Планшет для иммунодиффузионного анализа

 

Использование: изобретение относится к области медицинского иммунологического анализа, а именно к конструкции планшетов для иммунодиффузионного анализа. Целью изобретения является повышение оперативности проведения иммунологического анализа. Сущность изобретения: на крышке планшета выполнен выступ с плоской поверхностью контуром, подобным контуру основания, и размерами меньшими, чем последнее, но позволяющими обработать рабочую часть геля путем отжима геля выступом крышки через фильтровальную бумагу после окончания реакции иммунодиффузии. Это позволяет сократить время обработки геля (отмывка, окрашивание) перед учетом реакции. 2 ил.

Изобретение относится к области медицинского иммунологического анализа, а именно к конструкции планшетов для иммунодиффузионного метода исследования.

Известны планшеты для проведения иммунодиффузионного анализа, выпускаемые серийно фирмой "Behringwerke" ФРГ, Марбург [1] Они рассчитаны на учет результатов реакции в нативном геле без предварительного окрашивания преципитатов. В ряде случаев, связанных с образованием преципитата низкой плотности, это затрудняет учет реакции либо даже заставляет сделать ложный вывод об отсутствии преципитата. Такими особенностями обладают, например, преципитаты, образующиеся за счет минорных антигенных детерминант, или в случае структурной неполноценности исследуемых молекул, связанной с дефектом синтеза либо протеолитической фрагментацией, или при низкой концентрации исследуемого белка в образце. В указанных случаях для правильного учета результатов реакции необходимо окрашивание преципитата.

Для эффективной окраски преципитата красителями, связывающимися с белками, а именно они применяются в иммунохимических исследованиях, необходимо удалить из геля все белки, не вошедшие в состав преципитата, иначе их присутствие резко усилит фон и снизит эффективность окраски. Для удаления несвязавшихся белков используют отмывку в гипертоническом или физиологическом растворе хлорида натрия (солевой раствор). При этом гель толщиной 1 мм (стандартная толщина для РИД) отмывают в течение 1,5-2 сут. периодически меняя солевой раствор. Если же перед отмывкой гель отжать под прессом, состоящим из нескольких слоев фильтровальной бумаги, это позволит, во-первых, удалить значительную часть несвязавшегося белка вместе с буфером, впитывающимся в фильтровальную бумагу, во-вторых, значительно уменьшить толщину геля и сократить тем самым время отмывки в солевом растворе до 15-20 мин. Кроме того, перед окрашиванием гель необходимо высушить, чтобы уменьшить неспецифическую диффузию в него свободного красителя. Предварительный отжим геля под прессом сокращает процедуру высушивания с нескольких часов до 10-15 мин.

Наиболее близким к изобретению является средство для проведения иммунодиффузионного анализа, предлагаемое в методическом руководстве по иммунохимии и биохимии [2] Для проведения иммунодиффузионного анализа используются чашки Петри, в которых присутствует слой геля. Постановка реакции преципитации и ее оценка предполагает проведение операции окрашивания преципитатов. При этом осуществляется этап элюирования из нативного геля несвязавшихся белков физиологическим раствором с последующим высушиванием геля, покрытого листком фильтровальной бумаги, в термостате.

Таким образом, указанное техническое решение позволяет проводить оценку результатов в случае образования преципитатов низкой плотности, однако этапы отмывки и высушивания длительны (порядка 1,5-2 сут.).

Целью изобретения является повышение оперативности анализа, его упрощение.

На фиг. 1 изображен планшет для иммунодиффузионного анализа в исходном положении; на фиг. 2 то же, в момент обработки (отжима) геля после завершения иммунодиффузионной реакции.

Предлагаемый планшет для иммунодиффузионного анализа имеет крышку 1 и основание 2, представляющее собой емкость с плоским дном и боковыми стенками такой высоты, которая обеспечивает размещение в нем слоя нативного геля 3, а также нескольких слоев фильтровальной бумаги 4 во время отжима геля под прессом, функцию которого выполняет крышка, на внешней стороне которой выполнен выступ 5 с плоской поверхностью 6 контуром, подобным контуру основания, и размерами, достаточными для обработки рабочей части геля.

Работают с планшетом следующим образом. В исходном положении (при хранении и проведении иммунодиффузии) крышка 1 закрывает основание 2, предохраняя гель 3 от высыхания и повреждения.

После завершения реакции и перед отмывкой геля отжимают жидкость (рабочий буфер) из геля 3 с помощью крышки 1 на основании 2. Для этого оператор помещает в основание 2 на слой геля 3 несколько слоев фильтровальной бумаги 4, переворачивает крышку 1 и помещает ее в емкость так, что выступ 5 на крышке 1 входит во внутреннюю полость и оказывает давление на рабочую часть геля 3 через фильтровальную бумагу 4 (см. фиг. 2). Процедура отжима занимает не более 10-15 мин. После этого гель высушивают, отмывают в солевом растворе 15-20 мин и окрашивают.

Формула изобретения

ПЛАНШЕТ ДЛЯ ИММУНОДИФФУЗИОННОГО АНАЛИЗА, состоящий из крышки и основания в виде емкости с плоским дном и боковыми стенками, выполненной с возможностью размещения слоя нативного геля и фильтровальной бумаги, отличающийся тем, что на крышке с наружной стороны дополнительно выполнен выступ с плоской поверхностью и размерами, обеспечивающими перекрытие рабочей части геля для осуществления его отжима.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2