Способ получения средства, обладающего иммуномодулирующей активностью

 

Использование: изобретение относится к медицине и касается способа получения средства, обладающего иммуномодулирующей активностью, из сырья растительного и животного происхождения. Цель - повышение специфической активности средства. Сущность изобретения: экстракции водой при 100°С в течение 20 мин подвергают растительное сырье при следующем соотношении компонентов: трава багульника болотного - 80 г, трава чистотела большого - 60 г, корневища с корнями левзеи сафлоровидной - 200 г, полученный экстракт фильтруют , добавляют пчелиный мед - 300 г, и полученную смесь электролизуют в течение 2 ч, после чего отбирают щелочную фракцию - целевой продукт. Положительный эффект: полученное средство обладает более выраженной иммуномодулирующей активностью , чем экстракт левзеи. 1 ил., 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (s1)s А 61 К 35/78

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4386267/14 (22) 29.02,88 (46) 07.05.92, Бюл. М 17 (75) Н.е. Задорожная (53) 615.31(088.8) (56) Соколов С.Я., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям. — М.: Медицина, 1984, с. 29, (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ (57) Использование: изобретение относится к медицине и касается способа получения средства, обладающего иммуномодулирующей активностью, из сырья растительного и животного происхождения. Цель — повышеИзобретение относится к медицине и касается способа получения средства, обладающего иммуномодулирующей активностью, из сырья растительного и животного и роисхождения.

Пример. Измельчают траву багульника болотного 80 г, чистотела большого 60 r, корни левзеи сафлоровидной 200 г, заливают двумя литрами воды при t=100 С и настаивают на водяной бане в течение 20 мин.

После фильтрации полученного извлечения в него добавляют 300 г пчелиного меда, доводят вновь водой т=100 С до 2 л, затем полученный полупродукт заливают в две емкости. В первую, большей вместимостью (5/6 частей полупродукта), опускают отрицательно заряженный электрод, а во вторую, меньшей вместимостью, емкостью(1/6 ние специфической активности средства.

Сущность изобретения: экстракции водой при 100 С в течение 20 мин подвергают растительное сырье при следующем соотношении компонентов: трава багульника болотного — 80 r, трава чистотела большого—

60 г, корневища с корнями левзеи сафлоровидной — 200 г, полученный экстракт фильтруют, добавляют пчелиный мед — 300 г, и полученную смесь электролизуют в течение

2 ч, после чего отбирают щелочную фракцию — целевой продукт. Положительный эффект, полученное средство обладает более выраженной иммуномодулирующей активностью, чем экстракт левзеи. 1 ил., 1 табл, часть полупродукта) — положительно заряженный электрод. Длительность электролиза

2 ч, в течение этого времени происходит полное разделение на фракции (кислую и щелочную) раствора заданной концентрации.

Для осуществления электролиза используют выпрямитель-зарядный агрегат

ВАЗ 6 — 12 — 6 — УУ с напряжением 12 В (электроды алюминиевые, расстояние между электродами 2 см).

На чертеже показана схема электролиза.

Для электролиза берут емкость 1 большей вместимости, брезентовую емкость 2 меньшей вместимости, отрицательно заряженный электрод 3, положительно заряженный электрод 4.

После отключения электрического тока фракции разделяют и исследуют на рН-мет3

1731225

35

55 ре: щелочную фракцию при -8,75; кислую фракцию при рН вЂ” 3,5, В качестве иммуномодулирующего средства используют щелочную фракцию.

Тестирование препарата in vitro на смешан ной кул ьтуре лейкоцитов человека.

Исследование выполнено на смешанной культуре лейкоцитов человека, полученных из венозной крови четырех практически здоровых лиц и четырех больных с иммунологической недостаточностью, согласно общепринятой методике, принцип которой состоит в том, что на большинство лимфоцитов теофиллин оказывает тормозящее влияние.

