Способ диагностики иммунодефицитного состояния

 

Использование: медицина, экспресс-диагностика иммунодефицитных состояний. Цель изобретения - повышение точности способа. Сущность изобретения: исследуют фагоцитарную активность лейкоцитов у больного одновременно с контрольным лицом (донором) с заранее установленным уровнем фагоцитоза по отношению к среднему его уровню в контрольной группе здоровых людей. В качестве показателя фагоцитоза дополнительно определяют от-. ношение суммы объектов, поглощенных активными фагоцитами, к общему числу неактивных и малоактивных фагоцитов и результаты исследования у больного выражают в процентах к показателям контрольного лица, пересчитанным на средний уровень показателей в контрольной группе. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК!

1 ГОСУДАРСТВЕННОЕ .ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР)

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

IÊ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (si)s G 01 N 33/53

1 (21) 4856534/14 ,(22) 01.08.90

:(46) 30.08.93. Бюл. N. 32 (71) .Пермский государственный медицинский институт (72) B.Í.Êàïëèí, Д.P.Xà÷àïóðèäçå, Н.М,Валуева и Н,В.Широкова (56) Лабораторные методы исследования в клинике. Справочник/Под ред. B.Â.Ìåíüшикова, M.: 1987, с. 310-311. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ИММУНОДЕФИЦИТНОГО СОСТОЯНИЯ . !(57) Использование: медицина, экспресс-ди-! агностика иммунодефицитных состояний.

1Цель изобретения — повышение точности

Изобретение относится к медицине и

:может быть использовано для выявления недостаточности иммунной защиты и в каче стве показания к углубленному иммунологи, ческому исследованию..

Цель изобретения заключается в повы: :шении точности способа.

Это достигается тем, что в группе доно: ров при одномоментном исследовании уста, навливают нормативное значение фагоцитарного показателя в процентах от

1его среднего значения в группе и отбирают

;лиц, которые служат эталонами среднего, уровня фагоцитоза у здоровых людей, исс ледование у больного производят одновре1менно с лицом, служащим эталоном, по, показателю последнего рассчитывают сред,,: ний уровень фагоцитарного показателя, ре. зультат исследования у больного выражают

„„5U„„1837231 А1 способа. Сущность изобретения: исследуют фагоцитарную активность лейкоцитов у больного одновременно с контрольным лицом (донором) с заранее установленным уровнем фагоцитоза по отношению к среднему его уровню в контрольной группе здоровых людей. В качестве показателя фагоцитоза дополнительно определяют от- . ношение суммы объектов, поглощенных ак тивными фагоцитами, к общему числу неактивных и малоактивных фагоцитов и результаты исследования у больного выражают в процентах к показателям контрольного лица, пересчитанным на средний уровень показателей в контрольной группе. 1 табл. в процентах к этому уровню и при величине полученного показателя ниже его нормативного значения диагностируют недостаточность иммунной защиты. Кроме того, в качестве показателя определяют отношение суммы объектов, поглощенных активными фагоцитами, к общему числу неактивных и малоактивных фагоцитов.

Предлагаемый способ отличается от известного следующими признаками.

В предлагаемом способе устанавливают норматив уровня фагоцитарного показателя и оценку результатов исследования у больного осуществляют по этому нормативу. Величина нормативного показателя не зависит от методики исследования и условий его осуществления.

Исследование у больного проводят одновременно с лицом, служащим эталоном

1837231

10

55 норматива среднего уровня фагоцитарного показателя, и уровень фагоцитарного показателя у больного оценивают по отношению к эталону, В качестве показателя фагоцитоза дополнительно определяют отношение числа обьектов, поглощенных активными фагоцитами к общему числу неактивных и малоактивных фагоцитов.

Способ осуществляют следующим-образом. Для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов цельную кровь, стабилизированную любым антикоагулянтом, смешивают с равным объемом взвеси любых подходящих бактерий (концентрация взвеси — 0,5 — 1 млрд. микробных тел на мл) или эритроцитов из антигенных эритроцитарных диагностикумо9 (концентрация—

50-60 млн. мл), выдерживают в термостате

20 мин. Изготовляют мазки и окрашивают их по Романовскому-Гимзе, При микроскопировании мазка его площадь условно делят. на три части и в каждой из них учитывают по трети от общего числа подсчитываемых лейкоцитов. Определяют фагоцитарную активность 100 изолированно расположенных нейтрофильных лейкоцитов, Определяют процент фагоцитирующих клеток и число объектов, поглощенных каждым фагоцитом. Рассчитывают число обьектов в среднем на каждую из 100 сосчитанных клеток (Фагоцитарный индекс, или число1, Фагоциты распределяют по сте- пени активности на три группы: неактивные (нулевые), малоактивные (с поглощением одного обьекта) и активные(с поглощением двух и более обьектов), Подсчитывают сумму обьектов, поглощенных активными фаго° цитами, и делят ее на общее число неактивных и малоактивных фагоцитов (индекс активности фагоцитов — ИАФ).

