Устройство для тестирования биологически активных соединений с помощью подвижных клеток животного происхождения

 

Использование: в биологии и медицине, а именно в устройстве для тестирования биологически активных соединений с пог мощью хемотаксиса подвижных клеток, которое может найти применение в экспериментальной биологии, онкологии, иммунологии , фармакологии, а также для диагностики в практической медицине. Сущность: устройство содержит нижнюю пластину с множеством открытых с двух концов каналов V-образной формы, представляющих собой нижние полукамеры, В расширенную часть каждого V-образного канала вставлена верхняя полукамера, выполненная в виде индивидуального цилиндра. Под верхнюю полукамеру помещена пористая перегородка в виде индивидуального диска. С помощью четырех пластин, содержащих комплементарные верхним полукамерам сквозные отверстия и снабженных винтами, верхние и нижние полукамеры прижаты друг к другу. В нижнюю полукамеру вносят питательную среду. В верхнюю полукамеру помещают суспензию подвижных клетокмакрофагов с известным количеством клеток . Спустя заданный промежуток времени в нижнюю полукамеру вносят тестируемое биологически активное вещество в рабочих разведениях. За время инкубации происходит процесс миграции подвижных клеток через поры перегородки на ее нижнюю сторону по градиенту концентраций БАВ, Результат регистрируют после фиксации и окрашивания клеток на перегородке по числу клеток на ее обратной стороне. Устройство позволяет снизить трудоемкость работы и повысить воспроизводимость результатов . 2 ил., 2 табл. (Л с со СА 00 Јь О О CJ

СО!03 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

tsi)s С 12 M 1/00

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 4927832/13 (22) 16,04.91 (46) 30.08.93. Бюл. М 32 (71) Предприятие "Биотех-Электрон" Научно-производственного центра медицинской биотехнологии (72) А.Г. Меликянц, Ю.Д. Акимова и К.К. Красовский (73) Предприятие "Биотех-Электрон" Научно-производственного центра медицинской биотехнологии (56) 1. Bignold L.P, Use of spase-роге

policarbonate (NucIeopore) membrane for the

measurement of chemotaxis of

polymorphonuclear еЫсосусез. Comparison

of micro-Boyden s chambers апд estimation

of "drop-off" of cells, Y. Immunolog. Methods, 118 (1989), 217 — 225.

2. Jeffrey S.Â. ес al,. Lymphocyte mobility

and lymphocyte chemoattractant factors, Immunolog ical InvestIg„17 (1988), 625 — 627, (54) УСТРОЙСТВО ДЛЯ ТЕСТИРОВАНИЯ

БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕ-.

НИЙ С ПОМОЩЬЮ ПОДВИЖНЫХ КЛЕТОК

ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ (57) Использование: в биологии и медицине, а именно в устройстве для тестирования биологически активных соединений с по-. мощью хемотаксиса подвижных клеток, которое может найти применение в экспериментальной биологии, онкологии, иммуИзобретение относится к биологии и медицине, а именно к устройству для тестирования биологически активных соединений с помощью хемотаксиса подвижных клеток, которое может найти применение в экспериментальной биологии, онкологии,,. Ы,, 1838400 А3 нологии, фармакологии, а также для диагностики в практической медицине. Сущность; устройство содержит нижнюю пластину с множеством открытых с двух концов каналов V-образной формы, представляющих собой нижние полукамеры. В расширенную часть каждого V-образного канала вставлена верхняя полукамера, выполненная в виде индивидуального цилиндра, Под верхнюю полукамеру помещена пористая перегородка в виде индивидуального диска. С помощью четырех пластин, содержащих комплементарные верхним полукамерам сквозные отверстия и снабженных винтами, верхние и нижние полукамеры прижаты друг к другу. В нижнюю полукамеру вносят питательную среду. В верхнюю полукамеру помещают суспензию подвижных клетокмакрофагов с известным количеством клеток, Спустя заданный промежуток времени в нижнюю полукамеру вносят тестируемое биологически активное вещество в рабочих разведениях, За время инкубации происходит процесс миграции подвижных клеток через поры перегородки на ее нижнюю сторону rio градиенту концентраций БАВ. Результат регистрируют после фиксации и окрашивания клеток на перегородке по числу клеток на ее обратной стороне. Устройство позволяет снизить трудоемкость работы и повысить воспроизводимость результатов. 2 ил., 2 табл. иммунологии, фармакологии, а также для диагностики в практической медицине.

Цель изобретения —. снижение трудоемкости работы и повышение воспроизводимости результатов.

