Способ приготовления электродов для количественного электрохимического определения 1,4-дигидроникотинамида аденин динуклеотида (na dh) в растворе

 

Использование: аналитическая химия, аналитическая биохимия. Сущность изобретения: концентрацию МАДН в анализируемом образце определяют методом электрохимического окисления, причем в качестве электрода используют связанный смолой слой угольных или графитовых частиц , содержащих также частицы платины или палладия. На электроде также могут быть иммобилизированы (МАД-зависимые ферменты и МАД. 4 з.п. ф-лы, 1 табл., 10 ил.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)ю G 01 N 27/48

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 4613363/13 . (86) PCT/GB 88/00338 (29.04.88) (22) 30,12.88 (46) 30,03,93, Бюл, ¹ 12 (31) 8710472 (32) 01.05,87 (33) GB (71) Кембридж Лайф Саенсиз плс (GB) (72) Хью Питер Беннетто (GB), Джерард

Майкл Делани (IE), Джереми Ричард Масон, Кристофер Фрэнк Терстон. Джон Леинг

Стерлинг, Дэвид Роберт Де Кейзер, Ульям

Генри Муллен (GB) (56) 1, I. Moiroux, P.J. Elving, Mechanistic

Aspects of the Electrochemical Oxidation of

0ihydronicotlnamide Adenine Dinucleottde (КА0Н). — Journal of American Chemical

Society, 1980, н. 102, ¹ 21, р. 6533 — 6538.

2. 1, Gorton, А. Torstensson, Н, Jaegfeldt, G. Johansson. Electrocatalytic Oxidation of

Reduced Nicotinamide Coenryme by Graphite

Electrodes Modified with an Adsorbed

Phenoxarinium Salt, Meldola Blue, — Journal

of Electroanalyticai Chemistry, 1984, v, 161, N1,,р. 103 — 120.

Изобретение относится к способу получения электрода для использования с целью количественного определения 1,4дигидроникотинамида аденин динуклеотида (ИАДН) в растворе.

МАДН и его окисленная копия НАД являются кофакторами во многих катализируемых, ферментами окислител ьно-восстановительных реакциях. В некоторых из них ферментативный субстрат окисляется в присутствии кофактора ЙАД в подходящей оксидазе или дегидрогеназе до получения в растворе МАДН, вдругих — ферментативный.. Ю „1806187 А3 (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЭЛЕКТРОДОВ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ЭЛЕКТРОХИМИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ 1,4-ДИГИДРОНИКОТИНАМИДА АДЕНИН ДИНУКЛЕОТИДА (ЙАДН) В РАСТВОРЕ (57) Использование: аналитическая химия, аналитическая биохимия. Сущность изобретения: концентрацию МАДН в анализируемом образце определяют методом электрохимического окисления, причем в качестве электрода используют связанный смолой слой угольных или графитовых частиц, содержащих также частицы платины или палладия. На электроде также могут быть иммобилизированы НАД-зависимые ферменты и НАД, 4 з.п, ф-лы, 1 табл.. 10 ил. субстрат восстанавливается в присутствии кофактора КАДН и получают раствор НАД.

Во многих случаях определение концентрации КАДН можно использовать как индикатор концентрации субстрата или как средство для отслеживания ферментативной реакции, в которую вовлечен ИАДН (или

НАД).

Известно, что концентрацию МАДН в растворе можно определить колориметрически, но колориметрические способы в Oб щем невыгодны, Значительно более выгодными являются электрохимические

1806187 способы, но до сих пор попытки определить йАДН электрохимическим способом не достигали успеха. Известно, например, что концентрацию ЙАДН можно определить амперометрическим способом, при котором

ЙАДН окисляют на электроде при фиксированном контролируемом потенциале, причем ток, проходящий при подходящих условиях, пропорционален концентрации

ЙАДН. К сожалению; электрохимическое окисление йАДН требует высокого сверхпотенциала и МАДН обычно не окисляется непосредственно на поверхности электрода, например, во многих случаях поверхность электрода быстро выходит из строя иэ-эа образования на ней пленки, которая оказывает влияние на величину и скорость электрохимической реакции (1), Предпринималось множество попыток преодолеть эту проблему. Например, было предложено испольэовать модифицированные электроды, покрытые слоем проводящих органических солей, Кроме того, предлагалось использовать адсорбированный редокс медиатор, такой как мельдола синий, для того, чтобы более эффективно привязать реакцию окисления к электроду и/или снизить окислительный потенциал (2). В других случаях редокс медиаторы ис пользовали в свободном растворе. Например, метокси феназин метосульфат использовали с модифицированным пиролитическим графитовым электродом. Другие эксперименты проводили с платиновым, графитовым и стеклянным угольным электродом, однако способ быстрого и воспроизводимого определения ЙАДН не был разработан.

