Бромгидраты 6-аргиниламинонафталин-1-сульфамидов в качестве полупродукта для получения пептидных флуорогенных субстратов

 

Используют в качестве полупродуктов для получения пептидных флуорогенных субстратов пептидаз. Сущность изобретения: промежуточные продукты формулы: I - Р1Р2М502(нафталин НАгд-6 НВг, где RI Н, Н2-линейный или разветвленный С1-С4 алкил, СбНн, циклогексил, бензил, или , C2Hs, или NRiRa гексаметилен, пиперидин, морфолин. Реагент 1: бромгидрат N -бензилоксикарбониларгинил-аминонафталйн-1-сульфамид. Реагент 2: 3 NHO в ледяной уксусной кислоте. Условия реакции: выдерживают при 20°С, добавляют 5%- ный водный ЫаНСОз. 7 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУбЛИК (я)5 С 07 С 311/38

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ и

К ПАТЕНТУ

6 (21) 4920124!04, (22) 19.03.91 (46) 23.08,93. Бюл, М 31 (71) Институт биохимии ЛитАН (72) С.Ю.Бутенас, А.И.Палаймэ, З.А,.Талайките и В.И,Дзянене (73) Институт биохимии ЛитАН (56) Биоорганическая химия, 1989, т. 15, М

4, с. 444-51. (54) БРОМ ГИДРАТЫ 6-ЯРГИНИЛАМИНОНАФТАЛИН-1-СУЛЬФАМИДОВ В КАЧЕСТВЕ ПОЛУПРОДУКТА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЙ

ПЕПТИДНЫХ ФЛУОРОГЕННЫХ СУБСТРАТ0В

Изобретение относится к химии замещенных сульфамидов нафталина, конкретно к новым бромгидратам моно- и дизамещенных 6-аргиниламинонафталин-1-сульфами- . дов общей формулы 1

ЯВИ йЗГ

-, R2 .где R> = Н, Ra = СНз, С2Н5. СзН7, I-СзН7, С4Н9, i-C4Hg, t-C4Hg, СБН11 ° и,гЯ иии Нг=йг=СНг, СгНи или N Йгйг-,д - ), -м которые могут быть использованы в биотехнологии для получения 6- пептидиламинонафталин-1-сульфамидов, применяемых в

„„ 4 „„1836340 АЗ.(57) Используют в качестве полупродуктов для получения пептидных флуорогенных субстратов пептидэз, Сущность изобретения: промежуточные продукты формулы. i—

Й1Й2Й$02 (нафталин)-МНАгц-6 HBr, где R1 =

Н, В2-линейный или разветвленный С1-С4 алкил, СбН11, циклогексил, бензил, или

Я1=К2=СНз, C2Hs, или NRiR2 гексаметилен, пиперидин, морфолин. Реагент 1: бромгидрат N -бензилоксикарбониларгинил-амии нонафталин 1-сульфамид, Реагент 2: 3 NHO в ледяной уксусной кислоте. Условия реакции: выдерживают при 20 С, добавляют 5 . ный водный МаНСОз. 7 табл. качестве флуорогенных субстратов при анализе пептидаз.

Целью изобретения является изыскание в ряду замещенных аминонафталинсульфамидОв новых соединений, позволяющих при их использовании в качестве полупродуктов получать пептидные субстраты, повышающие информативность флуоресцентного метода анализа пептидаз, т.е. обладающие повышенной относительной интенсивностью флуоресценции детектируемых групп, Цель достигается синтезом бромгидратов 6-аргинил ам инонафтал и н-1-сул ьфамидов формулы 1, используемых для . получения пептидных субстратов, содержащих высокоэффективную флуоресцирующую 6=аминонафталин-1-сульфамидную группу.

Изобретение иллюстрируется примерами:

1836340

Пример 1. 6-Фталимидонафталин-1пропилсульфамид, Смешивают 9,0 мл (0,11 моль) пропиламина, 14 мл (0,1 моль) триэтиламина и 500 мл ацетона. В смесь добавляют в течение 10 мин, 37,2 г (0,1 моль) 6-фталимидонафталин1-сульфохлорида и перемешивают 4 ч при

20 С. Ацетон отгоняют при пониженном давлении, остаток залива1от 1 л воды и через

2 ч отсасывают продукт, промывают водой, сушат, перекристаллизовывают из метанола. Получают 35,9 г (выход 91 ). T.pg. 173179ОС.