Теофиллинрезистентные T-лимфоциты, т.е. те, на которые обработка препаратом не влияла, обогащены клетками схелперной активностью, а теофиллинчувствительные

Т-лимфоциты, которые прекращают розеткообразование после обработки этим препаратом, обогащены клетками с супрессорной и цитоклической активностью.

B связи с этим Е-РОК с теофиллином использовали как простой, быстрый, достаточно хорошо ориентирующий метод для оценки субпопуляций Т-супрессоров и Т-помощников в норме и при различных заболеваниях.

Использовались препараты следующей концентрации: цельный препарат в количестве 0,05 мл — 0,05 мл культуры лейкоцитов; разведенный 1:10 (0,05 мл+0,05 мл культуры лейкоцитов); разведенный 1:100 (0,05 мл+0,05 мл культуры лейкоцитов); разведенный 1; i 000 (0,05 мл+0,05 мл культуры лейкоцитов}; контроль (среда 199 0,05 мл+0,05 мл культуры лейкоцитов).

Инкубация лейкоцитарной взвеси в четырех концентрациях препарата и контроле осуществлялась в течение 1 ч. Результаты исследования представлены в таблице, Из представленных в таблице данных видно, что индекс стимуляции препарата в тесте спонтанного розеткообразования был эффективным (6onee 10%) по сравнению с контролем в широком диапазоне доз от разведения i:10 до 1:1000.

На смешанной культуре лейкоцитов у больных иммунозависимой патологией индекс стимуляции был достоверно выше, чем у практически здоровых лиц и составил соответственно 1,3-1,62 и 1,18-1,33, Наиболее высокие показатели розеткообразующей способности T-лимфоцитов отмечены в разведениях препарата в диапазоне 1:100-1:1000. Эта закономерность прослеживается у всех восьми наблюдаемых человек.

Анализ активности препарата в тесте теофиллинзависимого розеткообраэования свидетельствует о достоверном повышении как теофиллинчувствительных, так и теофиллинрезистивных Т-лимфоцитов.

У больных иммунозависимой патологией индекс стимуляции теофиллинрезистивных Т-лимфоцитов был более выраженным, превышая аналогичный показатель здоровых лиц на 11% в разведении препарата 1:10, на 28 и 21% соответственно в разведениях 1:100-1:1000.

В то же время отмечалась обратная картина в показателях теофиллинчувствительных Т-лимфоцитов, которые значительно увеличивались в группе здоровых лиц и менее выражено в группе больных.

Наиболее высокие показатели индексов стимуляции в тесте теофиллинзависимого розеткообразования выявлены в разведениях препарата 1:100 — 1:1000, а по теофиллинчувствительным Т-лимфоцитам в разведении 1:100.

Таким образом, можно предполагать, что для стимуляции теофиллинчувствительных Т-лимфоцитов необходимо увеличить дозу препарата, В высоких концентрациях (цельный препарат) происходило снижение индекса стимуляции на 14% у здоровых лиц и на 12% у больных.

В других разведениях (1;10,1: i 00,1:1000) снижение индекса стимуляции не зарегистрировано (Р> 0,05).

Оценка фагоцитарной активности нейтрофилов свидетельствует о выраженной стимуляции фагоцитоза в разведении препарата 1;100 как у больных, так и у здоровых лиц, Менее выраженные сдвиги в процентном содержании фагоцитирующих нейтрофилов выявлены в разведении препарата

1:1000.

Аналогичная закономерность отмечается при анализе фагоцитарного индекса.

Таким образом, тестирование препарата in vitro на смешанной культуре лейкоцитов свидетельствует, что препарат вызывает стимуляцию клеточного иммунитета и фагоцитарной системы, Наиболее эффективными являются разведения препарата 1:100-1:1000, а для иммунорегуляторных теофиллинчувствительных Т-лимфоцитов в разведении 1:10.

Кроме этого проводились экспериментальные исследования по изучению токсичности средства, оценке его иммунотропной активности in vivo, действия на хемилюминесценцию лейкоцитов, а также на хемилю1731225 минесценцию лейкоцитов в присутствии вирусов кори и паротита.