Цель изобретения — повышение операционной стабильности электрода, В соответствии с настоящим изобретением обнаружили, что ИАДН и МАДРН могут быть окислены с хорошим амперометрическим ответом и при пониженном перенапряжении при использовании электрода иэ активированного угля такого типа, который используется в технологии топливного элемента и который включает. гетерогенный связанный смолой слой благородного металла, содержащий предпочтительно палладирированные или платинизированные (этот термин включает материалы, содержащие оксиды платины и/или палладия или образованные ими, а также материалы, включающие металлические платину или палладий или обработанные ими} частицы графита или угля, связанные натуральной или синтетической смолой, предпочтительно синтетическим гидрофобным связующим, таким как фтороуглеродная смола, наиболее предпочтителен политетрафторэтилен.

Следовательно, h0 своим отличительным свойствам в соответствии с настоящим изобретением предлагается способ получения электрода для количественного электрохимического определения НАДН иЙАДРН, включающий модификацию электрода из углеродного материала при помощи

10 адсорбции материалов, которые уменьшают перенапряжение электроокислительной реакции. Используют связанный смолой слой частиц древесного угля или графитных частиц размером от 5 до 30 нм в качестве угле15 родного материала, э частицы платины или пэлладия, или окислов платины или палладия коллоидного размера от 1.5 до 2,5 нм используют в качестве материалов, которые снижают перенапряжение электроокисли20 тельной реакции.

Связанный смолой слой платинизированных или палладиизированных частиц угля или графита может быть самостоятельным, но часто у него имеется подложка, 25 предпочтительно электропроводная и предпочтительно слой электропроводной угольной бумаги, с которой связаны платинизированные или палладизированныв частицы угля или графита. как поверхностЗ0 ный слой, или пропитанная угольная волокнистая ткань. Несмотря на то, что предпочтительны платинизированные или палладиэированные материалы, можно использовать и электроды из активированного

З5 угля, содержащие другие благородные металлы, например золотосодержащие, Термины "платинизировэнный" и "палладизированный" включают также и оксиды.

40 Термин "активированный" уголь, "активированный" графит и т.п. относятся к высокопористому, с большой площадью поверхности угольному или графитовому материалу.с площадью поверхности 50 м /r или бо45 лее„. чаще больше 200 м /г, например

200-600м /г или больше. Материалы с такой большой площадью поверхности получали, например, путем тепловой обработки угольных или графитных порошков в потоке

50 со2

Кроме уже перечисленных преимуществ. а именно стабильности, воспроизводимости и короткого времени ответа, еще одним преимуществом настоящих материа55 лов является то, что их можно использовать для отслеживания концентраций ИАДН при сравнительно низких потенциалах, например 0 — 600 мВ, или даже при отрицательных потенциалах со стандартными Ag/Ад CI электродами. против 750 мВ. упоминавших1806187 ся выше для отслеживания концентрации

НАДН с использованием стеклянных, уголЬных или графитовых электродов. Электроды настоящего изобретения характеризуются относительно низким обратным током и по- 5 этому повышенной чувствительностью. Эти электроды также характеризуются слабой реакцией на потенциально входящие частицы, такие как мочевая кислота, часто присутствующие в биологических или клинических 10 пробах.

Предпочтительными подложками для электродов по изобретению являются материалы, которые используются как электрокаталитические газовые диффузионные 15 электроды в топливных элементах. В общем случае коллоидную платину с размером частиц 15-25 А (1,5 — 2,5 нм} адсорбируют на поверхность, порошкового угля (размер час тиц 50 — 300 Д, 5 — 30 нм), например, путем 20 образования платинового раствора на месте в присутствии порошкового угля, который действует как инициатор образования центров кристаллизации в растворе, Платинизированные частицы угля затем наплавляют 25 на электропроводную подложку, например электропроводную угольную бумагу, используя синтетическую связующую смолу, предпочтительно углеводородную смолу, и в частности политетрафторэтилен. В другом 30 случае может быть использован оксид платины или палладия с таким >ке размером частиц вместо коллоидной платины, и его адсорбируют на частицы угля или графита таким же образом. По другому способу США 35 платинизированные частицы угля внедряют в предварительно приготовленную пористую угольную ткань и связывают с ней фтористоуглеродной смолой, предпочтительно . политетрафторэтиленом, Настоящее изо- 40 бретение не ограничивается использованием материалов Prototech, возможно использование других аналогичных материалов для подложек, включающих пористый связанный смолой слой платинизирован- 45 ных, палладиизированных или содержащих другой благородный металл частиц графита или активированного угля, причем контролировать эту реакцию можно по уменьшению концентрации ЙРДН, и