Найдено, : С 63,82, Н 4,75, N 7,28, S

8,09.

C21H1QN2S04.

Вычислено, : С 63,95, Н 4,60, N 7,10, $

8,13, Аналогично получают остальные 6-фталимидонафталин-1-сульфамиды. Данные приведены в табл. 1, Пример 2, 6-Аминонафталин-1-пропилсульфамид.

К раствору 39,4 г (0,1 моль) 6-фталимидонафталин-1-пропилсульфамида в 500 мл метанола прибавляют по каплям 5 мл (0,1 моль) гидразингидрата и кипятят 4,5 ч. Метанол отгоняют, остаток экстрагируют 2 х

200 мл кипящего хлороформа, экстракт упаривают и остаток перекристаллизовывают из метанола. Получают 14,8 r (выход 56 ) аналитически и хроматографически чистого продукта в виде масла, Rr = 0,61 (хлороформэтилацетат 1:1), ПМР спектр (в ДМСО), д, м.д.: 0,67 (СН3), 1,23 (CH2), 2,68 (СН2).

Найдено, : С 59,26, Н 6,27, N 10,73, S

11,70.

C13l416N2S02.

Вычислено.%: С 59.07, Н 6,10, N 10, 60, S 12,13.

Аналогично получают остальные 6-аминонафталин-1-сульфамиды, Данные приведены в табл. 2.

Il р и м е р 3, Бромгидрат 6-(N +-бензилоксикарбонил)аргиниламинонафталин-1пропилсульфамида.

Растворяют 3,89 r (0,01 моль) бромгйдрата N -бензилоксикарбониларгинина и

2.,64. г (0,01 моль) 6-аминонафталин-1-пропилсульфамида в 15 мл сухого пиридина, добавляют 30 мл сухого толуола и последний упаривают при пониженном давлении.

Реакционную смесь охлаждают до -15 С, добавляют 2,02 г (0,01 моль) дициклогексилкарбодиимида (ДЦК) в б мл сухого пиридина и выдерживают при -15 С 0,5 ч, при 4 С вЂ” 1 ч и при 20 С вЂ” 18 ч. Отфильтровывают выпавшую дициклогексилмочевину, фильтрат упаривают досуха, а оставшиеся масло растворяют в 40 мл смеси хлороформ-пропанол (3: I), Этот раствор промывают 15 мл воды, 15 мл насыщенного водного раствора NaCI, содержащего 1 мл конц. HCI, 15 мл 2 -ного

5 водного МН3, 15 мл воды и сушат над безводным Na230n. Растворители упаривают, оставшиеся маслообразное вещество растирают с сухим эфиром. Сырой продукт отсасывают, промывают эфиром. сушат и

10 перекристаллизовывают из пропанола, Получают 5,72 г (выход 94 0) продукт с T.ïë.

118-124 С, Кт = 0,71 (бутанол — уксусная кислота — вода 4:1;2).

Найдено, : С 51,21, Н 5,61, N 13 02, S

15 4,29, Вг11,72.

C27H3505N5B rS

Вычислено,о : С 51,02, Н 5,55, N 13,22, $5,04, Br 12,57.

ПМР спектр (ДМСО), д, м,д,: 0,67 (СН3), 20 1,23 (СН2), 2,70 (CH2).

Аналогично получают остальные бромгидраты 6-(N -бензилоксикарбонил)аргиниламинонафталин-1-сульфамидов, Данные приведены в табл. 3, 25 Пример 4. Бромгидрат б-аргиниламинонафталин-1-пропилсульфамида.

Растворяют 6,36 г (0,01 моль) бромгидрата (6-(N -бензилоксикарбонил)аргиниламинонафталин-1-пропилсульфамида в 10 мл

30 3N Н Br в ледя ной уксусной кислоте и выдерживают при комнатной температуре в течение 2 ч. После этого реакционную смесь выливают в 100 мл сухого эфира. Выпавший осадок отсасывают, промывают эбиром, вы35 сушивают и растворяют в 10 мл воды. Раствор переносят в делительную воронку, добавляют 50 мл бутанола и при встряхивании добавляют 5 -ный водный раствор

МаНСО3 (порциями по 10 мл) до рН = 7,5

40 водного слоя, Органический слой промывают 15 мл воды и упаривают, Остаток растирают с эфиром, отсасывают, промывают эфиром, сушат, Получают 4,66 г (95о ) продукта с Т.<>. 131-1328 С, Вт = 0,41 (бутанол—

45 уксусная кислота — вода 4:1:2, БУВ 412), а

=-2,1 (c 1, ДМСО). ПМР спектр (ДМСО), д, м.д.: 0,70 (СН3), 1,22 (СН2), 2,68 (СН2).