Для установления нормативного значения фагоцитарного показателя у взрослых людей и отбора эталонов среднего уровня фагоцитоза одномоментно обследуют группу здоровых людей (доноров) в возрасте 18—

55 лет числом не менее 15. У каждого обследованного определяют величину фагоцитарного индекса (ФИ) и индекса активности фагоцитов (ИАФ), вычисляют среднюю величину каждого показателя и показатели каждого донора выражают в процентах к средней величине соответствующего показателя. Самый высокий и самый низкий относительные показатели служат крайними границами норматива уровня фагоцитоза у здоровых взрослых людей. По многочисленным исследованиям авторов изобретения и материалам литературы крайние границы норматива фагоцитарного индекса составляют 45-171 .

Из обследованных лиц выбирают таких, которые могут служить эталонами среднего уровня фагоцитоза, В качестве таковых берут лиц с относительным уровнем фагоцитарного псказателя, близким к 100 или выше него, При диагностическом исследовании определяют фагоцитарную активность лейкоцитов одновременно у больного и лица, служащего эталоном. По результатам исследования эталона рассчитывают средний уровень фагоцитарного показателя в натуральном выражении. Данные исследования у больного выражают в процентах к этому рассчитанному среднему уровню и сопоставляют с нормативным значением показателя. Выход показателя за пределы нижней границы показателя указывает на недостаточность иммунной защиты, а превышение верхней границы норматива указывает на реактивное повышение фагоцитарной активности лейкоцитов, Для проведения диагностического исследования у детей предварительно формируют норматив фагоцитарного показателя для соответствующей возрастной группы.

Для этого обследуют 20 здоровых детей соответствующего возраста с одним-двумя лицами. служащих эталонами среднего уровня фагоцитарного показателя у взрослых, По результатам исследования у эталона рассчитывают средний уровень фагоцитарного показателя для взрослых и по отношению к нему рассчитывают в процентах величины фагоцитарного показателя у каждого ребенка, Устанавливают норматив верхнего, среднего и нижнего уровней показателя.

Диагностическое исследование у больного ребенка проводят одновременно. с лицом-эталоном. Вышеописанным приемом рассчитывают в процентах величину фагоцитарного показателя у ребенка и сравнивают ее с нормативным показателем этой группы детей.

Пример 1. Диагностическое исследование у взрослого больного туберкулезом.

Для определения норматива уровня фагоцитоза и создания эталонов его уровня обследованы 19 доноров в возрасте от 22 до

45 лет.

В качестве объекта фагоцитоза взяты эритроциты из сухого.эритроцитарного диагностикума из шигелл 3онне, Эритроциты прокрашены насыщенным раствором анилинового красителя черного цвета. отмыты от избытка краски, приготовлена густая взвесь эритроцитов в физрастворе. После отстаивания взвеси в течение 30 мин взя1а

1837231, верхняя часть взвеси. лишенная конгломе, ::ратов эритроцитов, Взвесь разведена физ-!, :раствором до концентрации зритроцитов 50 ,:млH/ìë.

Кровь доноров стабилизирована гепа-!

: : рином из расчета 25 М Е/мл. Кровь в обьеме, 30 мкл смешана с равным объемом взвеси

; :эритроцитов. Все пробы одновременно по: : мещены в термостат на 20 мин при перио: дическом встряхивании пробирок с ! пробами. С помощью устройства для изго: товления мазков на предметных стеклах, .: сделана серия маленьких мазков размером

: 18x3,5 мм перпендикулярно к длиннику

: : стекла. В мазках определен фагоцитарный индекс и индекс активности фагоцитов, Результаты определения фагоцитарно; :го индекса: средняя величина — 0,83,мини; мальная величина - 0,41 (49% от средней

; :величины), максимальная величина 1,20

: (145% от средней). Нормативная величина . :;фагоцитарного индекса — 49 — 145%.

Результаты определения индекса ак: тивности фагоцитов: средняя величина— 0,80, минимальная 0,21 (26% от средней), : максимальная 1,46 (182%). Нормативное

: значение ИАФ вЂ” 26-182%.

Больной туберкулезом, 42 лет, обследован одновременно с донором, служащим

: эталоном, с относительными величинами

ФИ 1 12% и ИАФ 120% от среднего значе ния в вышеприведенной группе доноров.

При исследовании получены следующие результаты: у больного ФИ вЂ” 0.16 и

: ИАФ вЂ” 0,08; у лица-эталона ФЧ вЂ” 0,88 и ИАФ вЂ” 1.41. Расчет по данным эталона среднего уровня фагоцитарных показателей для здо: ровых людей: 100% от ФЧ 0,88 составляет

0,79 и 100% от ИАФ 1,41-1,18. Рассчитан ные к этим величинам относительные уров: :ни составили для ФЧ 20% и для ИАФ 6%.