Проведенные эксперименты свидетельствуют о том, что препарат, полученный предлагаемым способом, является иммуномодулятором и практически нетоксичен. экстракции подвергают траву чистотела и траву багульника при следующем соотношении компонентов, г/л:

Трава багульника болотного (Ledum

5 pa lustre) 40

Трава чистотела большого (Chelidonium

majus) 30

Корневища с корнями левзеи сафлоровидной (Leuzea carthamoides) 100

10 экстракцию проводят при 100 С в течение

20 мин, после фильтрации добавляют пчелиный мед 150 г, полученную смесь доводят водой до 1 л и электролизуют в течение 2 ч и отбирают щелочную фракцию.

Формула изобретения

Способ получения средства, обладающего иммуномодулирующей активностью, путем экстракции корневища с корнями левзеи и фильтрации экстракта, о.тл и ча юшийся тем, что, с целью повышения специфической активности, дополнительно

Т-спонтанные лим о иты Е-POK

1:1000

10:100

Цельный

1:10

Пациенты

1,18+0,06

1,3»-0,05*

1,24+0,05*

1,33»-0,1*

1,43 «0,09*

1,38 «0,08*

1,28»-0,08*

1,62»-0,1*

1,45»-0,08*

Здоровые больные

Сумма

91 "- 0,02

0,98 «0,023

0,95"-0,02 циты Е-РОК

Т-тео иллин е зистентные лим о

1:1000

10:100

1:10

Па иенты ельный

1,15 +-0,06

1,36+ 0,07*

1,26»-0,06

1,21 »-О, 08*

1,49 "-О, 07*

1,35»-0, 05*

1,13 »-0,04

1,24+0,06*

1,19 »-0,06

0,91 »-О, 003

0,92»-0,04

0,91» 0,03

Здоровые больные

Сумма оциты Е-POK

Т-тес иллинч вствительные лим

1:1000

10:100

1:10

Па иенты ельный

1,24»-0,06

1,11 »-0,07

1,18+.0,06

1,85 ="0,09*

1,25»-0,07*

1,55+.0,08*

2,23 «0,08*

1,28»-0,06*

1,76»-0,07".

B-лим о иты (Е

Здоровые больные

Сумма

0,87+0,05

0,88»-0, 07

О 88»-0 06

АС вЂ” РО К) 1:1000

10;100

1:10

Па иенты ельный

0,94"-0,04

1;02 «0,03 . 0,98»-0,04

1 07»-0 08

0,99 »-О, 06

1,03»-0,07

0,86»-0,05

0,88»-0,03

0,87» 0,04

Здоровые больные

Сумма

1,06»-0,06

1,03»-0,03

1,05 0,05

Фага итоз, 1:1000

10:100

1:10

Пациенты ельный

Здоровые больные

Сумма

0,96» 0,06

0,96+0,05

0,96»-0,06

0,89+.0,05

0 81»-0,03

0,85+ 0,04

2,33 «0,08*

1,580,07*

1,96»-0,08*

1,1 0,05

1,12+ 0,06

1,11 ="О, 06

Фагоцита ный ин е кс

Пациенты

1;10

10: I 00

1:1000 ельный

Здоровые больные

Сумма

1,16+0,03

1 02»-0 03

0,98» 0,04

0,94»-0, 04

0,99 »-О, 06

1,03» 0,07

0,84»-0,05

0,88»-0,03

0,87 «0,04

1,35»-0,04*

1, 03»-0, 05*

1,05="0,05*

П р и M е ч а н и я: Индекс иммуностимуляции определяли путем соотношения показателя в опытной пробе по отношению к контролю.

"*" — Статистически значимые различия с контролем P<0,05 — 0,01).

1731225

50

Составитель С,Фирсова

Техред М,Моргентал Корректор А.Ротмаш

Редактор Е.Папп

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 1528 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5