Способ получения генетически трансформированных растительных объектов

 

Изобретение относится к клеточной и генетической инженерии, а именно к получению клеточных линий и растений с новыми наследственными свойствами. Целью изобретения является трансформация как одиночных клеток, так и клеток в составе растительных структур различных видов растений и повышение количества трансформированных клеток. Способ получения генетически трансформированных растительных объектов состоит из следующих этапов: подготовка объекта-реципиента и трансформирующих факторов, изготовление микроинструмента, фиксация микроинструмента и объекта в камере, дополнение микроиглы трансформирующим фактором, введение иглы в объект-реципиент, инъекция , перенос инъецированных объектов на питательную, а затем на селективную среду, отбор трансформантов и регенерация трансформированных растений.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

n>)s С 12 N 15/82

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3970621/13 (22) 25.10.86 (46) 15.12.91, Бюл. М 46 (71) Институт ботаники им. Н.Г.Холодного (72) П. В,Мельников, Т.П.Пастернак, Ю.Ю. Глеба и К.M.Сытник (53) 577.2(088.8) (56) Nagata Т. Etposomes as a carrier of

Tlploymid into pratoplasts dn.,Molecular

genetics of the bacterial-plant !птегасбоп/

Ed. by А.Puhler, Sprlngerverlag, BerilnHeldeiberg, 1983, р.268-273. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИ

ТРАНСФОРМИРОВАННЫХ РАСТИТЕЛЬНЫХ ОБЪЕКТОВ (57) Изобретение относится к клеточной и генетической инженерии, а именно к получению клеточных линий и растений с новы.I

Изобретение относится к клеточной и генетической инженерии, а именно к получению клеточных линий и растений с новыми наследственными свойствами.

Целью изобретения является трансформация как одиночных клеток, так и клеток в составе растительных структур различных видов растений и повышение количества трансформированных клеток, Предлагаемый способ состоит. из следующих этапов: подготовка объекта-реципиента (выделение протопластов, клеток, каллусов, получение меристели и эмбрионов и т.д.), подготовка трансформирующих факторов (выделение плазмид, митохондрий, хлоропластов), изготовление микроинструмента. фиксация микроинструмента и фиксация обьекта в камере (присоска, заливка в агар и механическая фиксация), заполнение иглы

„,. Ы„, 1698291 А1 ми наследственными свойствами. Целью изобретения является трансформация как одиночных клеток, так и клеток в составе растительных структур различных видов растений и повышение количества трансфорл:ированных клеток. Способ получения генетически трансформированных растительных объектов состоит из следующих этапов. подготовка объекта-реципиента и трансформирующих факторов, изготовление микооичстр, мента, фиксация микроинструмента и объекта в камере, дополнение микроиглы трансформирующим фактором, введение иглы в объект-реципиент, инъекция. перенос инъецированных объектов на питательную,. а затем на селективную среду. отбор трансфоомэнтов и регенерация трансформированных растений, l трансфармируюшим фактором (либо с кончика иглы, либо с противоположного конца), введение кончика иглы в объект-реципиент, инъекция, перенесение иньецированных обьектов на -питательную среду, перенос объектов на селективную среду, отбор трансформантов, регенерация трансформированных растений.

Пример 1, Инструменты для манипуляций изготавливают из стандартных заготовок — стеклянных капилляров диаметром

1 мм на микрокузнице. Используют три вида инструмента: микроиглу, диаметр кончика менее 1 мкм, микроприсоску, диаметр 10 мкм и коллектор для отбора инъецированных объектов, диаметр 100 мкм.

Протоплэсты, выделенные из каллусэ

Nicotlana debneyi по стандартной методике, помещают в микрокэмеру в стерильном ламинарном боксе. С помощью комплекса

1698291

Составитель Н.Куэенкова

Техред М,Моргенгал Корректор Н Реве".aÿ

Редактор ТЛаэоренко

Заказ 4368 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент", г. У I

Пример 3, Получают микроколонии клеток Lycopersicon esculentum из одиночных клеток, В камеру помещают микрокогонию в arape, в одну из клеток вводят микроиглу и выдавливают плазмиду

pGVO319, При введении в 95 микроколоний получено 18 клеточных линий, способных к росту на безгормонал ной среде, Эффективность трансформации составляет 19 lo.

Трансформированные микроколонии переносят на питательную среду.

Пример 4, В корневой волосок

Trlamea bogotensis .",бесцветная, не сод;ржащая хлоропластов клетка) в 10 опытах были введены хпороп:acòû Nlcotiana

tabacum. Для этого растение Т.bogotensis помещают в камеру на предметном столике микроскопа и через микроиглу диаметром кончика 3-5 мкм выдавливают хлоропласты.

Хлоропласты в микроиглу набирают с пр.

5 тивоположного конца, После иньекц:,и растение помещают в среду для выращивания, Через неделю после введения х;оропласты были найдены в 9 клетках — корневых волосках, значительно выросших эа это вре10 мя.

Эффективность предлагаемого способа заключается в значительном повышении эффективности трансформации растительных клеток до 10-20; по сравнени,о с мак15 симально достигаемым (1 ф,) уровнем у известных способов; универсальности по отношению к обьектам-реципиентам и трансформирующим фак горам; стандартности манипуляций. необходимых для получе20 ния широкого круга трансформантов, вовлечении в генноинженерные манипуляции широкого круга сельскохозяйственно важных растений, например злаковых.

Формула изобретения

25 Способ получения генетически трансформированных растительных обьектов, о тличающийся тем,что,сцельютрансформации как одиночных клеток, так и клеток в составе растительных структур

30 различных видов растений и повышения колл- ества трансформированных клеток, трансформацию осуществляют выдавливанием экэогенного молекулярно-гене.i.è÷åского материала и автономию

35 реплицирующихся клеточных органелл через микроиглу, введенную в клетку, с последующей селекцией кле очных линий и растений с новыми наследственными свойствами.