: По результатам исследования сделано за. ключение о наличии у больного выраженной недостаточности иммунной защиты к нетуберкулезным микробам.

Предло>кенным способом обследованы

38 больных туберкулезом. У 5 из них выявлена недостаточность иммунной защиты с относительной величиной ФЧ 13 — 36% и

ИАФ вЂ” 3 — 14%. У 6 больных установлена стимуляция фагоцитоза с относительными величинами ФЧ 167-288% и ИАФ 190 —.

318 %

Пример 2. Пример диагностического исследования при бронхолегочной патологии у детей.

Девочка в возрасте 1 г,4 мес. с диагнозом: острая респираторная инфекция; двусторонняя очаговая бронхопневмония.

30 П р «е р 3. Пример диагностического.исследования в динамике заболевания, 35

40 таблице.

5

При предварительном определении нормативных показателей у 20 здоровыхдетей в возрасте 1-2 года с эталоном уровня фагоцитоза были установлены следующие показатели в процентах к среднему уровню здоровых взрослых людей: среднее значение ФЧ 84% и его нормативное значение—

46-137%, среднее значение ИАФ 86% и его нормативное значение — 18 — 228%.

Ребенок обследован одновременно с лицом-эталоном с относительным уровнем

ФЧ вЂ” 130% и ИАФ вЂ” 121%. Результаты исследования у больной; ФЧ вЂ” 0.24 и ИАФ—

0,02, соответствующие показатели у эталона — 1,20 и 1,48, Расчет по эталону среднего уровня здоровых людей дает показатели

ФЧ вЂ” 0,92 и ИАФ вЂ” 1,22. Выраженные в процентах данные больной дают относительную величину ФЧ вЂ” 26% и ИАФ вЂ” 2%. Y больной выраженная недостаточность иммунной защиты, особенно по критерию

ИАФ.

При обследовании предлагаемым способом 92 детей от 1 мес. до 3 лет с различными формами бронхолегочной патологии (обструктивный бронхит, острая и хроническая пневмония) выявлена недостаточность иммунной защиты у 61 ребенка (66% положительных результатов) Девочка в возрасте 3 мес., 27-й день заболевания. Диагноз: ОРВИ, двухсторонняя пневмония с затяжным течением, Проведено исследование в динамике заболевания одновременно с постоянным. лицом эталоном с относительными значениями показателей ФЧ вЂ” 132% и ИАФ -120%.

Результаты исследования представлены в

По результатам исследования было сделано заключение о выраженной недостаточности иммунной защиты при первом исследовании и заметном снижении уровня показателей при втором исследовании в сравнении с показателями при выздоровлении, При исследовании в динамике 19 детей с бронхолегочной патологией было установлено снижение показателей относительно периода выздоровления у всех детей.

Формула изобретения

Способ диагностики иммунодефицитного состояния, включающий приго-,овление мазков крови с последующим учетом величины фагоцитоэа в сравнении с контролем, отл ича ю щийс ятем,что,с целью повышения точности способа, в качестве фагоцитарных объектов используют эритроциты, окрашенные анилиновым красителем, 1837231

Индекс активности фагоцитов Фагоцитарный индекс

День заболевания

Больная

Средний уровень здоровых

Эталон

Средний уровень здоровых

Больная

Эталон абс, в,ьк среднему уровню

Bojr к среднему уровню взрослых абс, взрослых взрослых взрослых

0,97

1,88

1,89

19

0,21

0,63

0,98

24

54

1,16

2,26

2,27

0.88

1,17

1.40

0,04

0,36

0,72

1,16

1,54

1,84

27-й

44-й

2 мес, после выздоровления

Составитель В; Каплин

Техред М.Моргентал

Корректор A. Обручар

Редактор

Заказ 2863 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. ужгород, ул.Гагарина, 101 и производят двойной контроль, для чего общее число неактивных и малоактивных предварительно формируют группу доно- фагоцитов, затем по результатам исследоpos, определяют в ней границы крайних вания донора рассчитывают среднюю везначений показателя в процентах к его личину фагоцитарного показателя для средней величине, а величину фагоцитоза. t 5 группы доноров с последующим расчетом учитывают одновременно в мазке пациен- в процентах результата исследования у пата и в мазке донора, при этом регистриру- цивнта относительно этой средней величиют число активных, малоактивных и ны, и при значении показателя ниже его неактивных фагоцитов во всех мазках, мйнимального уровня" вгруппедоноровдиподсчитцвают сумму объектов, поглощен- 10 агностируют иммунодефицитное состояных активными фагоцитами, и делят ее на ние. t