Найдено, Д: С 45,83, Н 5,96, N 16,84, S

6;11, Br 16,35, С19Н29М5В г303.

Вычислено, : С 45,51, Н 5,83, N 16,76, S 6,39, Br 15,94.

Аналогично получают остальные бромгидраты 6-агиниламинонафталин-1-сульфамидов, Данные приведены в табл. 4.

Применение бромгидратов 6-аргиниламинонафталин-1-сульфамидов в качестве полупродуктов для синтеза субстратов ис1836340 пользуемых при определении протеолитических ферментов, иллюстрируется примером 5.

Пример 5. 6-(Вос-1 -Pro-1=РЬе+Агц)- . аминонафталин-1-пропилсульфамид. 5

0,91 г (2,5 ммоль) Boc-Pro-Phe-ОН, 0,35 г (2,5 ммоль) гидроксибензотриазола и 0,51 г (2,5 ммоль) ДЦК растворяют в 18 мл диметилформамида (ДМФА)„охлажденного до20 С. Раствор выдерживают при этой 10 температуре в течение 0,5 ч, при -4 С вЂ” 1 ч и добавляют охлажденный до -20 С раствор

1,25 г (2,5 ммоль) бромгидрата 6-аргиниламинонафталин-1-пропилсульфамида в.10 мл сухого ДМФА. Реакционную смесь отогре- 15 вают до 20 С и при этой температуре перемешивают в течение 19 ч. Образовавшуюся дициклогексилмочевину отделяют, фильтрат выливают в 125 мл воды, экстрагируют

4х25 мл смеси бутанол — этилацетат 1:1. 20

Органический слой промывают Зх12 мл последовательно: 5 -ного водного ЦаНСОз, 10 -ного водного КН$04 и водой. Растворители упаривают при пониженном давлении, остаток растирают с сухим эфиром, 25 продукт отсасывают и промывают эфиром.

Получают 1,84 r целевого продукта (выход

96 ) с Т пл. 179-186 С, Rf 0,72 (БУВ 412), а = -12,8 (c 1, ДМСО), ПМ Р спектр (ДМСО), д, м.д.: 0,68(СНз). 1,20(СНг). 2,68(СН2), 1,27 30 (Вос). УФ спектр (С2Н5ОН): ниах - 254 нм (е= 39,4 10 ); Ямах - 286 нм (e 6,45 10 ).

Аналогично получают пептидильные производные других 6-аминонафталин-1сульфамидов, Данные приведены в табл. 5.

Для доказательства преимущества новых субстратов определены относительные интенсивности флуоресценции детектируемых групп.

П ри ме р 6. Определениеотносительной . интенсивности флуоресценции 6- аминонафталин-1-пентилсульфамида (детектируемая груйпа соединения 8 формулы 1).Спектр снимают на спектрофлуоримет- 45

pe "Hitachl МРГ-4" (Япония) в относительном режиме регистрации при чувствительности 3 в кювете с толщиной слоя 1 см. Длина волны возбуждения

kjo3e. = 357 нм, ширина щели возбуждения — 10 нм, эмиссии — 4 нм. Относительную интенсивность флуоресценции рассчитывают по формуле:!

lа = — — А 55 с 10 где l — высота полосы эмиссии в мм, Ь— концентрация в моль/л, А — соотношение максимальной и использованной чувствительности прибора. Для 6-аминонафталин- :

1-пентилсульфамида (соединение 8 в табл.

2) получают:

86 100 — 820

3,473 10 10 3

Измерение флуоресценции 6-аминонафталин-1-пентилсул ьфамида.