50 окисление глюкозы до глюконолактона по реакции а-Д-глюкоза+ ЙАДН дегидрогеназа

55 - Д-глюконолактон + ИАДН. которую можно контролировать по увеличению концентрации ЙАДН по мере прохождения реакции. В этом случае фермент, такой как лактат дегидрогеназа или глюкоза дегидрогеназа, может быть включен в слой

Несмотря на то что предпочтительными связующими смолами, используемыми для связывания платинизированных или палладиизированных частиц графита или угля, являются гидрофобные фтористо-углеродные смолы, в частности политетрафторэтилен, можно использовать другие подходящие натуральные или синтетические смолы, например полиэтилметакрилат. поливинилацетат, поливинилхлорид, поликарбонаты, поли(4метилпентен-1)полиизопрен, полихлоропрен, поли(1,3-бутадиен), кремнийорганический каучук или желатин, Соотношение связующего и содержащих благородный металл частиц угля или графита по весу составляет 10-75 связующего и 90-25 активированного угля или графита, предпочтительно 20 — 50-",ь связующего и, соответственно, 80 — 50 активированного угля или графита. Наполнение благородным металлом, например платиной или палладием, или их соответствующими оксидами, или золотом частиц активированного угля или графита составляет 1 — 10 веса активированного угля или графита и связующего, предпочтительно 2 — S, еще предпочтительнее 4 — 67;.

Вместо наплавления смеси смолы с платинизированным или палладиизированным порошком активированного угля непосредственно на поверхность подходящей подложки, например непосредственно на поверхность электропроводной угольной бумаги, смесь связующего и платинизированного или палладиизированного угольного порошка может быть суспендирована е подходящей инертной среде и нанесена на поверхность подложки с помощью трафаретной печати, в результате чего получают тонкую пленку связанных смолой платинизированных или палладиизированных угольных частиц на поверхности подложки.

Кроме прямого количественного определения содержания ЙАДН в растворе, электроды и способ по настоящему изобретению можно испольэовать для количественного определения количества МАДН, вырабатываемого или расходуемого на месте, например при ферментативной реакции между ферментом и его кофактором. Такие реакции включают, например, превращение пирувата в лактат через лактат дегидрогеназу лактатдегидрогеназа пируват+ ЙАДН вЂ” — — — --лактат+ ИАДН, 1806187 или иммобилизован на слое платинизировэн ного или паллэдиизированного угольного электрода по настоящему изобретению с помощью любой известной методики включения фермента, Еще в одном варианте осуществления настоящее изобретение содержит электрод и способ, в которых сам ферментный электрод включает не только иммобилизованный фермент,, но также подходящий кофактор этого фермента, либо КАДН, либо КАДН как в данном случае, таким образом, ферментный электрод обладает способностью электрически реагировать на активность фермента, что определяется по изменению концентрации КАДН при контакте с образцом, например клинической или биологической пробой, содержащей соответствующий субстрат для фермента, независимо от того, содержит ли образец необходимый кофактор, так как его поставляет сам электрод, КАД или КАДН кофэктор может быть включен в электрод любым подходящим способом, таким как пропитка подходящим раствором КАД или КАДН с последующей суш кой, Как известно в технике, поверхность электродного материала может быть или не быть защищена пористой мембраной, такой как поликарбонатная пленка с размером пор 0,03 мкм. Можно использовать и другие подходящие материалы для мембраны.

На фиг, 1 представлен разрез модифицированного электрохимическс. элемента

Rank Brothers, который использован для определения ответа КАДН активь ровэнного угольного электрода в соответствии с настоящим изобретением.

На фиг, 2 показан ответ электрода на последовательное добавление КАДН в элемент при использовании плэтинизированного угольного бумажного электрода (РСР) по настоящему изобретению: на фиг. 3— ответ электрода PCP на КАДН при различных равновесных потенциалах íà Ag/Ag Cl электроде; на фиг, 4 — ответ электрода на пировиноградную кислоту в присутствии лактатв дегидрогеназы (LDH); на фиг. 5— ответ электрода на эцетальдегид в присут,ствии алкогольдегидрогеназы (АДН); на фиг.

