиамин

Иел

Иочевина

Сернокисльп» аммоний

+ 240,0

+ 120,0

+ 125,0

+ 160,0

+ 180,0

+ 165,0

1645291

Таблица 4

Известная

Наименование показателей

100

150 240 170 130 130

Составитель E. Воробьева

Редактор А.Каковская Техред М. Дидыс КорректОр М. Бароаи

Заказ 1322 Тирам 384 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

Активность g-амилазы, ед/мл е ф@ »

Питательная среда

Предлага емая — — — ——

1 2 3 4 5