0,004875 г 6-аминонафталин-1-пентилсульфамида растворяют в 10 мл 95 -ного этилового спирта,.0,2 мл этого раствора разбавляют 10 мл фосфатного буфера с рН - 7,0 (0,067 M) и снимают спек-.р. Концентрация измеренного раствора с = 3,473 10 моль/л, оптическая плотность при длине волны возбуждения Озу = 0,080, Полоса эмиссии имеет максимум Х фа. = 473 нм и высоту I = 86 мм.

Аналогичноизмерены спектры флуоресценции остальных 6-аминозамещенных и известных 5-аминозамещенных нафталинсульфамидов и сопоставлены в табл. 6.

Из табл. 6 видно, что относительные интенсивности флуоресценции детектируемых групп новых субстратов составляют (410-860), в то же время у аналогов они колеблятся в интервале (9-26).

Использование навых пептидильных субстратов для флуоресцентного анализа пептидаз.

M е т о д и к а. Гидролиз 6-(Вос-Pro-PheArg) аминонафталин-1-прЬпилсульфамида тромбином.

В кювету флуориметра помещают 1,8 мл

1 мкМ раствора 6-(Bog-;Pro-Phe-Arg) аминонафталин-1-пропилсульфамида в 0,02 М трис-HCl буфере с 0,15 М NaCl, рН 7,4, добавляют 0,2 мл 1 мкМ раствора тромбина в том же буфере и измеряют рост интенсивности флуоресценции при Л= 470 нм, фиксируя время, необходимое для 10 -ного гидролиза. В реакции с тромбином время

10 -ного гидролиэа составляет 15 мин.

Аналогично проводят анализ других пептидаз с использованием других субстратов. Для анализа исйальзуют следующие пептидазы: тромбин, плаэмин, фактор Ха, АПС (активированный протеин С), укориназа, ТАП (тканевой активатор плазминагена).

Время гидролиэа, в течение которого в растворе образуется-0,1 мкМ концентрация соот-, ветствующего 6-аминонафталин-1-сульфамида (т.е. время 10 -ного гидролиза различных аргинилбных производных различными пептидазами) приведено в табл. 7.

Из табл. 7 видно, что субстраты, синтезированные на основе предложенных соединений и содержащие детектируемые

1836340

MHArg HB7

5 30 Я

Таблица 1 фиэико-химические данные 6-фталимидонабгтил-1-сульФамидоа

0 (oOo

30да122

Щ" 1 лл

Данные элементного аналиэа, Найдено/Вычислено

Тт;л, (>С БРУтто-фоРмУла

Выход, 4

" Т" Т

62 37 3 91 7 78 е А н

62 29 З Е5 7,64

1 И ее 186-189

С И И 80»

Е 4Е

8,75

С,И, 63 33

Л.

63>15

207-211.

СЛ» И(а 1(Е 80»

4 гЕ

4,24

7 47

7,36

8 23

8,43

7л28 8 09

7,10 8,13

4 75

4,60

3 И

1 76-1 79 э 7

63 82

63,95 ипэ е"00»

201-203

4 H

i-С И, 72

С (И(аИ 80»

64 12

63,95

4 55

4,60

7 05 8 04

Л Л

7,1О Е,!3 (еевич»И 80»

64 88

64, 69

487

4,94 г

4л85

4,94

6 72

6,86

5 Н

200-205

С»И

7 61

7,85 а

Саэе Ияео»

i-C»È 79 150-153

64 71

Л.

64,69

7 25

» 7,85

6 98

6,86

64 82

64, 69

5 08

«Л

4,94

4 9

21 2-21 6

7 42

7,85

Сяен Ияео»

7 ОЗ

-Л

6,86

6 71

6,63

8 И

С5И„ 96

7!Е

7,59

160-!72

528

5,25

G5 60.

65, 39

Cgg H 11 SO»

О с-© »

6„63 7 2Е

6,45 7,38

Cgo Иеэ И,1 >0»

5 25

5, 10

206- 209

66 36

66,34

Су И, Иееа»

6 16

Л-6 33

243«247

7 26

7,25.

СН3 си, 67 69

67,86

4 09

4,10

63 14

63,15

4 35

4,24

СФИ(а 1(gs0»

Е 4О

8,43

151" 155

7 53

7>36

90 и

12 СХИУ

ИЯ„Я вЂ”.Кя) "

7 ЗО

Л

7,85

201«204

64 83

64>69

5 01

4,94

7 ОЭ

«2

6,86

С И ИБО си 3 Ю"Еб"» (Л

7 41

7,62 б 61

6,66

165-169

65 88

65,70

4 84

4,79

168-172

7 15

Л

7,ЗЕ б 61

6,45

66 52

66,34

5 25

«Л

5,10!