6 — ответ платинизированных угольных бу мажных электродов на концентрацию

КАДН по настоящему изобретению; на фиг.

7 — ответ электрода на пировиноградную кислоту; на фиг, 8 — ответ электрода на

КАДН, полученную на месте путем ферментативного окисления глюкозы дегидрогеназы; на фиг, 9 показана аналогичная кривая для электрода, содержащего оксид платины; на фиг. 10 — кривая для палладиизиро55

50 ванного активированного угольного электрода.

В следующих примерах испытывали различные платинизированные или палладиизированные угольные бумажные (РСР) электроды на их ответ на КАДН в модифицированных системах Рэнк кислородных электродов, как показано на фиг. 1, Модифицированная Ранк система содержит элемент из двух частей: основного электрода (1) и кольцевого кожуха (2), включающий водяную камеру (3), через которую может циркулировать вода для регулирования температуры элемента, причем обе эти части соединены с помощью навинчивания хомута (4). По центру основного электрода (1) расположена платиновая контактная кнопка (5), на которую помещен испытываемый диск (6) из бумажного электродного материала и который удерживается на платиновом контакте с помощью резиновых О-образных уплотнителей (7) и (8) во время соединения двух частей элемента, В верхней части элемента, который содержит испытываемый содержащий КАДН раствор, установлен упор (9), фиксируемый регулируемым хомутом (101, В упор вмонтирован обратный платиновый электрод (11) и

Ag/Àg С! эталонный электрод (12), Испытания проводят при потенциале рабочего электрода относительно эталонного Ag/Ag

Cl электрода в диапазоне 100 — 600 мВ. Другие испытания проводят в двухэлектродном элементе, В двухэлектродном элементе электродный материал удерживается на платиновой контактной кнопке на основании элемента с помощью поликарбонатной (размер пор 0,03 мкм) мембраны, на которую подают образец, содержащий КАДН, Кольцевой эталонный Ag/Ag CI электрод расположен вокруг платинового контакта в основании элемента и отделен от него изолирующей втулкой, На элемент подают разное напряжение относительно эталонного электрода и записывают выходной ток при разных напряжениях.

Изобретение иллюстрируется примерами, в которых электродный материал представляет собой плати низированную угольную бумагу (PCP), разработанную как газовые диффузионные электроды. РСР электродный материал получают по методике, по которой сначала платинизируют частицы угольного порошка (Vulcan ХС-72, номинальный размер частиц 30 нм) с помощью окислительной деструкции комплекса сульфита платины в присутствии угольного порошка при использовании

Н202, в результате чего коллоидная платина с размером частиц 1,5-2,5 нм осаждается на

1806187

10 поверхность частиц угольного порошка, Затем платинизированный угольный порошок расплавляют и наплавляют на поверхность графитизированной электропроводной угольной бумаги, используя 50% от веса платинизированной угольной бумаги политетрафторэтилена в качестве связующего, Полученный платинизированный угольный бумажный электродный материал имеет толщину 0,1-0,р мм, а платинизированный слой 0,24 мг, см, Для испытаний (примеры — 3) угольный бумажный электродный материал нарезают на диски диаметром 5 мм и укрепляют на платинизированном рабочем электроде, показанном на фиг. 1, В каждом случае площадь электрода из угольной Gyмаги, соприкасающаяся с образцом, составляет 0,16 см2. Получены следующие результаты, Пример 1. Электрохимическое окисление ИАДН на платинизированной угольной бумаге (PCP), Используя стандартную потенциостатическую методику, образцы 20 MM ИАДН раствора в трис-HO буфере с рН 9 добавили в элемент, содержащий 2 мл смеси 0,1 M фосфата с рН T и 1 M KCI буферного раствора. Платинизированный угольный бумажный электрод (P C P) поддерживают под разнь.ми потенциалами по отношению к эталонному Ag/Ag С! электроду. Обратный электрод — платиновый, Получены участки пс -" нного тока,фиг. 2), пропорциональны онцентрации КАДН (таблица и фиг, 3).

