Способ получения ингибитора прорастания уредоспор возбудителя ржавчины пшеницы

 

Использование: фитопатология и может быть использован для изучения индукторов и супрессоров фитопатогенных грибов, установления их химической природы. Суспензию жизнеспособных уредоспор центрифугируют в ступенчатом градиенте плотности охлажденной сахарозы при концентрациях 60, 50 и 40% при факторе разделения не более 850 g и продолжительности 1 час. Выделяют фракцию, расположенную между 40 и 50% растворами сахарозы в виде белой полосы. Раствор ингибитора прорастания угнетает прорастаемость уредоспор желтой ржавчины на 71% и стеблевой ржавчины пшеницы на 63%, а коэффициент инфекционности уменьшается на 94 и 95% по сравнению с контролем соответственно .

Заявляемое техническое решение относится к области фитопатологии и может быть использовано для изучения индукторов и супрессоров фитопатогенных грибов, установления их химической природы. Как известно, взаимодействие индукторов и супрессоров с соответствующими рецепторами у растения контролирует характер развития инфекции /1,2,3/.

Заявляемое техническое решение аналогов не имеет.

Способ осуществляется следующим образом. В центрифужную пробирку поочередно наслаивают 60, 50 и 40-ные охлажденные растворы сахарозы, сверху осторожно наливают небольшое количество суспензии жизнеспособных спор в буферном растворе, например, фосфатном. Пробирку помешают в угловой ротор центрифуги и центрифугируют при факторе разделения не более 850g в течение часа. Между слоями растворов сахарозы с концентрациями 40 и 50 концентрируется фракция (белая полоса) слизистых веществ, содержащих ингибитор прорастания. Фракцию, содержащую ингибитор прорастания, шприцем извлекают из пробирки, фильтруют через бумажный фильтр и отмывают от сахарозы дистиллированной водой. Раствор, содержаший ингибитор прорастания, высушивают на лиофильной сушилке, сухой остаток представляет собой ингибитор прорастания.

Заявляемый способ иллюстрируется следующими примерами. Пример 1. 100 мг жизнеспособных уредоспор возбудителя желтой ржавчины пшеницы суспендируют в 1,5 мл охлажденного 0,05 М фосфатного буфера рН 7,2. В центрифужную пробирку осторожно наслаивают поочередно по 2 мл 60, 50 и 40% ные охлажденные растворы сахарозы, сверху наливают суспензию уредоспор. Центрифугирование ведут при температуре 5^oС на центрифуге ОПН 8 с угловым ротором при 3 000 об/ мин (фактор разделения≈850g) в течение 1 часа Между слоями растворов сахарозы с концентрациями 40 и 50 концентрируется фракция в виде белой полосы, содержащая слизистые вещества (ингибитор прорастания), которую извлекают из пробирки шприцем. Затем фракцию фильтруют через бумажный фильтр и подвергают диализу против 500 объемов дистиллированной воды при 4^o С в течение 20 часов. Раствор, содержащий ингибитор прорастания (100 мл), высушивают на лиофильной сушилке и получают ингибитор прорастания, представляющий собой белое или слегка кремоватое вещество аморфного вида.

Из 100 мл выделенной фракции получают 6 2 мг сухого вещества. Содержание белка в этом веществе составляет 1,1 мг. Остальную массу вещества составляют углеводы, в основном глюкоза, галактоза и манноза.

Высушенное вещество "полосы" испытывают в концентрации 0,001% водного раствора. Этот раствор смешивают с 2% агар-агаром в соотношении 1:1 и разливают на предметные стекла. На них напыляют свежесобранные, с жизнеспособностью не менее 95 уредоспоры; чашки Петри с предметными стеклами инкубируют в термостате при температуре 12^o С для спор желтой ржавчины и 22^o С для спор стеблевой. Продолжительность инкубации 18 часов. Прорастаемость определяют по среднему числу проросших спор из сотни учтенных. Просматривают не менее 400 уредоспор.

Раствор ингибитора прорастания угнетает прорастаемость уредоспор желтой ржавчины пшеницы на 71% Коэффициент инфекционности понижается на 94% по сравнению с контролем. Контроль: уредоспоры, обработанные охлажденным 0,05 М фосфатным буфером рН 7,2.

Пример 2. 100 мг жизнеспособных спор возбудителя стеблевой ржавчины пшеницы суспендируют в 1,5 мл охлажденного 0,05 М фосфатного буфера рН 7,2 Далее, как в примере 1.

Раствор ингибитора прорастания угнетает прорастаемость уредоспор стеблевой ржавчины пшеницы на 63 а коэффициент инфекционности уменьшается на 95 по сравнению с контролем.

Заявляемый способ может найти применение при разработке химических индукторов иммунитета пшеницы к ржавчинным болезням.

Формула изобретения

Способ получения ингибитора прорастания уредоспор возбудителя ржавчины пшеницы, заключающийся в том, что суспензию жизнеспособных уредоспор подвергают воздействию центробежного поля в ступенчатом градиенте раствора сахарозы с концентрацией 60, 50 и 40% при факторе разделения не более 850 g в течение 1 ч, полученную при этом фракцию, расположенную между 50 и 40% растворами сахарозы в виде белой полосы, содержащую слизистые вещества, отделяют, фильтруют, подвергают диализу против дистиллированной воды и лиофильно высушивают.