СЕ,И,,И,9 »

-N 0

7 08

7,59

62 48

62,55

4 43

4,29

6 66

6,63

98-202

СЙ1ЦВ Наев

6-аминонафталин-1-сульфамидные группы, могут быть использованы для анализа пептидаз, так как они обладают различной скоростью гидролиза.

Таким образом, предложенные бромгидраты 6-аргиниламинонафталин-1-сульфамидов в качестве полупродуктов для синтеза пептидных субстратов обеспечивают повышение информативности флуоресцентного метода анализа пептидаз, так как детектируемые группы новых субстратов обладают в 40 раз более высокой интенсивностью флуоресценции, чем аналогов (ср.

410-860 и 9-26).

Формула изобретения

Бромгидраты 6-аргиниламинонафталин1-сульфамидов общей формулы где R! = Н, Я2 = СНз, С2Н5, СзН7, — СзН7

СаН9, СаНя, t СаНя, СьН!1/ 1

Сиг-QQ или (>г = >гг = СН>, С>и>. или

/ \

MRlR2- — И, — Ж K О .

15 в качестве полупродуктов для получения пептидных флуорогенных субстратов.

1836340

Таблица 2 брутто-Формула!

Г cne- R ! динения вых

ППР-спектр. (8.,д, ДИСО)

Данные элементного анализа

На>!дено/вычислено

«1 «1

11 96 13 11 2,40(СИ7)

11,85 13>57!

45 148

56 IU

55,91

1 I(С!! Itis Игво

О ° 30

5 !б х

5,12

CiIS

109-113

0,55

57 72 5 72

Ь Ь

$1,53 5>64

О, 37 (CII3) °

2, 73((11 ) ссзt4 t:гя 1

С,ltS

i2 $7

А -

12,31

11 40 з

11, 19

С И, Извс

0 61

59 36 х

59,07

56 б 27

А б, IV

10 83 11 70 х А!

О,бо 12,13

0,67(Ci ), 1,23(СИ ), 2, 63 (GIR)

О, 85 (СИ з)

3,2!(СН ) Э Н

140-144 0,51

10 58

IО, ЬО

1-СЭИ7

58 88

59,07

С!! Ить ИдЗОд, 12 04

12, 13

6 09 б

G 10

4 Н

0,48

60 56

60,41

27 о, 77 (с!! ° ), i,I4(ñí ), 2,72(С!!й)

О,70(СНЭ), 1,45 (СИ), 2,4В(СН )

О, 98(О!3) б 45

6,52

76-79

С(4И, ИИЗО

10 20 it 37

А 1

10,06 11,52

5 Н б 62

6,52

60 40

60,41

1! 02

11,52

Стан>В)(хЗОГ х

9 93

10,06

0,57

48-50

6 и

60 58

60,41.

С,II49 Из 01

10 Об

10,06

6 60

6,52

11 21

11,52

t98-200

67 г-С„it9 и

О>60 Ст9игридзод

61 72

61, 62

0> 63 (CtIS ) >

1, 05 (СИ г ), 2 ° 71(СН )

1 ° 2! (Снг) °

2,68(си) 9 >О l0 92

А А

9,53 l0,96

«6

6,39

87-90 4

C$H I1

В Н

63 15 з

63,1Э

55 0>б9

131-140 б 64

5,62

9 13

А==

9,20!

О 53

-А !

0,59

140 150

10 0>G7

65 52

65,36

В 82

3,97

9 21

10 26

3,97(СИе), 7 07(C H ) О 63 CSR It!4 И.дзод

92-94

СН . CH

57 56

57,58

11 30

11, 19

2>63(С>! ) 12 00 з-12,81

С!а ilia И1ЗОД

106-1 08

Сди С И

0,74

60 26

60,41 б 52 з

6,52 .!

О 14 х

10,06

11 54

11,52.139-143

Î 70 С!УИ И ЗО

10 2! х

11 0>

6 37 з

6 ° 25

ИН>вз, 77

62 22

62,05

9 52

9,65 с(зи и зо з

63 31

63>13

187-190

0,8!