1838400

На фиг. 1 схематически изображено предлагаемое устройство для тестирования, вид с торца; на фиг, 2 — то же. вид сверху.

Устройство содержит нижнюю пластину

1 с множеством открытых с двух концов каналов V-образной формы 2, представляющих собой нижние полукамеры. В расширенную часть 3 каждого V-образного канала вставлена верхняя полукамера 4, выполненная в виде индивидуального цилиндра, Под верхнюю полукамеру 4 помещена пористая перегородка 5 в виде индивидуального диска, С помощью четырех пластин 6, содержащих комплементарные верхним полукамерам 4 сквозные отверстия и снабженных винтами 7, верхние и нижние полукамеры прижаты друг.к другу, .

Устройство для тестирования биологически активных веществ используют следующим образом.

В нижнюю полукамеру 2 вносят питаельную среду таким образом, чтобы после помещения диска иэ пористой перегородки

5 между верхней и нижней полукамерами набл.одалось видимое отсу1ствие пузырей воздуха под ним. В верхнюю полукамеру 4, помещают суспензию подвижных клеток— макрофагов с известным количеством клеток, спустя заданный промежуток времени после оседания клеток на полупроницаемую пористую перегородку 5 и их прикреп-. ления на поверхности перегородки в нижнюю полукамеру 2 вносят тестируемое биологически активное вещество в рабочих разведениях. В результате создается градиент концентрации биологически активного соединения через пористую .перегородку..

Подвижные клетки, например макрофаги, мигрируют через поры перегородки íà ее нижнюю сторону, Температурный режим в ходе работы с клетками — стандартный (37 С). Время, в течение которого происходит миграция клеток, подбирается экспериментально (1-3 ч), Результат регистрируется после фиксации и скрашивания клеток на перегородке по числу клеток, мигрировавших на обратную сторону перегородки.

В качестве полупроницаемых перегородок использованы ядерные поликарбонатные фильтры (ОИЯИ, Дубна). Фильтры подвергали предварительной обработке, в качестве стандартного хемоаттрактанта использован формилметионин-лейцин-фенилаланин (FMLP), В табл..1 и 2 представлены результаты проведения процесса тестирования биологически активного соединения (FMLP) на описанном устройстве.

Как видно иэ данных таблицы 1, временем, достаточным для изучения хемотаксиса макрофагов с помощью описанного устройства, является 1 ч.

Как видно из таблицы 2,,максимальная величина хемотаксиса достигается при концентрации FMLP, равной 10 M.

Описанное устройство обеспечивает снижение трудоемкости работы при тестировании .биологически активных веществ (БАВ) за счет точной дозировки концентраций клеток и тестируемых 6АВ во всех камерах, позволяет осуществлять в ходе опыта дополнительную оксигенацию, замену питательной среды, смену концентрации тестируемого соединения. Использование о описанном устройстве полупроницаемой перегородки в виде индивидуальных дисков вместо сплошного листа в прототипе снижает расход материала этих перегородок. Кроме того, устройство обеспечиьает одновременное проведение множества наблюдений в одинаковых условиях, что способствует повышению воспроизводимости. .результатов,.наличие независимых секций, содержащих множество изолированных камер, представляет дополнительное удобство при проведении тестов с разными временными интервалами, различными соединениями, клетками и другими модификациями схемы проведения измерений, Формула изобретения

Устройство для тестирования биологически активных соединений с помощью подвижных клеток животного происхождения, содержащее дое пластины, нижняя из которых имеет множество нижних полукамер, а верхняя — множество комплементарных этим полукамерам сквозных отверстий, формирующих собой верхние полукамеры, и пористую перегородку, о т л и ч а ю щ е ес я тем, что, с целью снижения трудоемкости работы и повышения воспроизводимости результатов, пористые перегородки выполнены в виде дисков, количество которых соответствует количеству камер, нижние полукамеры. представляют собой открытый с двух концов V-образный канал, а верхние полукамеры — цилиндры, вставленные в расширенную часть V-образных каналов с возможностью прижатия к нижним полукамерам с помощью верхних пластин.

Таблица

Зависимость хемотаксиса подвижных клеток {макрофагов) через поликарбонатный фильтр от времени инкубации в контроле и после предьлвленил им FMLP

Таблица2

Зависимость интенсивности миграции макрофагов от коицентрации FMLP в нижней ll0 лукамере

1838400

Составитель А. Меликян ц

Техред M. Моргентал Корректор T. Вашкович

Редактор

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 2905 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5