Иммунодепрессант

 

(в) RU (») 2ООЯ4О С1 (51) 5 А 61 K 35 78

Комитет Российской Федерации по патентам и тонарным знакам

ОПИСАНИЕ ИЗОБРКТКНИ: ",„1

К ПАТЕНТУ (2l) 4663792/l4 (22) 04.01.89 (46) 30.l1.93 Бюл. ¹ 43-44

Pl) Институт клинической иммунологии C0 AMH

СССР (72) Старокожко Л.Е; Колесникова О.П.; Козлов BA (73) Институт клинической иммунологии СО РАМН (54) ИММУНОДЕПРЕССАНТ (57) Изобретение относится к мели <и»е я ас<»<,< ти к фармакологии и иммунологии. Ljnl I — созл,1 ние иммунодулирующего средства ра<чи;ел<..ног< происхождения. Дпя этого предлагас ся и<.п<1л»зовать препараты на основе корня солодки голой, ко торые могут найти применение для п«»ия путо иммунных, в том числе аллергических < пимфопро— лиферативных заболеваний. 5 табл.

2003340

Результаты исследований приведены в табл, 1.

Как видно из табл. 1, введение глицирама мышам линии СВА и С57В1 обнаруживает его отчетливое иммунодепрессивное действие на гуморальный иммунный ответ данным является усиление функциональных свойств мононуклеарных фагоцитов. Для проверки данной посылки изучено влияние глицирама на фагоцитарную активность спленоцитов из прилипающей фракции клеток селезенки мышей линии С5781. Одно15 временно определено количество клеток, несущих Fc рецепторы (Fc ), Для определения экспрессии рецепторов к Fc фрагментам IgG использовали метод ЕА-розеткообразования, Определение фагоцитарной активности прилипающей фракции спленоцитов проводили по поглощению индикаторных ЕА-комплексов (erythrocyte-antIbody комплекс). Прилипаю20

25 щую фракцию снленоцитов интактных и обработанных глицирамом мышей получали жащей 10% инактивированной сыворотки крупного рогатого скота, После инкубации покровные стекла тщательно промывали в культуральной среде для удаления неприлипших клеток. Индикаторные ЕА частицы готовили путем обработки эритроцитов барана сывороткой, содержащей IgG антитела к данным эритроцитам, в субагглютинирующем разведении, После сенсибилизации эритроцитов антителами в течение 30 мин

37 С, ЕА-комплексы отмывают 3 раза и ro40 товят 0.5 взвесь индикаторных частиц, Взвесь индикаторных ЕА-частиц наслаивали на покровные стекла с прилипающей фракцией спленоцитов,инкубировали в течение 1 ч при 37ОС, Для определения количества Рс клеток покровные стекла тщательно отмывали куль45

50 розе 10 мг/кг, CBA — глицирам по той же схеме и густой экстракт корня солодки в дозе 5 мг/кг. Контрольным животным вводили 0,5 мл дистиллированной воды, Через

2 ч после последнего введения препарата животных иммунизировали внутривенно

2х10 ЭБ в обьеме 0,5 мл. На 4-е сутки после иммунизации животных забивали и опредетуральной средой для удаления не связавшихся с Fc рецепторами ЕА частиц, клетки фиксировали. окрашивали по РомановскогоГимза и подсчитывали процент розеткообраэующих клеток. Подсчитывали в среднем

500 клеток.

Для. определения фагоцитарной активности покровные стекла также тщательно ляли количество антитвлообразующих клеток по числу гемолитических бляшек (БОК) модифицированным методом локального отмывали культуральной средой и дополни емолиза в полужидкой среде. тельно лизировали ЭБ, клетки фиксировали, Изобретение относится к медицине и может быть использовано для профилактики и лечения заболеваний, связанных с нарушением системы иммунитета.

Известно использование ряда препаратов из корня солодки голой (Glyzirhha

gIabra), Известно использование фармакопейного препарата "глицирам". в качестве противовоспалительного и антиаллергического средства. Препарат используют в дозах

0,05-0,1 r 3-4 раза в день в течение до 1 месяца.

Экстракт солодки также является основой таких фармакопейных препаратов как ликуразид и ликвиритон, которые рекомендованы при язвенной болезни желудка и

12-перстной кишки.

Однако иммуномодулирующие свойства препаратов корня солодки голой до сих пор не исследованы и эти препараты не используются как иммуномодуляторы.

Целью изобретения является расширение области применения препаратов на основе корня солодки, а также расширение арсенала иммуномодулирующих средств.

Иммуномодулирующий эффект изучали на мышах линий СВА и С5781 по способности влиять на:

IgM внтителообразование в селезенке

In чЬо (АОК); гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ); количество полипотентных стволовых кроветворных клеток (ПСКК) (эндогенное колониеобразование), Определение количества АОК к эритроцитам барана (ЭБ) в селезенке мышей (линии СВА и С5781 соответственно высоко- и низкоотвечающих Ig M антителообразованием на ЭБ) проводили с препаратом глицирам и густым экстрактом корня солодки голой (ГЭ КС). 8 работе использованы самцы линий СВА и С5781 6-8 недельного возраста, полученные из питомника "Светлые горы". Контрольные и опытные группы составили из 10 мышей. Мышам линии

С57В1 вводили глицирам в максимальной на тимус-зависимый антиген — ЭБ. Аналогичный иммунодепрессивный эффект проявляет густой экстракт корня солодки голой.