6 77

6,62

9 09

А

9,20

1,4Э(СИг), 3 > 2 $ (СН е) 10 61

10,53

0,63

S7 72

57,52

79-83!

5 Стфнта 714801

5 6$

5,52

9 64 з

9,$3

2, 94 (СИ е), 3 50(CH ) Т а б л и ц а

Физико-химические свойства бронгидратое б-(и -Иензилоксикарбанил)аргиннл-анинойаФталин-1-сульФамндов

МНй) (-й"-Х HBi

tNP спектр

d;, м.д., ипсо

8>. Ry

Ri пп

ыруттоФ>трнула

Т пл.

Данные элементного анализа 8

Найдено/Рычислено

Выход, В

С И И 3 Вг

7 . б

9 fO 17 Q 15

3 Ф

2 > 40(Clt+) 49 Я

49,42

4 63

-А

5,23

13 63

13 ° 33

5 32

5,14

I2 42

А-!

3,!5

81 126-132 -!Э,3 0,68

CSStl Иаигво .

Н 3 с ивзи Вгзо

93 130-138 -14, 1 0,69

50 36

30,24

0,вв(сн )

2 > 80(СИз) 12 06 х

12,36

5 52

5,35

4 $3

5,10

13 34 х

12>52

Сену

5!417

5t,02

92 116-124 -14, 3 О, 70

13 40 х

13, 22 о,вв(сн )

3,20(CH ) 4 23

5,04

5 45.

5,55!

2 19 х

I2,$7 т 7

1! 51

12,30

91 120-127 -14,6 0,67

С И Иангвоа

12 73

12,94

4 !3

4,94

А

S 93

S ° 74

«х»

51 83

51>71

4 9

95 118-126 -IЭ ° 5 0>10

5!462

51,П

5 88

5,74

13 07

Л I 2,94

А

12, ЗП

4 12 х

4,94

С И N. 8SSO (-С4ие

13 14 з!

2,94

С98 Итт Иаиг ЗОК

43 141-148 -IЭ,Э 0,55 г-с!09

5 91

5 74

О, 98 (CB8) l1 52 х

12, 30

4 58

А4,94

51 71

0,77

89 а Г

12 85

12,66

0,66(снз)

1,02(СН )

2,75(CH ) -16 ° О

1! 39 — А12.04 ч 42

5258 613

52з>49 $>92

91 118-124

Характеристики 6-а>е>номаФталин-1"сульрамилое

qoOo)

301КВ4В(-О

Н,С-©

С, И Извад

Сту Ига ИВЗОВ

5 19

5 ° 16

5 66 х

5>64

0 93(CH )

3>22(CH )

1, Эо(сн t), 2,96(СН ) О, 75(CH

1, I2(CHg)

2,75(СН )

О,)О(СИг)

2,46(си ) 1836340

Пролрлне Рие >&оп, Р

69 1ЭЗ-141 -12, б О, 73 с у& и у у и &8 с 805 53 42 5&99 12&50

53 33 5>82 12,44

4 23

4 ° 74

1,20((И ), 2,91(CII

» 39

»,83

96 156-164 -13,S 0,63

& °

$ 25 12 14

5 ° 16 12>29

54 56

54,46

4& 2Д

4 ° 69!

О 93

»,69

Э ° 99 ((31 &)

7,06(С П ) 78 IIЭ"t21 -t3,4 О;69

ИВ СЯ, СИ

S0 39

50,24

S 54

5>35 .

13 42

IЭ ° 52.В

4 33

5;16

t2 ЗО

12, 85

2,62(СИ ) С и Певгес

64 104 1!2 «12 ° О 0,72

56$ !276

5,74 !2,94

1 1 СФНУ СВН У

Sl 63

$1, 77

4 58

4,94

О ° 94(СН&)

3,20(Щ ) » 88

12,94

93 117-123 12,8 . О> 71

l 2 ва!аб -я

С и tI4er S0s

52 65

62,65

S 79

5>64

12 SO

12, 70

4 23

4,8S

» 23

12, 10

t,çà(ñí )

2,99(СН ) 91 07" 113 -13,6 О, 73

12 57

12,44

С ИВ Н&uteo

S3 11

53, 33

6&02

i,eX

4 02

4, 74

1, 45 (СН,!)

3,20(СН ) » 32

» 83

И !