П р; м е о 2, Ответ МАДН вЂ” электродной системы «а пиров ноградную кислоту в по ".cy-,стаии лактат дегидрогеназы (LDH)

Испол .зле аналогичный ."лемент, содер: ащ. ..2 ;"; . ДН и 10 мМ пировино. радн и кисл::л рас вор» фосфата в «С б„, ре с pl . ри температуре 25 С, Рэбпч й, .братный и эталонный электроды таисие же, зк в примере 1. Рабочий электрод находи;о од напряжением 400 мВ и дает посто» н; ч < сигнал 170 мкА выше обратного то а После добавления 120 единиц LDH (сеодце ка тип XV) ток уменьшается с первоначальной скоростью 92 мкА/мин (фиг. 4).

Это показывает, что ферментативное превращение пирувата в лактам эффективно отслеживается с помощью ИАДН, электрохимически соединенного с электродом.

Пример 3. Ответ ЙАДН-электродной системы на ацетальдегид в присутствии алкоголь дегидрогеназы (АДН) íà PCP электроде

В элементпомещают3мМ МАДНи35мМ ацетальдегида в 2 мл буферного раствора трис/НС1 с рН 9 при температуре 25ОС, Раруют 5 мгlмл белкового раствора (глюкозо40 оксидаза) на электрод в течение ночи перед измерением КАДН, Следует указать на то, 50

5

3G

35 бочий, обратный и эталонный электроды— как в примере 1, Рабочий электрод имеет потенциал 400 мВ и дает постоянный сигнал

40 мкА выше обратного. После добавления

2 единиц АДН (печень лошади) ток падает с начальной скоростью 130 мкА/мин (фиг. 5) показывая, что ферментативное превращение ацетальдегида в этанол эффективно отслеживается через посредство ИАДН, электрохимически связанного с электродом.

В следующих примерах использованы либо двухэлектродные, либо трехэлектродные элементы. Трехэлектродные элементы проиллюстрированы на фиг, 1.

Пример 4(фиг. 6), Данные получены при использовании двухэлектродной ячейки, поляризованной при 200 мВ. Используют буферный раствор 16 ммоль/л NaHyP04, 53 ммоль/л NazHPO4, 52 ммоль/л NaCI, 1,5 ммоль/л этилендиамин тетрауксусной кислоты с рН 7,4. После достижения в этом буфере стабильного обратного тока буфер удаляют с мембраны и заменяют образцом

МАДН в том же буфере. Фиксируют пиковый ток. На фиг, 6 показаны ответы платинизирован ного угольного бумажного электрода

Пирмы, который включает связанные смолой платинизированные частицы угля, нанесенные на электропроводную угольную бумажную подложку, причем связанный смолой платинизированный угольный слой содержит по массе 50% политетрафторэтилена, 45% угля тонкого помола (VuIcan XC72) и 5% коллоидной платины, предварительно адсорбированной на угольный порошок, Для минимизации обратного тока адсорбичто глюкозооксидаза является подходящим белком.

П р м е р 5 (фиг, 7), Этот пример иллюстрирует применимость настоящего изобретения для измерения использующих

ЙАДН ферментов. Используют трехэлектродную ячейку, снабженную магнитной мешалкой, Рабочий электрод представляет собой платинизированную угольную бумагу, как в примере 4, íî L-лактатдегидрогеназу (ЕС 1.1.1,27 из коровьего сердца) внедряют в электрод через карбодиимидное соединение.

Первоначально ячейка содержит 12,5 ммоль/л ИАДН в буферном растворе 0,1 моль/л .фосфата и 1 моль/л KCI с рН 7.

Поляризующий потенциал составляет

350 мВ. Устройство можно использовать для отслеживания расхода МАДН, когда в

1806187

55 элемент добавляют аликвоты пировиноградной кислоты, как показано на рисунке.

Пример 6 (фиг. 8). Пример 5 повторяют, за исключением того, что иммобилизованную лактатдегидрогенэзу заменяют глюкозодегидрогеназой (ЕС 1.1.1,47 иэ

BacIlIus sp., поставляемую Sigma, 100-300

Ед/мг протеина), иммобилизованной нэ электрод таким же способом. В то время как лактатдегидрогеназу используют для определения количества пировиноградной кислоты путем отслеживания расхода ИАДН пируват + ЙАДН лактат + НАД глюкоэодегидрогеназу используют для определения количества глюкозы по выработке йАДН

j3 Д вЂ” глюкоза + НАД— — — глюконолактон + МАДН.

Элемент содержит 0,1 моль/л фосфата, 0,1 моль/л KCI, 2,4 ммоль/и НАД при рН 7.