10 Одним иэ механизмов подавления первичного гуморального ответа по литературным путем инкубации суспензии клеток селезен30 ки на покровных стеклах в течение 60 мин при 37ОС. Суспензия клеток селезенки приготовлена на культуральной среде, содер2003340

Таблица 1

Влияния глицирама и экстракта. корня солодки на первичный гуморальный имунный ответ на ЗБ у мышей линии СВА и С5781 окрашивали и подсчитывали процент клеток, поглотивших ЕА частицы.

Результаты исследований приведены в табл. 2.

Как видно из данных, глицирам увеличивает фагоцитарную активность. что подтверждает наши результаты о связи подавления гуморального иммунного ответа с усилением функциональных свойств фагоцитирующих клеток.

Данные о влияние глицирама на гиперчувствительность замедленного типа представлены в табл. 3, В опыте использовали мышей самцов линии СВА и С5781 6-8 недельного возраста, полученные из питомника "Светлые rope". Контрольные и опытные группы состояли из 10 мышей. Глицирам вводили в дозе 1 и 10 мг/кг. Контрольным животным вводили 0.5 мл дистиллированной воды, через 2 ч после последнего введения мышам вводили енутрибрюшинно сенсибилизирующую дозу Э Б — 0,25 — 0.5 мл. На 4-й день — под апоневроз задней стопы вводили разрешающую дозу ЭБ — 50 — 0,05 мл, в противоположную лапку — 0,05 мл физиологического раствора. Через 1 сут производили учет реакции по отечности стопы в мм.

Как видно из данных, глицирам оказывает депрессивное влияние на клеточные реакции иммунитета, Эндогенное колониеобразование проводили с препаратом глицирам и густым экстрактом корня солодки голой по 1 5 1, Глицирам 10 мышам СВА вводили в дозе 1,0 мг/кг и 10 животным — в дозе 10,0 мг/кг по описанной схеме. Экстракт корня солодки—

9 мышам в дозе 0,5 мл раствора из расчета

0,1 мг экстракта на мышь, 11 мышам — s дозе

1 мг/мышь, Мышей облучали в дозе 500 R.

Учет результатов эндогенного колониеобразования проводили на 9-е сутки. Результаты опыта представлены в табл. 4.

Как видно из данных, представленных в табл. 4, глицирам в дозе 1 и 10 мг/кг и ГЭ КС

5 в дозе 5 мг/кг вызывают отчетливое снижеwe количества стволовых полипотентных клеток, т.е. препараты обнаруживают депрессивный эффект. ГЭКС также проявляет депрессивный эффект на количество ство10 ловых клеток. Эффект ГЭ КС зависит от дозы препарата. ГЭКС в дозе 5 мг/кг достоверно снижает эндоген нов колониеобразование, в дозе 50 мг/кг — депрессивный эффект несколько слабее, 1S Наши экспериментальные данные об усилении функциональных свойств фагоцитирующих клеток под влиянием глицирама подтверждаются результатами клинических исследований при лечении больных диффуз20 ным нейродермитом препаратами из корня солодки. В комплекса 10 лечебных процедур у больных применяли пенистые ванны с экстрактом корня солодки, кислородный интрагастральный коктейль с 15 раствором

25 глицирама, микроклизмы с 0,15% раствором глицирама..У всех больных отмечено клиническое улучшение, Результаты по определению фагоцитарной активности до и после лечения приведены в табл. 5.

30 На основании изложенного можно сделать вывод об иммунодепрессивных свойствах препаратов корня солодки голой, Следовательно, эти препараты могут найти применение при лечении аутоиммунных (в

35 том числе аутоаллергических) и лимфопролиферативных заболеваний, что значительно расширяет область применения этих препаратов.

40 (56) Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.. 1985, ч, 2, стр. 175-176.

2003340

Продолжение табл. 1

Таблица 2

8лиание глицирама на фагоцитарную активность и экспрессию Fc рецепторов спленоцитов прилипающей фракции клеток селезенки мышей линии С5781

Способ

Таблица 3

8лиляие глицирама на гиперчувствительность замедленного гипа к ЗБ у мыцгей линии CBA и С5, 81

Условия опыта - С5781

1 — — —,Контроль (!

Опыт И Ф Ф ЙЗХ *Ой Ф "= Гличирам

1 мг/кг

10 мг/кг

1,24+0,15

0 P «Q 10

0,88 = -0,08

2003340

Таблица 4

Количество зндогенных колоний а селезенке мывей СВА после введения глицирама и экстракта корня солодки и сублетального облучения животных в дозе 500 R.

Таблица 5

Формула изобретения

Применение препаратов на основв корня солодки. голОЙ в качестве иммунодег1рессанта.

Составитель О. Колесникова

Редактор Т, Пилипенко Техред M.Моргентал Корректор В. Петраш

Тираж Подписное

НПО "Поиск" Роспатента

113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., 4/5

Заказ 3291

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101