66 119-12$ -12>3 0,69

5 44 12 52

5 ° 32 12,66

50 SS

50>36

4 28 б

4,83

2 ° 95 (CBB) з,5о(сн ) » $6

12, 04

Ф вут&мол-уксусы&к кислоте-цойе 4 1112.

7 ° блица

° н&нко-книнческие сеойст&& opcs>r>alp&to& б«&рпнннле!&&не>&Фт&лнн-1сулкб&н>рдое

MIAN HB3 .

32

Cf

l, /It!CO р денные елене!нтнОГО &нели&& р г ПНР спектр, Найдено/Вычислено н.д. ДНСО

C B B S J 8t

Т.лл. °

4С

5 44

17 61

77 ° 73 б 48

17 23 2,45(СН )

16>88 В

B CB 8$. ОЬО

96-104 +3> 3

С ПН,В&ВВЮЭ г а СВН„94 17 32

17,24

0,90(сн )

2 ° 81 (с в) 44 18 5 64

44,Э6 5,58

1d6-178 4, 1

0>46 р б 83

6,58

17 02

16,39 г-СУу 9!

165-171 -1,0

6&11 16 15 0,85(CB&) б ° 39 15 ° 94 3 ° 18(СН ) 0>42

45 69

45; 51

$7$

СРРП!ВН&ВВюг

16 69 .16 76

° 4 в с а 90 . 0,47

t26-t33 -3,2

46 48

46> 66

16 27

16,30

С„П,В ВВЮ

Ь 21

Зф

15&85

1$>50 об&Пут Ngsstoj!

$ В У-СВИВ 9Ь 0 47

tS8 165 2,0

612 1611

6,22 15 ° 30

46 Я S 94

46>60 6,06

16,300 м «& 3

1642 577

16,30 . 6,22

В сС П Е1 снв«

4t! 72 6 18

4Ь,ЬО 6,06

Idl 168 -I,S

0,33

15 ВЭ

15,50 сутонв "& Ю

127-132 -5,0

47 67

47,63 б 36

6,28

0,40

1$ 74

1$>87

6 18

;6,05

1$ Ol

15, 09

149-t$6-2,О С П В Sets, а 89 . 0,43 а

° ° н c-Oo

6 2$ !5 444 5 37

6 6° >14 . 15 ° 52 5 ° 9

487!

48,80

15 16

1.4, 76

50 Эб 5 44 15 .13

С П!ПВВЮ

3,9$(CBt)

7 ° 1î(ñ н ) 0>50

143-t$2 -0,7

5&71

5,8Э

14 77

14,34

6 lг

K,58

2,6$(СН ) 44 16 $72

4 »ЭЭЬ 3,56

Ч,З

t0 СВ3 (В 83

0,41

93-102

С„В П ВВЮ

17 11 ! 7&>24

16 24

l6, 39

1$12

15,$0 б 56

Сев» Сану 91

0,44

125-137 0,3

С П ВВВО

46 $1

46,60

O>9$(CBt)

3>1$(СН&) б 18 16 14

6 06 16,30

12 7»

l5 44

1$, 1$

O,4В

l,çî(ñB )

Э,ОО(а!е) СдтП В Ветс 42>93 6 01

t7,а:Э,И

1581

1$,93

$76

6,08

lгl 130 l>г

15 41

15, $2

133 !39 «2,1

СП ВВВЮ

С П В&ВВЮ

48& 76

48>80

6 01

$,92

1,3$(СН&)

3,1$(CH ) l3

O,5О

6 18

Ь, 14

14 37

14, 76

О>30

S 64

5 $2

16 87

1$,09 .

2 р 94(0! ф)

3,4$(СН&) 4S 2$

4Б,З7

1571

l$,В7 б 47

6,06

f48-1$9 +г>б

» Q

9 B CHg П

BB>Bs «g

-н ) ,-к у

1С It ttdereoÿ

СВЬП3211&Пт ООС

I о,гг(сн )

1 > 20(СН&)

2.8о(сн )

О,7O(CB&)

1,$0(CB)

2,50(CB>)

0,9$(QI ) 0,70(снт)

1,00(сн )

2, 71 (СН&)

1 ° 22(CB )