Пример 7 (фиг. 9). По методике примера 4 выход с содержащего оксид платины угольного электрода измеряют при 200 мВ (no отношению к эталонному

Ag/Ag CI электроду) в двухэпектродиом элементе при различных концентрациях МАДН, Получен практически линейный ответ, эквивалентный тому. что получают при ппатинизированиых угольных бумажных электродах. В этом случае электродный материал включает слой связанных смолой (политетраф,торэтилен) угольных частиц, причем 5 no весу (от общего веса связанных смолой частиц) оксида платины предварительно адсорбировано на частицы угольного порошка; связующее 50% по весу, уголь 45 по весу, и связанных с поверхностью электропроводиой Toray (торговая марка) угольной бумаги.

Пример 8 (фиг. 10). По методике примера 4 выход тока с палладиизированного угольного бумажного электрода измеряют при 200 мВ (по отношению Ag/Ag CI), используя двухэлектродный элемент при различных концентрациях КАДН, B этом случае также имеют линейный ответ (фиг, 10), Электродный материал, как описано в примере 7, имеет связанные смолой частицы угля, которые включают 5% по весу предварительно адсорбированной платины тОнкОГО помола.

В описанных примерах продемонстрировано использование электродных материалов для проведения быстрого и воспроизводимого окисления МАДН. Эти ответы значительно отличаются от резульгатов, которые получают с другими электродными материалами, как показано в сравнительных примерах при использовании платины, cTpKRoóãëåðoäà или графитового электродного- материала, которые (за редким исключением) обычно вязкие, относительно нечувствительные и значительно с худшей воспроизводимостью. Представляется, что эффективность использованных платинизированных или пэлладиизированных угольных электродов является результатом их гетерогенной структуры и их совместимости с биологическими молекулами, такими как НАДН и ферменты. Окисление ИАДН также эффективно проходит в присутствии ферментов и субстратов и может быть использовано в качестве базиса для быстрого связанного с ЙАДН ферментативиого исследования. Эффективность исследований пирувата (с использованием (ОН) и ацетальдегида (с использованием

АДН) видна из примеров, но большое число аналогичных исследований можно провести, используя другие ферменты и субстраты, Токовый ответ платинизироваииой угольной бумаги на концентрацию ИАДН при различных равновесных потенциалах, Формула изобретения

1. Способ приготовления электродов для количественного электрохимического определения 1,4-дигидроникотииамида адении динуклеотида (ИАДН) в растворе, включающий модификацию электрода из углеродного материала путем адсорбции веществ, снижающих перенапряжения в реакции электроокисления, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения операционной стабильности электрода, в качестве углеродного материала используют связанный смолой слой угольных или графитовь.х частиц размером 5 — 30 им, а в качестве веществ, снижающих перенапряжение реакции электроокислеиия, используют частицы платины или палладия коллоидного размера

1,5 — 2,5 им.

2. Способ по и. 1, отличающийся тем, что в качестве смолы используют политетрафторэтилен, 3. Способ по и, 1, отличающийся тем, что связанный смолой слой угольных или графитовых частиц с адсорбированными частицами металла или окиси металла наносят на поверхность электропроводящего подложечного слоя, представляющего собой электропроводиую углеродиую бумагу, 4. Способ по пп. 1 и 3, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что на поверхности электрода иммобилизуют NAD-зависимый фермент, 5. Способпоп.4, отличающийся тем, что на поверхности электрода дополнительно иммобилизуют кофактор NAD или

MAD H.

1806187

Токовый ответ платинизированной угольной бумаги на концентрацию МАДН при различных равновесных потенциалах

ИО

AgfPgCl

60

Фие. г

1806187 игреня, с.

18o6

4РГИЯ, СГК

3806187

ЖОР аной

Q6 ИО дрему юк.

®ЮЛ4/Л НЯН

1806187

1О М f8 Ы 0 М НпфОцуй ВЛяK03bl 9 PgPggggb Л

0 r Я 3 4 5 Е

Кснцентрцция 0Я 9 91

Щ/я, - f4 10 Ю ( Яд ф ф 0 Г 8

1806187

30 N

НАДИ, амОлЦл

Ю N

НАДИ июль/л

Редактор

Заказ 965 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„415

Производственно-издательский комбинат "Патент". г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 :40 30

Ь

200 100

I юп

"м

1 > so ( 20 »

> 10

Составитель А. Семенов

Техред M.Ìîðråíòàë Корректор С. Густи