Способ выявления иммуноглобулинопатии

 

Изобретение относится к способу выявления иммуноглобулинопатий и может быть использовано в иммунологии. Целью изобретения является повышение точности способа. Способ выявления иммуноглобулинопатии включает внесение сыворотки обследуемых больных и разведений стандартной сыворотки в две пластины агара, одна из которых содержит антисыворотку к γ+λ , а другая - антисыворотку к g+χ цепям иммуноглобулинов, далее измеряют наружный диаметр кольца преципитации в пластине агара, содержащее антисыворотку к g+λ (А) и в пластине агара, содержащего антисыворотку к g+χ (B), затем определяют отношение измеренных диаметров (A/B), определяют отношение количества JgG, полученного на пластине с антисывороткой к g+χ (D) к количеству JgG, полученному в пластине с антисывороткой к g+χ (C) и при изменении хотя бы одного из параметров A, B, D,/C за пределы 0,75< A < 0,85; B = 1; 0,81 < D/C < 1,29, выявляют иммуноглобулинопатию. Способ позволяет кроме диагностирования иммуноглобулинопатии определять и ее тип при ранжировании результатов. 2 табл.

Изобретение относится к медицине, в частности иммунологии, и может быть использовано для диагностики иммуноглобулинопатий.

Иммуноглобулинопатии являются наиболее часто встречающимся нарушением гуморального иммунитета, выявление которых необходимо для диагностики заболеваний разного генеза, понимания механизмов развития клинической симптоматики и выбора оптимальных лечебных мероприятий. В 1981 г. Рабочая комиссия ВОЗ опубликовала Меморандум, в котором предлагаются 8 методов для выявления нарушений гуморального иммунитета и дается оценка необходимости и пригодности их использования в клинической иммунологии. Необходимыми методами для выявления иммуноглобулинопатий являются радиальная иммунодиффузия в геле (РИД) для количественного определения иммуноглобулинов и иммуноэлектрофорез для типирования моноклональных иммуноглобулинов. Однако методы, предлагаемые ВОЗ, недостаточны для выявления трудно диагностируемых форм иммуноглобулинопатий и не могут быть использованы в таком объеме для скрининг-диагностики этих нарушений гуморального иммунитета.

Известен метод двойных колец с антисыворотками, содержащими 2 типа антител - к γ-цепи и к одному из типов легкой цепи иммуноглобулинов, антисыворотки-системы γ+λ и γ+κ, с помощью которого определяют тип G-парапротеина, а также количество нормального IgG при G-парапротеинемии. Определение типа G-парапротеина основано на учете количества колец преципитации, образованных в каждой системе, а для определения количества нормального IgG при G-парапротеинемии κ типа измеряют диаметр внутреннего кольца преципитации в системе γ+λ, а при G-парапротеинемии λ -типа - диаметр внутреннего кольца в системе γ+κ и по калибровочной кривой, выражающей зависимость диаметра кольца преципитации при каждом разведении стандарта от соответствующей концентрации IgG в нем рассчитывают количество IgG в испытываемых сыворотках.

Однако метод двойных колец с анти- γ+λ и γ+κ используют при подозрении на присутствие в сыворотке G-парапротеина для его типирования, т.е. этот способ имеет ограниченное применение лишь для определения типа G-парапротеина - только одного варианта моноклональной иммуноглобулинопатии. Для диагностики других вариантов иммуноглобулинопатий требуются дополнительные исследования.

Цель изобретения состоит в одномоментном выявлении широкого спектра иммуноглобулинопатий.

Поставленная цель достигается тем, что разведения стандартной сыворотки и испытываемые сыворотки вносят в лунки на двух пластинах, в одной из которых агар смешан с антисывороткой-системой γ+λ, в другой - с анти γ+κ. Через 24 ч инкубации во влажной камере пластины высушивают, отмывают, окрашивают и измеряют диаметры колец преципитации так, как это описано для постановки обычного варианта РИД с целью количественного определения иммуноглобулинов. Способ отличается тем, что по результатам измерения диаметров колец и количества IgG для каждой испытуемой сыворотки, внесенной на пластину с анти γ+λ и анти γ+κ, определяют отношение диаметра внутреннего кольца преципитации к диаметру наружного кольца: это отношение для системы γ+λ обозначают буквой А, а для системы γ+κ - В (при наличии одного кольца преципитации, когда диаметр внутреннего кольца равен наружному, их отношение в данной системе равно 1. Рассчитывают количество IgG, как это описано в прототипе, уровень которого для системы γ+λ обозначают буквой С и для системы γ+κ - Д, и определяют отношение Д к С. Сопоставляют значения этих показателей в испытываемых сыворотках больных с аналогичными показателями у здоровых и при отклонении одного двух или трех показателей диагностируют иммуноглобулинопатию.

В табл. 1 представлены результаты исследования 200 сывороток здоровых методом двойных колец с антисыворотками-системами γ+λ и γ+κ по данным определения отношений диаметров внутренних и наружных колец преципитации по каждой системе - соответственно А и В и установления отношения Д к С: даны средние значения этих показателей и их колебания с вероятностью 95%.

Результаты определения А, В и Д/C для каждой испытываемой сыворотки сравнивают с возможными колебаниями аналогичных показателей у здоровых представленными в таблице, т.е. если в сыворотке больного величина А менее 0,75 или более 0,85, величина В равна или менее 1 и отношение Д/C менее 0,81 или более 1,29, то у больного диагностируют иммуноглобулинопатию.

В табл. 2 даны уровни А, В и Д/C, полученные для каждой сыворотки после измерения диаметров внутреннего и наружного колец преципитации на каждой пластине и расчета количества IgG по калибровочной кривой стандартной сыворотки.

Сопоставление величины этих показателей в испытываемых сыворотках с аналогичными показателями у здоровых, представленных в табл. 2, устанавливает отклонение одного двух или трех показателей от нормы, что является диагностическим критерием иммуноглобулинопатии разного вида.

Формула изобретения

СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОПАТИИ путем внесения исследуемой сыворотки больного и разведений стандартной сыворотки в две пластины агара, одна из которых содержит антисыворотку к γ и λ , а другая - антисыворотку к γ и κ цепям иммуноглобулина с последующим учетом колец преципитации, измерением диаметра внутренних и наружных колец, определением количества JgG, отличающийся тем, что рассчитывают показатель отношения диаметра внутреннего кольца к наружному на обеих пластинах и показатель отношения количества JgG одной пластины к другой и при отклонении хотя бы одного показателя от показателя 0,75 или более 0,85, полученного на пластине с антисыворотками γ и λ , показателя 1 или менее, полученного на пластине с антисыворотками γ и κ и показателя 0,8 или более 1,3, полученного при соотношении JgG, выявляют иммуноглобулинопатию.

РИСУНКИ

Рисунок 1