2,8$(CB

1836340

Табл ма

Еиви«о-мимические констаити блеитирмланинсна@тали-1-стлчоаиилов

F 1" I"! ан«та1, тла,, с Г, I(IL4p слектр, «е, и,л,. 0«сс

1 тл

60 1" 1-190

68 189-197

0,58

B0C-L-Pro-С-Pro- -Ars

2-С!у-С!уl.-srS-L-Ars

-12,2

0,45

87 196-205

-12,9

0,62

l1es-D-1.еч-01у-1 -ArB

92 - 167-172

-9,9

0,69

2-0-1,«u-L-Гто-L-Ar8 (4 -BCC,N -2)-т-Lys-l.-Ar8 а ер 87 132-141

0,59 85 . 150-166 0,61

-19,4

1- 3ит

Bsl-L-1!е-С1>-L-Ars, 75 156-160

-38.0

0,61

1-СА0

Тов-С!у"L-Рто-L-ArB

Примечание. ВОС - трет-бутило«сикарбонил(8 - бенаилоисмкарбонил; 11«s - нетилсул«Фоиил) Brl - бенаоил;,Тов-л-толуолтчльаонил а НН-К

О О

sp Я(а блица 6

6" и ""àèèíoíà òàрН=7,-" (0, 067 И) 1)4> Т

Характеристики спектров флуоресценции лин-1-сульфамидов в фосфатном буфере, 1,5-изомеры

N Rg пп

89, "" Еб

Я„„, мм

555

473

810

550

470

700

568

030

568

473

060

549

471

000

475

549

860

547

473

040

473

547

020

460

549

556

050

18, 471

750

481

500

563

СрД5

11 Сз

12 СОНе.

477

750

557

13 Гж(Н, М ) 560

13 477

19 473

640

556

660

480

568

410

I А

8 таблице I = <, где Е " высота полосы эмиссии, а мм, с с 10

1 концентрация в моль/л, А - соотношение максимальной и использо-);Зиной чувствительности прибора. NR> OC)

801К й1

1 Н

2 Н

3 Н

4 Н

5 Н

6 Н

Н

8 Н

9 Н

10 Н

СН

С,11

С Н1

i-С КВ

С28Н9

i-С Н9 е-С„Н

У

Cbni8 с

1,30(СНТ. ВОС), I, Г(Л11, I,75<(1(r)

4 ° 96И2!В ° 21 7 ° 10(САНА, ) I 20((811

3,00(CB)

2,85(CIIB Hos), 0,91(СН ). 3,72((2(e)

5,01(СИ,. 7), 7.310(ССНт. 2) 1 ° 30(СНе), 1,00(а(„ )

1,25(QI7, ВОС), 5,00(131„, 2), 7,76(C«IIS, 2) .

2, 60((311)

7,40(С«Н, Bsl), 7,85(ГАН, Bsl), 8,20(С«Н, Bsl), 0,90((21т1, ),20((Н)

2,28(СН „Тов), 7,?8((„Н, Tos), 7,64(С«11а, Тов), 0,6$(08 1, 1.50((31), 2,50(QI ) 1836340

Таблица 7

Времена 1ОВ-ного гиарояиэв (мин) субстратов яротеояитическнми фермен тами различными трб Паэ ДПС

ТАП Укориназа фактор Ха

Субстрат

ВОС-Ь-Р to-Ь-Phe-Ь Arg

0,67

ВОС-1 -Рто-Ь-Pro-L-Arg йев-D"Lеи-Оlу-L Arg

60 60 13

120 час 1620 1440

660

360 .1 20

Твв-01 у-г;Pro-г.-br g

120 0,67 0,33

120 ч-с 2340 7080

3 . .0,03

120 2

ВС1у-01у-Ь ArgL hrg

П l клк

1 зимечание. концентрация ферментов 1ОО ня, 10 нИ, 1 ня.

Составитель А.Палайма

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор Н.Мил1окова

Редактор Г,Бельская

Заказ 3003 .. Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР . 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина. 101

Е-Ь-Ьее-Е-Уто-Ь hry (В -ВОС,П -П-Я- Куэ-7-ЫВ, ° Ф

lal 7;11е-Оlу"L hrg

П CSfI1

СЭПм

СзПэ Сев с

1-с и

15 . 24 8

18 .. 480 10

1 . 2 30

0,6

ЯИ

00,3

360

5280 300

4220 39

120 120